瑤藥皂布葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張婷 劉華東 劉安韜 盧月妹

【摘 要】 目的：建立皂布葉Rhamnus napelensis（Wall.）Laws藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：以廣西采集的12批皂布葉藥材為研究對(duì)象，采用2020版《中國(guó)藥典》（四部）相關(guān)方法檢查其水分、總灰分和浸出物含量;采用紫外-可見分光光度法，醋酸鎂-甲醇顯色測(cè)定總蒽醌含量。結(jié)果：12批藥材水分和總灰分分別不高于13%和6%，水溶性浸出物和醇溶性浸出物不低于15%和12%?？傒祯?.002074-0.01037 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9962）。含量測(cè)定結(jié)果顯示，該藥材總蒽醌含量（以1，8-二羥基蒽醌計(jì)）不得少于20.0 mg/g。結(jié)論：建立的項(xiàng)目考察了皂布葉的各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)，能有效評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 皂布葉;總蒽醌;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號(hào)】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）24-0041-04

Study on Quality Standard for Rhamnus napelensis

ZHANG Ting1 LIU Huadong1* LIU Antao1 LU Yuemei2

1.Guangxi Medical College，Nanning 530023，China; 2.Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，China

Abstract：Objective To establish the quality standard for Rhamnus napelensis.Methods Twelve batches of Rhamnus napelensis collected in Guangxi region. The samples were examined by moisture measuring，ash determination and extract mensuration method according to Chinese Pharmacopoeia（2020 edition）. UV spectrophotometry was developed to determinate the total anthraquinone.Results In twelve batches of Rhamnus napelensis，the water content and the average content of total ash is less than 13% and 6.0%，respectively;the content of water and alcohol-soluble extract were above 15% and 12%，respectively.The calibration curves of the total anthraquinone had good linear relationship in the ranges of 0.002074～0.01037 mg （R2=0.9962）.Total anthraquinone is more than 20.0 mg/g.Conclusion Identification methods were stable and reliable，Established quality standard can be used for comprehensive quality control of Rhamnus napelensis.

Key words：Rhamnus napelensis; Total Anthraquinone; Quality Standard

瑤醫(yī)藥是我國(guó)民族醫(yī)藥的重要組成部分，具有理論簡(jiǎn)潔、簡(jiǎn)單實(shí)用、療效確切、療法別具一格等特點(diǎn)[1-2]。皂布葉是瑤醫(yī)藥常用藥材之一，廣泛分布于廣西、廣東、云南等西南各省及自治區(qū)，為鼠李科尼泊爾鼠李Rhamnus napelensis（Wall.）Laws的全株，別名葉青、泡角等，民間用于祛風(fēng)除濕，利水消脹，主治風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、慢性肝炎、肝硬化腹水等病癥[3-4]。在瑤醫(yī)中具有祛風(fēng)除濕、行氣止痛的功效，用于崩閉悶（風(fēng)濕痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）、播沖（跌打損傷）和碰腦（骨折）等病癥。皂布葉中主要成分為黃酮和蒽醌等多酚類化合物[5]，劉安韜等[5]對(duì)皂布葉的研究表明，皂布葉有良好的抗痛風(fēng)作用。為了更好地開發(fā)和利用其資源，研究建立了瑤藥皂布葉藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分別對(duì)水分、總灰分和浸出物進(jìn)行了測(cè)定，并采用紫外-可見分光光度法測(cè)定藥材中總蒽醌的含量，研究結(jié)果為完善皂布葉藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供技術(shù)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 TU-1901紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）;賽多利斯分析天平BSA8201（賽多利斯上海貿(mào)易有限公司）;XS204電子天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易上海有限公司）;KQ2200E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;DFT-100高速粉碎機(jī)（大德藥械有限公司）;SX2-8-16型馬弗爐（上海力辰邦西儀器科技有限公司）;HH-S2數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠）; DHG-9055A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海吉眾儀器有限公司）;98-I-b電熱套（天津泰斯特儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 藥品與試劑 1，8-二羥基蒽醌（批號(hào)：110829-9702，中國(guó)食品藥品檢定研究院）;醋酸鎂、95%乙醇、無水乙醇、甲醇和氯仿等均為分析純。

12批次皂布葉樣品采收于廣西武鳴縣，靖西縣等地，干燥粉碎后備用。詳見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分、總灰分和浸出物的測(cè)定

2.1.1 測(cè)定方法 水分測(cè)定照《中國(guó)藥典》（2020年版）四部通則0832水分測(cè)定法“第二法”測(cè)定;總灰分測(cè)定照《中國(guó)藥典》（2020年版）四部通則2302灰分測(cè)定法“總灰分測(cè)定法”測(cè)定。文獻(xiàn)[4]表明，皂布葉中主要含有蒽醌和黃酮類化合物，極性相對(duì)較大，因此用水溶性浸出物和醇（95%乙醇）溶性浸出物來考察皂布葉中所含活性成分含量。照《中國(guó)藥典》（2020年版）四部通則2201浸出物測(cè)定法中熱浸法測(cè)定水溶性浸出物和醇溶性浸出物。

2.1.2 測(cè)定結(jié)果 12批樣品的水分、總灰分和浸出物的測(cè)定結(jié)果見表2。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，12批藥材水分?jǐn)M定為不得超過13%，總灰分?jǐn)M為不得超過6.0%，水溶性浸出物擬不低于15.0%，醇溶性浸出物含量擬為不低于12.0%。

2.2 總蒽醌含量測(cè)定 皂布葉中主要成分為蒽醌類化合物[4]，采用紫外-可見分光光度法，醋酸鎂-甲醇顯色，測(cè)定皂布葉中總蒽醌含量。

2.2.1 蒽醌標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制（0.1037 mg/mL） 精密稱取

10.37 mg 1，8-二羥基蒽醌，至100 mL量瓶，加甲醇適量溶解，用甲醇稀釋至刻度。

2.2.2 醋酸鎂-甲醇溶液的配制（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%） 稱取2.50 g醋酸鎂溶于500 mL甲醇中，儲(chǔ)于棕色瓶中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.3 樣品溶液的制備 取0.2 g樣品粉末，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密量取50%甲醇50 mL，超聲（常溫）30 min，放冷，補(bǔ)足重量。過濾，精密量取25 mL濾液置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加3.0 mol/L鹽酸15 mL，水浴水解30 min，放冷，用乙酸乙酯10 mL分兩次萃取，合并萃取液蒸干，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶，加甲醇至刻度。精密量取1 mL至50 mL量瓶，加4 mL醋酸鎂-甲醇顯色，用甲醇稀釋至刻度。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密量取蒽醌標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL置于50 mL容量瓶中，分別加入醋酸鎂-甲醇溶液至4 mL，搖勻顯色，加甲醇至刻度，以試劑空白為參比，在230 nm 處測(cè)定吸光度（A）。以1，8-二羥基蒽醌濃度（C）為橫坐標(biāo)（mg/mL），吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并擬合回歸方程。如圖3所示。從圖3可知，得醋酸鎂-甲醇法測(cè)定蒽醌的回歸方程為：A=0.78C+0.0419，R2=0.9962，在0.002074～0.01037 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 樣品含量測(cè)定 對(duì)12個(gè)批次皂布葉樣品（1～12號(hào)）進(jìn)行干燥粉碎后，采用“2.2.3”進(jìn)行供試品溶液的配制，照紫外-可見分光光度法，在230 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算其含量。結(jié)果見表3。

由表3可知，皂布葉中總蒽醌的含量最高可達(dá)52.44 mg/g，最低為23.08 mg/g，平均含量為37.64 mg/g;對(duì)照藥材采收表，皂布葉藥材在9～10月份含量達(dá)到較高值，隨著植物開花結(jié)果，全株藥材的蒽醌物質(zhì)含量有下降趨勢(shì)，一般在1～2月降到最低。皂布葉藥材總蒽醌含量擬不低于20.0 mg/g。

3 討論

3.1 研究基礎(chǔ) 作者前期對(duì)皂布葉藥材進(jìn)行了性狀和顯微鑒別研究[7]，研究表明皂布葉藥材莖表面有大量皮孔，葉含色素類物質(zhì)，干燥后呈灰黑色。皂布葉藥材的莖髓薄壁細(xì)胞壁有念珠狀增厚并有紋孔，藥材粉末中含有豐富的石細(xì)胞和草酸鈣簇晶，為藥材性狀和顯微鑒別提供了依據(jù)，本研究進(jìn)一步補(bǔ)充了藥材質(zhì)量研究數(shù)據(jù)。

3.2 藥材檢查數(shù)據(jù)的確定 皂布葉樣品之間的水分、總灰分、浸出物和含量測(cè)定結(jié)果有一定的差異，與樣品的采收時(shí)間有一定的關(guān)系。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，12批樣品的質(zhì)量較穩(wěn)定，考慮到廣西氣候較為濕潤(rùn)，故建議將藥材水分?jǐn)M定為不得過13.0%;總灰分不得高于6%，水浸出物和醇浸出物不得低于15%和12%。

3.3 含量測(cè)定方法考察 皂布葉中化學(xué)成分以多酚類為主，其中的蒽醌類成分顯示出良好的抗炎，抑菌和抗氧化等[8-11]和抗痛風(fēng)活性[6]。因此，針對(duì)藥材中總蒽醌建立測(cè)定方法，并對(duì)樣品制備方法進(jìn)行考察，包括超聲提取的溫度，時(shí)間和提取溶劑及顯色應(yīng)用等，最終確定提取條件為常溫超聲50%甲醇提取30 min，藥材取樣0.2 g時(shí)，用醋酸鎂顯色劑4 mL。12個(gè)批次皂布葉藥材的總蒽醌含量在23.08～52.44 mg范圍內(nèi)，建議皂布葉藥材總蒽醌含量應(yīng)不少于20.0 mg/g;

3.4 測(cè)定方法存在的問題 采用紫外-可見分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定具有較好的專屬性和廣泛的應(yīng)用范圍，在確定吸收波長(zhǎng)條件下可以實(shí)現(xiàn)快速偵測(cè)。但由于光譜法本身的條件限制，測(cè)定樣品的濃度過高會(huì)影響測(cè)定的準(zhǔn)確度，另外會(huì)有同吸收峰的物質(zhì)所干擾，影響準(zhǔn)確度。高效液相色譜（HPLC）主要利用物質(zhì)理化性質(zhì)上的差異進(jìn)行分離和定量測(cè)定。HPLC專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度更高，但在含量測(cè)定中，對(duì)樣品的組分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)的明確性要求較高，測(cè)定成分更明確，所需時(shí)間長(zhǎng)。研究主要針對(duì)皂布葉藥材中蒽醌類成分進(jìn)行測(cè)定，而不是單體成分，測(cè)定方法便捷，結(jié)果穩(wěn)定可靠，可以作為皂布葉藥材質(zhì)量控制的方法。在以后的研究中，課題組將進(jìn)一步深入研究該藥材的藥效成分，建立專屬性更強(qiáng)的測(cè)定方法。

綜上所述，研究在前期研究基礎(chǔ)上增加了皂布葉藥材的水分、總灰分和浸出物等檢查項(xiàng)，建立了測(cè)定藥材總蒽醌含量的方法，完善了皂布葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可為該藥材的全面質(zhì)量控制提供依據(jù)。

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（收稿日期：2021-04-28 編輯：陶希睿）