孫玲玲,矯文文,邵 帥
(青島市即墨區(qū)綜合檢驗(yàn)檢測中心,山東青島 266200)
亞硝酸鹽為常見的防腐劑、護(hù)色劑成分,與蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生的胺類、肽類等物質(zhì)反應(yīng)生成的N-亞硝胺化合物帶有強(qiáng)毒性,因此需達(dá)到國家限量要求。在眾多檢測技術(shù)中,氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有較強(qiáng)抗干擾能力,可以提供高靈敏度和選擇性,能用于肉制品N-亞硝胺化合物測定。
將從市場上隨機(jī)購買的熏肉、香腸和牛肉干作為樣品開展測定實(shí)驗(yàn)。需配備TQ8040三重四極桿質(zhì)譜儀、GC-2010plus氣相色譜儀、氮吹儀、離心機(jī)、漩渦混合氣、電子天平和恒溫水浴鍋。使用的試劑包含污水硫酸鎂、乙酸乙酯、乙腈、氯化鈉等均為分析純,另外需要準(zhǔn)備N-丙基乙二胺吸附劑、十八烷基鍵合硅膠吸附劑和3種N-亞硝胺化合物混合標(biāo)準(zhǔn)品。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液,需要將3種標(biāo)準(zhǔn)液各取0.5 mL,移入100 mL容量瓶后,添加乙腈制成10 mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。用乙酸乙酯稀釋,確認(rèn)溶液物質(zhì)濃度達(dá)到30 μg/L,在4 ℃冰箱中保存。
稱取樣品10 g,放入50 mL離心管中,添加90 μL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液,再添加15 mL乙腈。經(jīng)過2 min渦旋處理后,添加4 g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉進(jìn)行脫水。經(jīng)過1 min振蕩后,按照8 000 r/min轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心處理。經(jīng)過5 min離心后,提取上層清液。在分散固相萃取管中添加7 mL提取液,經(jīng)過1 min渦旋和5 min離心后,提取上層清液利用氮?dú)獯祾摺W詈罄靡宜嵋阴?,能夠定容? mL,然后移入進(jìn)樣瓶中。
在樣品分析階段,需要選用30 m×0.5 mm×0.25 μm的DB-WAX色譜柱,保持220 ℃的進(jìn)樣溫度,使用高純氦氣載氣,碰撞氣為氬氣,純度達(dá)到99.99%以上[1]。采取不分流進(jìn)樣方法,柱流量能夠達(dá)到1.5 mL/min,在1 min后將閥門打開。在進(jìn)樣時,36 ℃保持1 min,然后按照8 ℃/min迅速升溫,直至達(dá)到150 ℃,再按照40 ℃/min升溫,達(dá)到230 ℃后,維持6 min,進(jìn)樣量為1 μL。在質(zhì)譜分析階段,離子源達(dá)到230 ℃,接口位置同樣為230 ℃,產(chǎn)生的電離能量達(dá)到70 eV。
圖1為3種化合物的MRM定量離子圖。在氣相色譜條件優(yōu)化方面,需要利用相同規(guī)格、不同極性的色譜柱測定樣品。通過MRM分析,發(fā)現(xiàn)NDMA極性較強(qiáng),在除DBWAX以外色譜柱中出現(xiàn)峰拖尾等問題。而選用DB-WAX展開分析,能夠在21 min內(nèi)獲得良好分離效果。
圖1 3種N-亞硝胺類化合物MRM圖
受離子化效應(yīng)作用,待測成分可能發(fā)生變化,影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確度。利用空白試樣進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋,確保標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液產(chǎn)生接近的離子效應(yīng)。通過分析可以發(fā)現(xiàn),香腸和熏肉的ME數(shù)值均超出規(guī)定范圍,分別為56%和63%,達(dá)到了70%以下,而牛肉干的ME值達(dá)到了91%。香腸和熏肉內(nèi)脂肪含量較高,會引發(fā)顯著的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),需利用內(nèi)標(biāo)法展開分析,回收率在78%~111%范圍內(nèi),能夠消除前期濃縮、移取等過程帶來的誤差,保證定性和定量分析的準(zhǔn)確性[3-4]。
經(jīng)過優(yōu)化后對系列混合標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行測定,可以確定NDMA的線性方程為Y=0.963X+0.04,r2為0.996 1;而NDPhA的線性方程為Y=10.9X+0.27,r2為0.998 5;Nmor的線性方程為Y=2.6X+0.04,r2為0.999 8。通過分析可以發(fā)現(xiàn),在10~120 μg/L,3種物質(zhì)均可以保持較好線性關(guān)系,方法檢出限在0.02~0.14 μg/kg。取空白樣品進(jìn)行測定,分別在 0.5 μg/kg、1.0 μg/kg 和 3.0 μg/kg添加條件下開展加標(biāo)回收試驗(yàn)。如表1所示,3種物質(zhì)加標(biāo)回收率在86%~117%,相對標(biāo)準(zhǔn)差RSD在2.8~26.1,無論是準(zhǔn)確度還是精確度均能滿足要求。
表1 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果
對3種肉質(zhì)品樣品進(jìn)行測定,結(jié)果如表2所示。香腸中的NDMA含量較高,其他兩類肉制品的含量不高。在3種肉制品中,NDPhA含量較低,并且均不含有Nmor。按照國家《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》(GB 2762—2017/XG1—2021)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,NDMA 的量應(yīng)小于 3 μg/kg[5]。由此可見,檢測的香腸存在N-亞硝胺化合物超標(biāo)問題,屬于不合格產(chǎn)品,其他兩種肉制品均符合要求。
表2 樣品檢測結(jié)果(單位:μg/kg)
通過對肉制品中3種N-亞硝胺化合物進(jìn)行測定,采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測,不僅可以快速完成樣品前處理,同時能夠達(dá)到較高準(zhǔn)確度、靈敏度,保持良好線性關(guān)系,提高肉類食品檢測效率和通量,適用于肉類中N-亞硝胺化合物的檢測。