克淋通膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究

康紹建 趙琪鐘 侯安國(guó)

【摘 要】 目的：提高克淋通膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，便于控制其質(zhì)量。方法：采用薄層色譜法（TLC）法鑒別黃柏，并檢查關(guān)黃柏;采用高相液相色譜法（HPLC）法測(cè)定克淋通膠囊中沒(méi)食子酸的含量。結(jié)果：TLC方法斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng);HPLC法測(cè)定沒(méi)食子酸在0.04242～0.6363μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.76%，RSD值0.25%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、專屬性及重現(xiàn)性好，可用于有效地控制克淋通膠囊的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 TLC;HPLC;克淋通膠囊;沒(méi)食子酸;含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】P284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）24-0031-04

Promotion on Quality Standard of Kelintong Capsules

KANG Shaojian1 ZHAO Qizhong2 HOU Anguo3*

1.????? Center for Food And Drug Inspection of Yunnan Province，Kunming 650011，China;2.Puer Center for Drug

Control，Puer 665000，China;3.Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650500，China

Abstract：Objective? To improve the quality standards of Kelintong Capsules in order to conveniently and effectively control its internal quality. Methods The TLC method was used to identify Phellodendron amurense and check Guan Phellodendron，and the content of gallic acid in Kelintong capsules was determined by HPLC. Results The TLC method has clear spots and strong specificity. The linear relationship of gallic acid measured by HPLC in the range of 0.04242～0.6363 μg is good. The average recovery rate is 99.76% and RSD=0.25%.Conclusion This method is easy to operate，accurate and reliable，specific and reproducible，and can be used to effectively control the quality of Kelintong capsules.

Key words：TLC; HPLC; Kelintong Capsules; Gallic Acid; Content Determination

泌尿系統(tǒng)感染通常指腎臟、輸尿管、膀胱、尿道各個(gè)部位感染的總稱，嚴(yán)重威脅人類健康[1-2]，尿路感染是繼呼吸系統(tǒng)及消化道之后的第三位感染性疾病?？肆芡z囊由頭花蓼（四季紅）、黃柏等二味藥制成，具有清熱解毒、利濕通淋作用，臨床上常用于治療泌尿系統(tǒng)感染。對(duì)頭花蓼的藥理研究[3-4]表明，其對(duì)泌尿系統(tǒng)感染有抗菌作用，鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀是黃柏的主要化學(xué)成分，其鹽酸小檗堿具有抑制炎癥反應(yīng)[5-8]、抗病原微生物的作用[9-11]，巴馬汀也具有抗炎作用[12-13]，這些作用皆與克淋通膠囊用藥功效一致?？肆芡z囊原標(biāo)準(zhǔn)[標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：WS-11282-（ZD-1282）-2002]中僅有頭花蓼的薄層鑒別和鹽酸小檗堿的HPLC法含量測(cè)定，故為了更好地控制此膠囊劑的質(zhì)量，對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提升研究，本試驗(yàn)在克淋通膠囊原標(biāo)準(zhǔn)中增加了黃柏和關(guān)黃柏的薄層鑒別，同時(shí)采用HPLC法建立了頭花蓼（四季紅）中沒(méi)食子酸的含量測(cè)定方法[14-20]，為克淋通膠囊的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 The Shimadzu LC-20AT高效液相色譜儀;PM4-1300TL超聲儀;UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì);Sartorius CPA225D電子分析天平（十萬(wàn)分之一）;Sartorius BS224S電子分析天平（萬(wàn)分之一）。

1.2 試藥 克淋通膠囊由貴州聯(lián)盛藥業(yè)有限公司提供（批號(hào)1402100、1402110、1402120、1402130、1402150）。沒(méi)食子酸對(duì)照品（110831-201605）（含量以90.8%計(jì)）;關(guān)黃柏對(duì)照藥材（批號(hào)：120937-201408）;黃柏對(duì)照藥材（批號(hào)：121510-201606）;鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-201814）;鹽酸巴馬汀對(duì)照品（批號(hào)：110732-201913）均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。實(shí)驗(yàn)用甲醇、乙腈為色譜純、由美國(guó)默克公司生產(chǎn);水為純凈水;甲醇、磷酸等其它試劑均為分析純。硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠、默克股份兩合公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃柏薄層鑒別 稱取供試品粉末0.2 g，加鹽酸-甲醇（1∶100）溶液25 mL，超聲處理15 min，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取黃柏對(duì)照藥材0.1 g，按上述方法制成對(duì)照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加鹽酸-甲醇混合溶液（1∶100）制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典通則0502 ）試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液及供試品溶液各1～3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯—乙酸乙酯—甲醇-異丙醇-水（6∶3∶2∶1.5∶0.3）為展開(kāi)劑，點(diǎn)板展開(kāi)，晾干后，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。結(jié)果如圖1所示。

2.2 關(guān)黃柏薄層鑒別 精密稱取供試品粉末0.1 g，加甲醇10? mL，加熱回流15 min，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取關(guān)黃柏對(duì)照藥材0.1 g，按上述方法制成對(duì)照藥材溶液。再取鹽酸巴馬汀對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取關(guān)黃柏供試品溶液1～2 μL，對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）為展開(kāi)劑，點(diǎn)板展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，無(wú)相同顏色的熒光斑點(diǎn)出現(xiàn)。結(jié)果如圖2所示。

2.3 含量測(cè)定（頭花蓼）

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-0.1%磷酸（5∶95）為流動(dòng)相;流速為1.0 mL·min-1，柱溫為30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為216 nm，進(jìn)樣體積 10 μL。理論板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)，應(yīng)不低于2500。

取適量的沒(méi)食子酸對(duì)照品，以50%甲醇溶液稀釋，紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)選擇在200～400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行光譜掃描，根據(jù)其光譜圖，沒(méi)食子酸對(duì)照品最大吸收波長(zhǎng)為216 nm，因此該方法檢測(cè)波長(zhǎng)確定為216 nm。

2.3.2 對(duì)照品溶液 精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品11.68 mg，至50 mL棕色容量瓶中，加50% 甲醇溶液溶解并稀釋至刻度。精密吸取5～50 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，即得對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液 精密稱取取本品內(nèi)容物0.2 g，置具塞錐形瓶?jī)?nèi)，精密移取50%甲醇溶液50 mL，稱定重量，超聲處理15 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇溶液補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.4 陰性樣品溶液 根據(jù)處方制備不含頭花蓼的陰性樣品，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液，即得。

2.3.5 專屬性試驗(yàn) 依據(jù)“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件，分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，測(cè)定。結(jié)果表明，在與對(duì)照品溶液色譜圖相應(yīng)保留時(shí)間處，供試品溶液有沒(méi)食子酸特征吸收峰，而陰性對(duì)照液無(wú)相應(yīng)吸收峰，表明專屬性良好。如圖3～5所示。

2.3.6 線性關(guān)系的考察 精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液（0.02121 mg/mL）2、5、10、15、20、30 μL進(jìn)樣，記錄高相液相色譜，以沒(méi)食子酸峰面積為橫坐標(biāo)，以進(jìn)樣量（μg）為縱坐標(biāo)作圖，得回歸方程為：Y=0.0001X-0.0002（r2=1），沒(méi)食子酸在0.04242～0.6363 μg之間線性關(guān)系良好。

2.3.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液（0.02121 mg/mL）10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定沒(méi)食子酸峰面積，結(jié)果峰面積RSD=0.59%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.3.8 重復(fù)性考察 取同一批號(hào)（批號(hào)：1402100）樣品6份，按上述“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法，平行處理并測(cè)定，結(jié)果6 次測(cè)得沒(méi)食子酸平均含量為2.8558 mg/g，RSD=1.25%;表明重復(fù)性良好。

2.3.9 穩(wěn)定性考察 按上述“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫條件下每2小時(shí)進(jìn)樣1次，以峰面積計(jì)算， RSD為1.48%（n=7）;結(jié)果表明室溫條件下，供試品溶液中芍藥苷在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.3.10 準(zhǔn)確度考察 精密稱取6份已知濃度（2.8558 mg/g）供試品（批號(hào)1402100）各0.1 g，裝入具塞錐形瓶中，各自精密加入沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液（濃度0.01818 mg/mL）15? mL，按上述“2.3.3”項(xiàng)下方法制備所需溶液，照含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，測(cè)定供試品溶液中沒(méi)食子酸的含量，計(jì)算沒(méi)食子酸的平均回收率為99.76%，RSD為0.25%。上述結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度良好。見(jiàn)表1。

2.3.11 含量測(cè)定 按上述色譜條件，依法測(cè)定5批樣品中沒(méi)食子酸的含量。結(jié)果如下表2。

3 討論

本試驗(yàn)采用TLC法對(duì)克淋通膠囊中黃柏和關(guān)黃柏進(jìn)行了定性鑒別，其結(jié)果分離度好，專屬性強(qiáng)。同時(shí)通過(guò)HPLC法建立了克淋通膠囊頭花蓼（四季紅）中沒(méi)食子酸的含量測(cè)定方法，經(jīng)過(guò)HPLC方法學(xué)考察以及對(duì)5批克淋通膠囊樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明本方法準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可作為克淋通膠囊頭花蓼（四季紅）中沒(méi)食子酸的含量測(cè)定方法[21-22]。

3.1 提取溶劑的選擇 采用稀乙醇，30%甲醇，50%甲醇為提取溶劑，試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)提取溶劑為50%甲醇時(shí)，提取效果最好，故選用50%甲醇。

3.2 提取方法的選擇 預(yù)實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)50%甲醇超聲提取30 min、加熱回流提取30 min、索氏提取2 h及3 h比較，其中索氏提取2 h所得含量最低，索氏提取3 h所得含量接近超聲提取30 min和加熱回流提取30 min;超聲提取效果較好且簡(jiǎn)便快捷，故選用超聲提取方法。

3.3 提取時(shí)間的選擇 實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)50%甲醇超聲提取10 min 、15 min、30 min比較，實(shí)驗(yàn)表明超聲提取15 min和超聲提取30 min所得含量測(cè)定值接近;故選用超聲提取15 min。

3.4 流動(dòng)相的選擇 預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)分別以乙腈-甲酸、乙腈-水，甲醇-0.1%磷酸水溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行考察，結(jié)果表明，甲醇-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相時(shí)，所得色譜圖峰形好，分離效果好。故本研究選擇甲醇-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相。

3.5 柱溫的選擇 預(yù)實(shí)驗(yàn)分別以20、25、30 ℃為柱溫進(jìn)行考察。為減少時(shí)間且分離效果較好，故本研究柱溫選擇30 ℃。

綜上所述，在克淋通膠囊現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了黃柏和關(guān)黃柏的薄層鑒別方法及有效成分指標(biāo)沒(méi)食子酸的含量測(cè)定，方法簡(jiǎn)單易行，為完善和提高克淋通膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。

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（收稿日期：2021-04-28 編輯：陶希睿）