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    基于密度泛函理論下多肽光譜性質(zhì)研究

    2021-10-17 01:34:42楊云帆胡建波劉永剛劉強強徐建潔郭騰霄
    光譜學(xué)與光譜分析 2021年10期
    關(guān)鍵詞:激發(fā)態(tài)殘基吸收光譜

    楊云帆, 胡建波, 劉永剛, 2*, 劉強強, 張 航, 徐建潔, 郭騰霄

    1. 西南科技大學(xué)環(huán)境友好能源材料國家重點實驗室, 四川 綿陽 621010 2. 中國工程物理研究院激光聚變研究中心, 四川 綿陽 621010 3. 四川輕化工大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院, 四川 自貢 643002 4. 中國工程物理研究院流體物理研究所, 四川 綿陽 621900 5. 國民核生化災(zāi)害防護國家重點實驗室, 北京 102205

    引 言

    多肽分子是由多種氨基酸殘基構(gòu)成, 其中酪氨酸、 色氨酸、 苯丙氨酸在紫外可見區(qū)域有熒光效應(yīng)[1], 多肽也是蛋白質(zhì)的組成單元和功能單元, 參與人體的生命活動, 具有出色的生物相容性和化學(xué)可修飾性, 因此在納米藥物制備, 熒光探針等領(lǐng)域有著良好的應(yīng)用前景[2-3]。 紫外-可見吸收光譜與熒光光譜是研究生物分子的重要手段, 可利用其對分子精細結(jié)構(gòu)進行表征, 在探究不同體系的狀態(tài)變化, 反應(yīng)歷程等動力學(xué)問題時, 起到了重要的作用。

    由于泛函的精確度和作用范圍的不斷提升, 密度泛函理論(DFT)[4]和含時密度泛函理論(TDDFT)[5]成為研究分子基態(tài)與激發(fā)態(tài)性質(zhì)最常用的方法。 隨著電子結(jié)構(gòu)理論研究的不斷完善, 模擬計算對激發(fā)能(ΔE)和躍遷矩(譜強度)的預(yù)測變得越來越準(zhǔn)確[6], 計算小體系有機分子的紫外-可見吸收光譜和熒光光譜與實驗值的吻合程度越來越高。 國內(nèi)外對于小體系有機分子的激發(fā)態(tài)光譜的理論計算做了大量的研究, 通過不同的方法, 在對小體系的激發(fā)態(tài)進行計算時, 可以擬合出與實驗結(jié)果吻合度很高的吸收與發(fā)射光譜, 國內(nèi)外的研究者對三種氨基酸的基態(tài)構(gòu)型和熒光光譜進行了理論計算研究; Boo和Ryu等[7]對有機分子Di-9H-fluoren-9-yldimethylsilane的構(gòu)型對其熒光光譜的影響做了理論計算研究; Dai等[8]對有機分子A100 MOF的熒光光譜和紫外-可見吸收光譜進行了理論計算, 并探究其發(fā)光機理。 但當(dāng)計算的對象體系較大(多肽等生物大分子)時, 通過傳統(tǒng)的TDDFT理論來計算其激發(fā)態(tài)光譜較為困難, 關(guān)于激發(fā)態(tài)性質(zhì)的密度泛函研究鮮有報道。

    采用TDDFT/TDA高精度量子化學(xué)計算方法解決TDDFT計算大體系物質(zhì)激發(fā)態(tài)困難的問題, 選取多肽模擬物生長激素釋放肽-6(GHRP-6)和催產(chǎn)素(Oxytocin)作為較大體系的激發(fā)態(tài)理論計算研究對象, 通過TDDFT/TDA對多肽的激發(fā)態(tài)進行計算, 建立了適用于多肽類物質(zhì)的紫外可見光譜和熒光光譜計算模型, 為較大體系多肽類物質(zhì)的光譜研究提供參考與借鑒。

    圖1 生長激素釋放肽-6(a)與催產(chǎn)素(b)的2D結(jié)構(gòu)圖

    1 實驗部分

    采用BP86, B3LYP/def2-SVP(def2/J, def2-SVP/C)計算條件, 為更加充分地考慮分子間弱相互作用, 添加基于BJ阻尼的D3色散矯正[9], 在此條件下優(yōu)化GHRP-6和Oxytocin的基態(tài)幾何結(jié)構(gòu), 并且通過頻率分析確定沒有虛頻, 優(yōu)化的各收斂限度為: 能量變化(Energy Change): 5.000 0×10-6Eh; 最大梯度變化(Max. Gradient): 3.000 0×10-4Eh·bohr-1; 均方根梯度變化(RMS Gradient): 1.000 0×10-4Eh·bohr-1; 最大位移(Max. Displacement): 4.000 0×10-3bohr; 均方根位移(RMS Displacement): 2.000 0×10-3bohr。 達到各收斂限度且振動分析無虛頻即證明優(yōu)化完成的結(jié)構(gòu)為分子的最穩(wěn)定形態(tài)。 激發(fā)態(tài)計算采用相同計算條件, 在不影響計算精度的情況下, 引入RI積分近似和Tamm-Dancoff近似(TDA)來縮短計算時間。 利用該方法對多肽進行幾何優(yōu)化和激發(fā)態(tài)計算, 以上計算過程在ORCA[10]程序包下進行。

    在對激發(fā)態(tài)性質(zhì)進行計算時, 當(dāng)缺乏計算資源或者研究對象的體系較大時, 研究電子躍遷過程將極大的增加計算耗時。 因此對于多肽類物質(zhì)這種較大體系的分子, 計算其激發(fā)態(tài)性質(zhì)時, 采用TDA近似來加速激發(fā)態(tài)計算過程。 對于完整的TDDFT, 含有非赫米特特征值問題[11],

    (1)

    式(1)中,A,B為旋軌Hessian矩陣,X,Y為特征函數(shù), 為相應(yīng)的特征值。 由于解出這一問題比較耗時, Hirata and Head-Gordon就提出了Tamm-Dancoff近似, 忽略其中B矩陣的貢獻。 將兩個特征值問題轉(zhuǎn)化為一個,

    At=ωTDAt

    (2)

    由此,X被t取代,ω被ωTDA取代。 此近似會稍微高估激發(fā)能, 但大大減少計算成本, 在對較大體系, 如大多數(shù)生物分子進行激發(fā)態(tài)計算時, 使用此近似可以在節(jié)省計算時間的同時保證計算精度, 得到與實驗值吻合較高的計算結(jié)果。

    1.1 紫外-可見吸收光譜

    當(dāng)光波作用在物質(zhì)上時, 物質(zhì)內(nèi)部的電子將吸收光子能量, 產(chǎn)生從基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)的電子能級躍遷, 在電子能級躍遷的過程中伴隨著振動能級和轉(zhuǎn)動能級躍遷, 因此, 紫外可見吸收光譜為“帶狀光譜”。 電子能級躍遷所需能量較大, 一般會落在紫外可見區(qū)域(200~800 nm)。 電子躍遷符合量子化規(guī)則, 因此紫外-可見吸收光譜具有“指紋性”特征, 可以利用紫外-可見吸收光譜對物質(zhì)做定性定量分析。 研究中對優(yōu)化完成的多肽的結(jié)構(gòu)進行激發(fā)態(tài)的單點能計算, 得到與實驗值波長范圍相同的所有激發(fā)態(tài)能級的躍遷能, 獲得分子的紫外-可見吸收光譜[12]。

    1.2 熒光光譜

    光學(xué)吸收或發(fā)射過程中, 熒光是由自旋允許的單重態(tài)到單重態(tài)的躍遷發(fā)射產(chǎn)生。

    S1→S0+hv

    (3)

    分子熒光的強度受分子結(jié)構(gòu)中的剛性平面影響較大, 在組成多肽的多種氨基酸中, 具有熒光效應(yīng)的主要是三種芳香族氨基酸(色氨酸, 酪氨酸, 苯丙氨酸), 三種氨基酸中均存在的離域π鍵, 其熒光主要由π→π*輻射躍遷產(chǎn)生。 多肽類物質(zhì)的熒光發(fā)射符合Kasha規(guī)則, 對于熒光光譜的計算, 通過優(yōu)化多肽分子第一激發(fā)態(tài)(S1)的結(jié)構(gòu), 根據(jù)S1結(jié)構(gòu)的分子前線軌道, 預(yù)測熒光發(fā)射波長的范圍; 計算第一激發(fā)態(tài)到基態(tài)的躍遷能, 得到分子的熒光光譜。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 基態(tài)結(jié)構(gòu)優(yōu)化與振動分析

    通過DFT方法優(yōu)化GHRP-6和Oxytocin兩種肽氣相的幾何結(jié)構(gòu), 優(yōu)化得到的幾何結(jié)構(gòu)見圖2(a), 圖3(a), 對優(yōu)化后的結(jié)構(gòu)進行振動分析, 確認(rèn)沒有虛頻, 表明該結(jié)構(gòu)為基態(tài)最穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)[圖2(b)]。 GHRP-6含有6個氨基酸殘基, Oxytocin含有9個氨基酸殘基。

    圖2 GHRP-6優(yōu)化后的分子結(jié)構(gòu)圖(a)和振動光譜圖(b)

    圖3 催產(chǎn)素優(yōu)化后的分子結(jié)構(gòu)圖與振動光譜圖

    根據(jù)優(yōu)化后的結(jié)構(gòu), 得到兩者多肽中芳香族氨基酸的環(huán)與相連原子的二面角, 如表1所示, GHRP-6結(jié)構(gòu)中存在兩個熒光貢獻基團(色氨酸, TRP), 其二面角更接近平面, Oxytocin上有一個熒光貢獻基團(酪氨酸, TYR), 其二面角為14.37°, 與GHRP-6相比, 結(jié)構(gòu)的剛性平面程度和共軛程度更差。

    表1 多肽結(jié)構(gòu)中芳香族氨基酸與相連原子的二面角

    2.2 紫外-可見吸收光譜理論模型建立

    以優(yōu)化完成后的分子結(jié)構(gòu)為對象, 用TDDFT方法計算兩種肽類物質(zhì)的單重態(tài)的激發(fā)態(tài)躍遷能, 得到兩種肽類物質(zhì)的紫外-可見吸收光譜, 并與實驗結(jié)果進行比較。 通過對比計算結(jié)果, 及其他研究者的工作, 得出了以下結(jié)論[6, 13-14]: 當(dāng)計算對象的體系越大, 剛性平面程度越低時, 應(yīng)選取Hartree-Fock(HF)交換成份越高的泛函進行計算。 采用不含HF成份的BP86泛函計算6個氨基酸殘基的GHRP-6的紫外-可見吸收光譜與實驗值吻合程度最高; 采用HF成份為20%的B3LYP計算9個氨基酸殘基的Oxytocin與實驗值吻合程度最高。 計算結(jié)果見圖4(a,b)。

    從圖4可以看出, 計算得到的紫外-可見吸收光譜與實驗值基本吻合, 實驗測得的GHRP-6的紫外-可見吸收光譜最大吸收波長為279 nm, 計算得到的最大吸收波長為282 nm, 誤差為3 nm, 誤差百分比小于2%[見圖4(a)]; Oxytocin紫外-可見吸收光譜的實驗值為275 nm, 計算值為269 nm, 誤差為6 nm, 誤差百分比小于3%[見圖4(b)]。 圖4(a)中的240~320 nm范圍內(nèi)的吸收峰為GHRP-6的本征吸收峰, 由分子結(jié)構(gòu)中π→π*軌道躍遷產(chǎn)生, GHRP-6分子收到光子激發(fā)后, 氨基酸殘基中的離域π鍵被激發(fā)躍遷至反鍵軌道, 產(chǎn)生279 nm的紫外吸收本征吸收峰; 催產(chǎn)素的紫外-可見吸收光譜中[圖4(b)], 主要貢獻為結(jié)構(gòu)中酪氨酸上的π→π*軌道躍遷。 在200~240 nm范圍內(nèi)存在的吸收譜帶是由于電子躍遷過程中相互碰撞引起二次躍遷產(chǎn)生的, 不屬于分子的本征吸收峰。 由此通過實驗驗證了該方法建立紫外-可見吸收光譜理論模型的準(zhǔn)確性和可行性。

    圖4 GHRP-6(a)和Oxytocin(b)紫外-可見吸收光譜的計算值和實驗值

    2.3 熒光光譜理論模型建立

    采用兩種方法計算多肽類物質(zhì)的熒光光譜: (1)根據(jù)分子前線軌道圖中芳香族氨基酸的π*→π軌道躍遷間的gap值, 預(yù)測分子的熒光峰位置; (2)對單重態(tài)第一激發(fā)態(tài)進行優(yōu)化, 獲得結(jié)構(gòu)的第一激發(fā)態(tài)到基態(tài)的輻射能量, 根據(jù)高斯展寬得到多肽類物質(zhì)的熒光光譜。

    通過計算得到GHRP-6, Oxytocin的分子前線軌道能量, GHRP-6中位于色氨酸殘基的π*→π軌道躍遷為GHRP-6產(chǎn)生熒光的主要貢獻; Oxytocin中位于酪氨酸殘基的π*→π軌道躍遷為Oxytocin產(chǎn)生熒光的主要貢獻。 如圖5(a)所示, GHRP-6中色氨酸殘基上的π*→π軌道間的gap值為3.58 eV, 計算得到產(chǎn)生熒光的波長為346 nm, 與實驗值360 nm間誤差為14 nm, 誤差百分比約為4%; 如圖5(b)所示Oxytocin中酪氨酸殘基上的π*→π軌道間的gap值為4.18 eV, 計算得到產(chǎn)生熒光的波長為296 nm, 與實驗值312 nm間誤差為16 nm, 誤差百分比約為5%。 通過此方法, 可以模擬出分子中產(chǎn)生熒光的主要貢獻位置, 在不考慮電子相關(guān)的情況下, 可以較為準(zhǔn)確的預(yù)測出分子發(fā)出熒光所在的波長范圍, 對分子熒光的理論計算和實驗具有指導(dǎo)意義。

    圖5 GHRP-6(a)和Oxytocin(b)分子前線軌道的π*→π躍遷

    通過計算得到GHRP-6和Oxytocin從第一激發(fā)態(tài)躍遷到基態(tài)的躍遷能, 通過高斯展寬后得到的熒光光譜。 GHRP-6熒光光譜計算值為368 nm, 實驗值為360 nm, 與實驗值的誤差為8 nm, 誤差百分比小于3%; Oxytocin熒光光譜計算值為305 nm, 實驗值為312 nm, 與實驗值的誤差為7 nm, 誤差百分比小于3%。 GHRP-6產(chǎn)生熒光的發(fā)射波長與色氨酸產(chǎn)生的熒光波長近似, 說明GHRP-6產(chǎn)生熒光的主要貢獻為色氨酸殘基上的π*→π軌道躍遷, 色氨酸殘基與相連原子的二面角為7.08°, 2.54°, 分子的共平面程度較高, 呈現(xiàn)較強的剛性平面結(jié)構(gòu), 會增加熒光強度。 GHRP-6分子結(jié)構(gòu)受到紫外吸收本征激發(fā)光的照射, 分子被激發(fā)后, 躍遷至單重第一激發(fā)態(tài)(S1)的π*軌道, 當(dāng)分子躍遷回基態(tài)(S0)的 π軌道時, 即發(fā)出360 nm波長的熒光。 Oxytocin熒光峰位置與酪氨酸產(chǎn)生的熒光波長相似, Oxytocin產(chǎn)生熒光的主要貢獻為酪氨酸殘基上的π軌道躍遷, 酪氨酸殘基與其相連的原子的二面角為14.37°, 剛性平面程度相比于色氨酸較低, 熒光強度弱于色氨酸。

    通過對GHRP-6的激發(fā)態(tài)計算, 證明可以通過本計算方法針對較大體系的多肽類物質(zhì), 計算其激發(fā)態(tài)下的紫外吸收光譜和熒光光譜, 分析其激發(fā)態(tài)下電子光譜的發(fā)生機理, 且與實驗值吻合程度較高, 誤差均在5%以內(nèi)。 由此理論和實驗結(jié)果驗證了采用密度泛函理論計算建立熒光光譜理論模型的可行性。

    圖6 GHRP-6(a)和Oxytocin(b)的熒光光譜的計算值和實驗值

    3 結(jié) 論

    采用DFT與TDDFT方法, 在不影響計算精度的情況下引入TDA, RI等近似, 對較大體系的多肽類物質(zhì)進行激發(fā)態(tài)計算, 得到紫外吸收光譜與熒光光譜的理論計算模型, 研究其結(jié)構(gòu)性質(zhì)與發(fā)光機理。 并與實驗值對比得到如下結(jié)論:

    (1)通過計算GHRP-6和Oxytocin的紫外-可見吸收光譜, 并與實驗值進行比較, 實驗測得的GHRP-6的紫外-可見吸收光譜最大吸收波長為279 nm, 計算得到的最大吸收波長為282 nm, 誤差為3 nm, 誤差百分比小于2%; Oxytocin紫外-可見吸收光譜的實驗值為275 nm, 計算值為269 nm, 誤差為6 nm, 誤差百分比小于3%。 可以看出紫外-可見吸收光譜計算結(jié)果與實驗值吻合程度較高, 該模型能準(zhǔn)確計算得到多肽類物質(zhì)等較大體系分子的紫外-可見吸收光譜。

    (2)根據(jù)分子前線軌道理論, 探究多肽基態(tài)到激發(fā)態(tài)的電子軌道躍遷類型, GHRP-6產(chǎn)生熒光的發(fā)射波長與色氨酸產(chǎn)生的熒光波長相近, 說明GHRP-6產(chǎn)生熒光的主要貢獻為色氨酸殘基上的π→π*軌道躍遷, Oxytocin熒光峰位置與酪氨酸產(chǎn)生的熒光波長相近, Oxytocin產(chǎn)生熒光的主要貢獻為酪氨酸殘基上的π→π*軌道躍遷。 可通過該方法分析激發(fā)態(tài)下電子光譜的發(fā)光機理, 預(yù)測分子熒光發(fā)射的波長范圍, 分析激發(fā)態(tài)光學(xué)性質(zhì)。

    (3)通過計算GHRP-6和Oxytocin的熒光光譜, 并與實驗值進行比較, GHRP-6熒光光譜計算值為368 nm, 實驗值為360 nm, 與實驗值的誤差為8 nm, 誤差百分比小于3%; Oxytocin熒光光譜計算值為305 nm, 實驗值為312 nm, 與實驗值的誤差為7 nm, 誤差百分比小于3%。 通過實驗驗證了利用該方法建立熒光光譜模型的準(zhǔn)確性和可行性。

    利用密度泛函理論研究了較大體系的多肽類物質(zhì)激發(fā)態(tài)下的紫外-可見吸收光譜和熒光光譜, 建立了理論計算模型, 并與實驗對比, 驗證了模型的可行性, 為較大體系的多肽類物質(zhì)的光譜實驗提供理論依據(jù)。

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