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    綠豆淀粉純化工藝及性質(zhì)的研究

    2021-10-15 10:30:08黃惠庭王文婷唐苗苗邢蕾李海明
    農(nóng)產(chǎn)品加工 2021年18期
    關(guān)鍵詞:解液酶法綠豆

    劉 穎,袁 翔,黃惠庭,王文婷,唐苗苗,邢蕾,李海明

    (宿州學(xué)院生物與食品工程學(xué)院,安徽宿州234000)

    0 引言

    綠豆在我國廣泛種植,其營養(yǎng)成分豐富,籽粒中淀粉含量可達(dá)50%,蛋白質(zhì)含量為19.7%~32.1%[1]。淀粉是一種儲(chǔ)存多糖,其在植物生長時(shí)期以淀粉粒形式儲(chǔ)存于細(xì)胞中,在種子、塊莖和塊根等器官中含量十分充足。植物淀粉在食品生產(chǎn)中發(fā)揮著很大作用,其對(duì)動(dòng)物體也有極其重要的生理功能,如供應(yīng)能量、形成機(jī)體組織、節(jié)約蛋白等。綠豆淀粉所提供的能量值很低,這在消費(fèi)者追求健康均衡生活的新時(shí)代顯得尤為重要。另外,綠豆淀粉也具備改善腸道菌群環(huán)境、減少大量有害物質(zhì)吸收的功能。綠豆淀粉被普遍應(yīng)用于食品加工中,也與其獨(dú)特的透明度、溶解度、膨潤力和凍融穩(wěn)定性等性質(zhì)有關(guān),這些特性對(duì)食品成品的最終質(zhì)量有極其重要的影響。

    如今,國內(nèi)外學(xué)者雖然對(duì)綠豆淀粉提取和性質(zhì)廣泛關(guān)注,但對(duì)其研究通常報(bào)道得不夠具體。我國的淀粉工業(yè)發(fā)展存在淀粉產(chǎn)率偏低、品種單一等問題[2]。綠豆中淀粉含量一般在50%以上,但其提取效率有限,不利于充分利用綠豆的優(yōu)良品質(zhì),一定程度上對(duì)綠豆原料造成很大浪費(fèi)。試驗(yàn)利用水磨法提取綠豆淀粉后采用酶法除去蛋白以純化淀粉,通過單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)獲得最佳純化工藝,既能保證綠豆淀粉提取率及純度,又能使生產(chǎn)能耗降低、純化時(shí)間縮短,研究純化后綠豆淀粉的理化性質(zhì),以期為提高其綜合利用價(jià)值提供一定的理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 主要原料與試劑

    1.1.1 主要原料

    綠豆,市售。

    1.1.2 主要試劑

    氫氧化鈉、氯化鈉、無水乙醇,西隴化工股份有限公司提供;鹽酸、乙醚,上海蘇懿化學(xué)試劑有限公司提供;牛血清白蛋白,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供;堿性蛋白酶,北京索萊寶科技有限公司提供。

    1.2 主要儀器

    全自動(dòng)豆?jié){機(jī),九陽股份有限公司產(chǎn)品;SHZD(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵,鞏義市予華儀器有限公司產(chǎn)品;電子天平,上海越平科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品;H1805型臺(tái)式高速離心機(jī),湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司產(chǎn)品;UV-5100H型紫外可見分光光度計(jì),上海元析儀器有限公司產(chǎn)品;SU1510型掃描電子顯微鏡,株式會(huì)社日立高新技術(shù)那柯事業(yè)所產(chǎn)品;PHS-3C型pH計(jì),上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司產(chǎn)品。

    1.3 綠豆淀粉純化工藝

    1.3.1 水磨法提取綠豆淀粉工藝

    參照Liu W,王立東等人[3-4]對(duì)綠豆淀粉的提取方法,并加以改動(dòng):按料液比1∶4(g∶mL)將50 g綠豆浸泡于水中,于40℃下浸泡時(shí)間14 h,加900 mL蒸餾水進(jìn)行第1次磨漿,豆?jié){用紗布過濾后收集殘?jiān)M(jìn)行第2次磨漿,再次過濾、離心,取底部淀粉用蒸餾水洗滌,得淀粉半成品。用無水乙醇對(duì)所得淀粉半成品進(jìn)行3次抽濾洗滌,再用無水乙醇和乙醚按1∶1比例混合抽濾1次,最后用乙醚抽濾1次,將除脂肪后的淀粉半成品置于45℃下烘干過夜。粉碎即為綠豆粗淀粉。

    1.3.2 淀粉中蛋白質(zhì)含量測定

    (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

    添加試劑見表1。

    表1 添加試劑

    采用紫外分光光度法測定綠豆淀粉中蛋白質(zhì)的含量。按表1依次加入質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL牛血清白蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.9%氯化鈉溶液,于波長280 nm處分別測出吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[5]。

    (2)待測樣品的測定。取待測淀粉溶解于0.9%氯化鈉溶液中,定容至100 mL,按上述方法測定在波長280 nm處的吸光度,對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線求出淀粉中蛋白含量。

    1.3.3 酶法除蛋白純化綠豆淀粉工藝

    (1)工藝流程。提取的粗淀粉采用堿性蛋白酶進(jìn)行除蛋白質(zhì)純化操作,參考陳振家,胡愛軍等人[6-7]對(duì)豆類淀粉酶法提取純化工藝的研究方法并稍加改動(dòng)。分別稱取同一條件下制得的粗淀粉2.5 g于4支試管中,以1∶8(g∶mL)的料液比加入蒸餾水,并將其pH值調(diào)至所需的堿性環(huán)境,加入一定量的堿性蛋白酶,在一定溫度的水浴鍋中酶解一定時(shí)間后,以轉(zhuǎn)速3 400 r/min離心10 min,除上清液,取下層沉淀,用蒸餾水洗滌、離心,取沉淀,反復(fù)3次,置于45℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘干過夜,得到純化綠豆淀粉。

    (2)單因素試驗(yàn)。設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn),研究當(dāng)酶解溫度55℃,酶用量600 U/g,酶解液pH值9時(shí),不同酶解時(shí)間(2,3,4,5,6 h)對(duì)綠豆淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響;當(dāng)酶解時(shí)間4 h,酶用量600 U/g,酶解液pH值9時(shí),不同酶解溫度(35,45,55,65,75℃)對(duì)綠豆淀粉中蛋白殘余量的影響;當(dāng)酶解時(shí)間4 h,酶解溫度55℃,酶解液pH值9時(shí),不同酶用量(400,500,600,700,800 U/g)對(duì)綠豆淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響;當(dāng)酶解時(shí)間4 h,酶解溫度55℃,酶用量600 U/g時(shí),不同酶解液pH值(7,8,9,10,11)對(duì)綠豆淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響[7]。

    (3)正交試驗(yàn)。按表2設(shè)計(jì)四因素三水平L9(34)的正交試驗(yàn),確定純化工藝最佳參數(shù)。

    酶法除蛋白質(zhì)純化淀粉正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見表2。

    表2 酶法除蛋白質(zhì)純化淀粉正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)

    1.3.4 綠豆淀粉理化性質(zhì)的研究

    (1)淀粉顆粒形貌觀察。掃描電子顯微鏡觀察淀粉顆粒形貌,參照裴亞瓊等人[8]的方法進(jìn)行測定。

    (2)淀粉糊透明度測定。參考侯蕾等人[9]的方法并加以改動(dòng)進(jìn)行測定。

    (3)淀粉糊溶解度和膨潤力測定。參考郭神旺等人[10]對(duì)主要雜豆淀粉理化性質(zhì)的分析方法并加以改動(dòng)進(jìn)行測定。

    (4)淀粉糊凍融穩(wěn)定性測定。參考王鵬等人[11]對(duì)豆類淀粉的研究方法進(jìn)行測定。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 酶法除蛋白純化綠豆淀粉試驗(yàn)結(jié)果

    2.1.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

    (1)酶解時(shí)間對(duì)淀粉中蛋白殘余量的影響。

    不同酶解時(shí)間對(duì)淀粉中蛋白殘余量的影響見圖1。

    圖1 不同酶解時(shí)間對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響

    由圖1可知,隨著酶解時(shí)間的增加,蛋白殘余量逐漸遞減,酶解時(shí)間超過4 h后,蛋白殘余量變化不大,基本趨于穩(wěn)定。這可能是因?yàn)殚_始時(shí)溶液中酶的濃度較高,所以在2~4 h綠豆淀粉中的蛋白質(zhì)殘余量不斷減少,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,溶液中酶濃度逐漸變小,酶的活性也逐漸降低,導(dǎo)致淀粉與蛋白質(zhì)分離速度減慢甚至不再分離,且淀粉中蛋白近乎除盡,因此蛋白質(zhì)殘余量基本不變[12]。因此,選擇4 h為最適酶解時(shí)間。

    (2)酶解溫度對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響。

    不同酶解溫度對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響見圖2。

    圖2 不同酶解溫度對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響

    由圖2可知,當(dāng)酶解溫度上升到55℃時(shí),淀粉中蛋白質(zhì)殘余量最少,為5.4 mg/g;當(dāng)溫度超過55℃后,蛋白質(zhì)殘余量呈上升趨勢,這可能是因?yàn)闇囟冗^高會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變,從而降低其溶解度,不利于蛋白質(zhì)的溶出而隨淀粉下沉[6];并且高溫也會(huì)引起堿性蛋白酶變性失活,水解速度降低[13]。因此,選擇55℃為最適酶解溫度。

    (3)酶用量對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響。

    不同酶用量對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響見圖3。

    由圖3可知,隨著酶用量的不斷增加,蛋白質(zhì)殘余量不斷減少,但當(dāng)酶用量達(dá)到600 U/g之后,蛋白質(zhì)殘余量較小幅度上升。這可能是由于剛開始酶用量低于底物濃度,酶促反應(yīng)速度隨著酶用量的增加而加快,當(dāng)酶用量繼續(xù)增加直到過量時(shí),使蛋白質(zhì)過度水解從而暴露更多疏水性基團(tuán),形成不溶性聚集體,降低了蛋白質(zhì)的溶解度,從而導(dǎo)致淀粉中蛋白質(zhì)殘余量上升[6]。因此,選擇600 U/g為最合適的酶用量。

    圖3 不同酶用量對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響

    (4)酶解液pH值對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響。

    不同酶解液pH值對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響見圖4。

    圖4 不同酶解液pH值對(duì)淀粉中蛋白質(zhì)殘余量的影響

    由圖4可知,當(dāng)酶解液pH值逐漸增大時(shí),淀粉蛋白質(zhì)殘余量逐漸減少,這是因?yàn)殡S著酶解液pH值的增大,堿性蛋白酶的活性也逐漸提高[6]。當(dāng)酶解液pH值為9時(shí),蛋白質(zhì)殘余量最少,為5.3 mg/g;但當(dāng)酶解液pH值繼續(xù)增大時(shí),淀粉蛋白質(zhì)殘余量逐漸增加,這是因?yàn)楦遬H值的堿性環(huán)境可能會(huì)導(dǎo)致部分淀粉糊化,增大溶液的黏度[14],使蛋白質(zhì)不易從淀粉中溶出,同時(shí)過高的pH值環(huán)境也會(huì)降低堿性蛋白酶的酶活。因此,選擇最適酶解液pH值為9。

    2.1.2 正交優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

    酶法除蛋白質(zhì)純化綠豆淀粉正交試驗(yàn)結(jié)果分析見表3。

    表3 酶法除蛋白質(zhì)純化綠豆淀粉正交試驗(yàn)結(jié)果分析

    由表3可知,綠豆淀粉蛋白質(zhì)殘余量的極差R值在0.16~0.60,每個(gè)因素對(duì)蛋白質(zhì)殘余量的影響作用順序?yàn)槊附鈺r(shí)間>酶解溫度>酶用量>酶解液pH值,綠豆淀粉純化的最佳工藝條件組合為A3B3C1D1,即酶解時(shí)間4.5 h,酶解溫度60℃,酶用量550 U/g,酶解液pH值9。

    2.1.3 綠豆淀粉純化的驗(yàn)證性試驗(yàn)

    參照正交優(yōu)化試驗(yàn)得到的最佳因素組合進(jìn)行驗(yàn)證,重復(fù)3次并取平均值得到綠豆淀粉蛋白質(zhì)殘余量為3.9 mg/g。

    2.2 綠豆淀粉理化性質(zhì)研究結(jié)果

    2.2.1 淀粉顆粒掃描電鏡觀察

    分別對(duì)除蛋白質(zhì)純化后的淀粉顆粒及未純化的淀粉顆粒進(jìn)行電鏡掃描。

    純化及未純化綠豆淀粉顆粒形態(tài)圖見圖5。

    圖5 純化及未純化綠豆淀粉顆粒形態(tài)圖

    由圖5可知,體積較小的綠豆淀粉顆粒一般為圓形,而體積稍大的綠豆淀粉顆粒為橢圓形。圖a、圖b為用堿性蛋白酶純化除蛋白質(zhì)后的綠豆淀粉顆粒,表面雖有凹痕但較為光滑;圖c、圖d為未用堿性蛋白酶純化的淀粉顆粒,顆粒表面有少許附著物,不光滑,其可能是還未除去的淀粉殘余蛋白質(zhì)。

    2.2.2 淀粉糊透明度

    綠豆淀粉糊透明度隨時(shí)間的變化見圖6。

    圖6 綠豆淀粉糊透明度隨時(shí)間的變化

    淀粉的透明度反映了淀粉與水的結(jié)合能力,一般用透光率來表示透明度的強(qiáng)度,淀粉中的直支比是影響淀粉糊透明度的重要因素[15]。由圖6可知,綠豆淀粉糊的透光率隨著放置時(shí)間的增加而逐步下降,即透明度逐漸降低。在粉絲生產(chǎn)中,透明度與其口感、外觀的光澤度有直接關(guān)系。

    2.2.3 淀粉糊溶解度和膨潤力

    綠豆淀粉糊溶解度隨溫度的變化見圖7,綠豆淀粉糊膨潤力隨溫度的變化見圖8。

    圖7 綠豆淀粉糊溶解度隨溫度的變化

    圖8 綠豆淀粉糊膨潤力隨溫度的變化

    淀粉分子與水分子之間的相互作用可依據(jù)不同溫度下的溶脹吸水和直鏈淀粉的析出表現(xiàn)出來[16]。由圖7可知,淀粉糊的溶解度與溫度呈正相關(guān),當(dāng)溫度為100℃時(shí),其溶解度達(dá)到最大,為31.11%;由圖8可知,綠豆淀粉糊的膨潤力隨著溫度的升高而逐步增大,最大為23.22%。

    2.2.4 淀粉糊凍融穩(wěn)定性

    凍融穩(wěn)定性隨淀粉糊質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化見圖9。

    圖9 凍融穩(wěn)定性隨淀粉糊質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化

    凍融穩(wěn)定性為淀粉糊耐受冷凍、融解等劇烈物理變化的能力,一般用析水率來表示凍融穩(wěn)定性,析水率越大,凍融穩(wěn)定性就越差。從圖9可知,當(dāng)?shù)矸酆|(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%時(shí),其析水率達(dá)到54.37%,極不穩(wěn)定,隨著綠豆淀粉糊的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不斷增加,析水率逐步下降且趨于平緩,凍融穩(wěn)定性越來越好。

    3 結(jié)論

    采用水磨法提取綠豆淀粉,并使用酶法除蛋白以純化淀粉,通過單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)獲得最佳純化工藝條件為酶解時(shí)間4.5 h,酶解溫度60℃,酶用量550 U/g,酶解液pH值9,在此工藝條件下,所制得的綠豆淀粉中蛋白質(zhì)殘余量最少,為3.9 mg/g,淀粉純化效果最佳。綠豆淀粉顆粒表面較為光滑,呈圓形或橢圓形。綠豆淀粉糊的透明度與時(shí)間呈負(fù)相關(guān),溶解度和膨潤力與溫度呈正相關(guān),凍融穩(wěn)定性隨淀粉糊質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加而越來越高。研究為更高效地提取純化綠豆淀粉及提高其綜合利用價(jià)值提供了一定的理論參考。

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