慢性與急性AFB1中毒小鼠血清生化及免疫指標比較

高 穎，李蕊蕊，陳媛媛

黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，黑龍江大慶 163319

黃曲霉毒素（AF）是主要由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一種次級代謝產(chǎn)物，廣泛存在于自然界中。AFB1的代謝與濕度、溫度、氧化應(yīng)激、生長基質(zhì)、儲存材料和陽光等密切相關(guān)。黃曲霉毒素毒性相當于氰化鉀的10倍，砒霜的68倍，于1993年被劃為一類致癌物，黃曲霉毒素可以引起免疫抑制、致癌、致畸、致突變性。豬攝食AFB1污染飼料會出現(xiàn)采食量減少、體重降低、肝和免疫功能受損，以及血清生化指標的改變，免疫系統(tǒng)由于AFT中毒而遭受嚴重破壞，細胞免疫應(yīng)答延遲，促炎細胞因IL-6、IFN-γ和IL-10高表達。本試驗以6周齡健康昆明小鼠為試驗對象，觀察比較慢性與急性AFB1中毒對小鼠的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑

AFB1標準品購自FERMENTEK公司，AFB1粉末用DMSO溶解為1 mg/mL的儲備液備用。

1.2 試驗動物及分組

6周齡健康雄性昆明小鼠40只，隨機分為空白對照組、DMSO溶劑對照組、AFB1慢性中毒組、AFB1急性中毒組。慢性AFB1組和急性AFB1組小鼠分別經(jīng)口灌服AFB1溶液（300 μg/kg，2 mg/kg），空白對照組和溶劑對照組分別經(jīng)口灌服相同體積的生理鹽水和DMSO溶液（300 μL/kg）。試驗動物飼喂標準飼糧，自由采食飲水。急性AFB1組實驗期1周，其它組小鼠試驗期為8周。實驗結(jié)束，小鼠禁食12 h以上。第2天經(jīng)眼眶采血收集血液，頸部脫臼處死小鼠,血樣用4 ℃離心機4 000 r/min 離心10 min收取上清液，血清用ELISA檢測。解剖小鼠迅速取其肝臟,生理鹽水沖洗并用濾紙吸干后，電子天平稱量凈重。

臟器指數(shù)=（臟器凈重/宰前體重）×100%

1.3 炎性因子指標檢測

用酶標儀測量血清中IL-1β，IL-2，IL-6，IL-8，IL-10，TNF-α，INF-γ的值。以上炎性因子指標均使用ELISA（朗頓，上海）試劑盒測定。用酶標儀在450 nm波長下讀取各吸光度值，并根據(jù)所繪制的標準曲線來計算出相應(yīng)的濃度值。

1.4 統(tǒng)計分析

試驗所得數(shù)據(jù)結(jié)果以“平均值±標準差”形式表示。使用SPSS 22.0軟件處理分析數(shù)據(jù)，以單因素方差分析各組顯著性，p<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝指數(shù)

肝指數(shù)指標比較見表1。

表1 各組小鼠肝指數(shù)變化比較

2.2 血清炎性因子指標

血清炎性因子指標比較見表2。

3 討論

本試驗毒素組小鼠肝臟指數(shù)高于對照組，說明慢性AFB1中毒會對動物肝臟造成損傷。此外剖檢小鼠可見肝臟腫大，顏色變淡，表面有出血點。AFB1進入機體后在肝臟中代謝，有報道指出AFB1中毒大鼠肝臟會過量表達炎性因子，過量表達的炎性細胞因子又會進一步加重肝臟損傷。免疫反應(yīng)是一個復(fù)雜的過程，免疫系統(tǒng)受許多炎性細胞因子的調(diào)控。AFB1急、慢性中毒均會引起肝臟炎癥反應(yīng)的發(fā)生，而慢性AFB1中毒導(dǎo)致的肝臟炎性損傷較急性AFB1中毒更加嚴重。

4 結(jié)論

表1結(jié)果表明，慢性AFB1中毒對肝臟的影響較急性AFB1中毒嚴重；表2結(jié)果表明，AFB1急、慢性中毒均會引起肝臟炎癥反應(yīng)的發(fā)生，而慢性AFB1中毒導(dǎo)致的肝臟炎性損傷較急性AFB1中毒更加嚴重。

表2 種禽（蛋雞）場使用時機

表2 各組小鼠血清炎性因子指標變化比較

綜上所述，急性AFB1中毒會對動物免疫能力產(chǎn)生損傷，而慢性AFB1中毒也會對動物產(chǎn)生一定影響，但不如急性中毒嚴重。

參考文獻：略