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    慢性應(yīng)激刺激對(duì)大鼠血壓相關(guān)代謝物的影響

    2021-10-14 21:37李娜趙紅霞
    健康之家 2021年7期
    關(guān)鍵詞:腺苷動(dòng)物模型高血壓

    李娜 趙紅霞

    摘要:目的:檢測慢性應(yīng)激高血壓大鼠頭端延髓腹外側(cè)區(qū)組織中腺苷、cAPM含量的變化,探討慢性應(yīng)激下高血壓的病理機(jī)制。方法:將12只大鼠隨機(jī)分成Sham組、CS組,采取4周反復(fù)刺激構(gòu)建慢性應(yīng)激高血壓模型,采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定大鼠RVLM區(qū)腺苷、cAPM的變化。結(jié)果:與Sham組相比,CS組血壓升高,腺苷、cAPM含量下調(diào)(P<0.01)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了慢性應(yīng)激高血壓大鼠模型,慢性應(yīng)激條件下腺苷、cAPM含量下調(diào)可能是高血壓發(fā)生與發(fā)展過程中的關(guān)鍵因素。

    關(guān)鍵詞:慢性應(yīng)激;高血壓;腺苷;cAPM;動(dòng)物模型

    高血壓是引起心腦血管疾病的重要因素[1],隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,人們承受的慢性應(yīng)激也越來越大,這些壓力的持續(xù)存在給人們帶來了嚴(yán)重傷害[2]。本實(shí)驗(yàn)采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)慢性應(yīng)激高血壓大鼠頭端延髓腹外側(cè)區(qū)(Rostral Ventrolateral Medulla, RVLM)的腺苷、cAMP進(jìn)行測定,初步探討在慢性應(yīng)激所致高血壓發(fā)展過程中血管舒張因子的含量變化情況,揭示慢性應(yīng)激狀態(tài)下高血壓復(fù)雜的病理機(jī)制?,F(xiàn)報(bào)道如下:

    1材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    1290 Infinity HpLC與6470 TQ MS/MS(安捷倫科技,美國),雙極銀絲記錄電極(北京旭月科技有限公司),示波器(美國Tektronix oscilloscoPe公司),腺苷、cAMP和醋酸銨均購自Sigma(St. Louis, Missouri, USA),氨水購自泰坦科技股份有限公司,乙腈(色譜純,默克公司),水為超純?nèi)ルx子水(18.2 M)。

    1.2 動(dòng)物模型的建立

    8周齡SPF級(jí)SD雄性大鼠12只,購自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,許可證號(hào):SCXK(滬)2013-0016。動(dòng)物飼養(yǎng)嚴(yán)格按照國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和使用指南進(jìn)行。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成Sham組、CS組,每組6只。慢性應(yīng)激高血壓大鼠模型參照相關(guān)文獻(xiàn)[3]。Sham組除不給予應(yīng)激刺激外,其他條件與CS組相同。

    1.3 血壓測定與樣本收集

    血壓測定參照相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行[4]。測量結(jié)束后,大鼠行安樂死。斷頭取出RVLM區(qū)組織,-80℃冰箱保存。

    1.4 色譜質(zhì)譜條件

    1.4.1 色譜條件

    色譜柱HyPercarb Column(3 μm,2.1×100 mm,Thermo Fisher Scientific),柱溫35℃。流動(dòng)相15mM醋酸銨-0.3%氨水(A)-15mM醋酸銨-0.3%氨水-90%乙腈(B),Posttime 3 min。洗脫梯度:0~2 min,3%B;2~10 min,3%~50%B;10~14 min,50%~85%B,14~17 min,85%。流速0.35 ml/min,進(jìn)樣量1 μl。

    1.4.2 質(zhì)譜條件

    ESI+動(dòng)態(tài)MRM模式,Gas TemP 350℃,Gas Flow 10 L/min,Nebulizer 40 Psi,SheathGasHeater 350℃,SheathGasFlow 11 L/min,CaPillary 4 000 V,其他參數(shù)見表1,色譜圖見圖1。

    1.5 標(biāo)準(zhǔn)品的配制

    精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品10 mg,置于容量瓶中,加入水,配制約1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。

    1.6 樣品的前處理

    精密稱取腦組織,加入200 μl甲醇勻漿(60 Hz,60 s)后,離心15 min(12000 g,4℃),取上清液待測。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS21.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1 兩組大鼠血壓比較

    經(jīng)4周慢性應(yīng)激之后,CS組血壓顯著升高(P<0.01),符合慢性應(yīng)激高血壓的表現(xiàn)。見表2。

    2.2 腺苷、cAMP含量測定

    2.2.1 線性方程的建立

    取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液,用50%甲醇稀釋,按1.4項(xiàng)下進(jìn)行測定,以濃度為橫坐標(biāo),以峰面積作為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果顯示不同濃度腺苷、cAMP與峰面積均具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)大于0.999。見表3。

    2.2.2 精密度

    測定低、中、高濃度腺苷、cAMP,計(jì)算精密度。腺苷精密度為0.48%~1.65%(n=6),cAMP精密度為0.96%~3.21%(n=6),說明方法精密度良好。

    2.2.3 測定結(jié)果

    將腦組織按照1.6項(xiàng)下處理,按1.4項(xiàng)下進(jìn)行測定,結(jié)果顯示CS組腺苷和cAMP的含量較Sham組顯著下調(diào)(P<0.01)。見表4。

    3討論

    腺苷具有舒張血管、對(duì)抗室上性心動(dòng)過速的作用。研究表明,腺苷與血流量大小密切相關(guān),可通過與血管平滑肌的直接作用使血管舒張,血壓下降[5]。此外,腺苷可通過腺苷受體A2介導(dǎo)的Gαs使cAMP發(fā)生變化[6]。在本實(shí)驗(yàn)中,CS組腺苷和cAMP均下調(diào),提示慢性應(yīng)激所致的高血壓可能與MAPK磷酸化程度相關(guān)。

    本研究通過對(duì)腺苷、cAMP的靶向檢測,初步推斷CS所致高血壓可能與腺苷、cAMP的下調(diào)相關(guān),并為今后研究慢性應(yīng)激性高血壓的病理機(jī)制提供一定參考。

    參考文獻(xiàn)

    [1]Carlene ML,StePhen VH,Anthony R.Global burden of blood-Pressure-related disease, 2001[J].The Lancet,2008,371(9623):1513-1518.

    [2]Tobe SW, Kiss A, Sainsbury S,et al.The imPact of job strain and marital cohesion on ambulatory blood Pressure during 1 year: the double exPosure study[J]. Am J HyPertens,2007,20(2):148-53.

    [3]Elizalde N,García-García AL,Totterdell S,et al.Sustained stress-induced changes in mice as a model for chronic dePression[J].PsychoPharmacology (Berl),2010,210(3):393-406.

    [4]Wu Q, Xia DM, Lan F,et al.UPLC-QTOF/MS-based metabolomics reveals the mechanism of chronic unPredictable mild stress-induced hyPertension in rats[J].Biomed Chromatogr,2019,33(10):e4619.

    [5]Marshall JM.The roles of adenosine and related substances in exercise hyPeraemia[J].J Physiol,2007,583(Pt 3):835-845.

    [6]Schulte G,F(xiàn)redholm BB.Signalling from adenosine recePtors to mitogen-activated Protein kinases[J].Cell Signal,2003,15(9):813-827.

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