上消化道疾病患兒胃組織Hp感染與Sox2、CyclinD1表達(dá)的相關(guān)性分析

馬建平 李文 柳玉強(qiáng)

(寶雞市中醫(yī)醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西 寶雞 721000)

幽門螺旋桿菌(Hp)感染是慢性胃炎、胃潰瘍、胃癌等疾病的主要危險(xiǎn)因素[1]。干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox2在維持與調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞的增殖能力、自我更新等方面發(fā)揮重要作用，可能參與胃癌的發(fā)生[2]。細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)是一種細(xì)胞周期正向轉(zhuǎn)換因子，在細(xì)胞G1期增殖過(guò)程中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，其過(guò)度表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞異常增殖，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[3]。但目前Hp感染，Sox2、CyclinD1蛋白表達(dá)在上消化道疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用及相關(guān)性尚不明確。本文主要探討上消化道疾病患兒胃組織中Hp感染與Sox2及CyclinD1表達(dá)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年2月我院收治的上消化道疾病患兒151例，采用胃鏡及病理學(xué)方法進(jìn)行診斷，并將其分為慢性淺表性胃炎組(A組，n=35)、慢性萎縮性胃炎組(B組，n=33)、十二指腸球部潰瘍組(C組，n=29)、胃潰瘍組(D組，n=30)及胃癌組(E組，n=24)。所有患兒經(jīng)胃鏡檢查確診，初次發(fā)病，病例資料完整，患兒監(jiān)護(hù)人對(duì)本研究?jī)?nèi)容均知情同意，且既往未接受過(guò)Hp清除治療或手術(shù)治療；排除深度昏迷或意識(shí)不清楚不能配合研究的患兒；合并重要臟器疾病者；入組前2周使用過(guò)抗菌藥物等。其中男89例，女62例；年齡2～12歲，平均(6.48±2.56)歲；病程4～18個(gè)月，平均(5.42±1.21)個(gè)月。五組患兒一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2主要試劑及儀器 Sox2、CyclinD1多克隆抗體(英國(guó)Abcam公司)、免疫組化試劑盒(上海瓦蘭生物科技有限公司)、CUT4062型石蠟切片機(jī)(德國(guó)SLEE公司)、YD-A型生物組織攤片機(jī)(德國(guó)Lecia公司)等。

1.3方法13C呼氣試驗(yàn)：患者空腹?fàn)顟B(tài)下口服13C-尿素，到100 mL后測(cè)氣，連接檢測(cè)儀后進(jìn)行檢測(cè)，DOB值>2.5時(shí)為陽(yáng)性。改良Giemsa染色：在胃鏡直視下取胃竇大彎側(cè)近幽門2～3 cm處黏膜2塊，胃體小彎側(cè)近胃角2～3 cm處黏膜2塊，4%多聚甲醛固定組織標(biāo)本，進(jìn)行Giemsa染色。Giemsa染色和13C呼氣試驗(yàn)同為陽(yáng)性者則判定為Hp感染陽(yáng)性。通過(guò)免疫組化法檢測(cè)胃組織中Sox2及CyclinD1蛋白的表達(dá)情況。取各組石蠟組織切片進(jìn)行免疫組化染色檢測(cè)。60℃條件下烤片約80 min，常規(guī)脫蠟、水化，高溫高壓條件下進(jìn)行抗原修復(fù)，選擇3%過(guò)氧化氫封閉，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。分別滴加20 μL兔抗人Sox2、CyclinD1多克隆抗體(濃度1∶200，4℃孵育、過(guò)夜)，滴加生物素化的IgG50 μL，37℃孵育、30 min，滴加抗生物素-過(guò)氧化物酶溶液50 μL，37℃孵育、30 min。DAB染色，同時(shí)在顯微鏡下觀察、控制顯色反應(yīng)時(shí)間；蘇木素復(fù)染2 min，分化、脫水，最后中性樹(shù)膠封片。光學(xué)顯微鏡下使用Image-pro plus軟件分析各組織標(biāo)本中Sox2、CyclinD1蛋白表達(dá)情況。Sox2、CyclinD1蛋白陽(yáng)性著色均以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色為準(zhǔn)，參照相關(guān)文獻(xiàn)[4]，以半定量積分法判定染色結(jié)果。比較胃組織Hp感染與Sox2及CyclinD1蛋白表達(dá)之間的關(guān)系。

1.4觀察指標(biāo) 對(duì)不同類型上消化道疾病Hp陽(yáng)性率、Sox2蛋白陽(yáng)性率、CyclinD蛋白陽(yáng)性率進(jìn)行比較；分析Hp與Sox2、CyclinD蛋白表達(dá)的相關(guān)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以n，%表示，行χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1胃組織Hp陽(yáng)性率及Sox2蛋白陽(yáng)性率的比較 E組患兒胃組織Hp陽(yáng)性率及Sox2蛋白陽(yáng)性率均顯著高于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍及胃潰瘍組(χ2=7.008、19.654，P均<0.05)，其余組間比較無(wú)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 Hp陽(yáng)性率及Sox2蛋白陽(yáng)性率的比較[n(%)]

2.2CyclinD1蛋白陽(yáng)性率的比較 E組患兒胃體CyclinD1蛋白陽(yáng)性率顯著高于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍及胃潰瘍組(χ2=14.010，P<0.05)，其余組間比較無(wú)差異(P>0.05)；同時(shí)，胃癌組胃竇CyclinD1蛋白陽(yáng)性率顯著高于慢性淺表性胃炎組(χ2=12.740，P<0.05)，其余組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 CyclinD1蛋白陽(yáng)性率比較[n(%)]

2.3相關(guān)性分析 結(jié)果顯示，Hp與Sox2蛋白表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.413，P<0.01)、與CyclinD1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.251，P<0.01)。

3 討 論

Hp感染多在兒童時(shí)期獲得，具有遷延不愈的特點(diǎn)。本文結(jié)果顯示，上消化道疾病患兒具有較高的Hp感染率(60.26%)，提示上消化道疾病的發(fā)生、發(fā)展可能與Hp感染有關(guān)。研究[5-6]發(fā)現(xiàn)，Hp感染可使細(xì)胞增殖與凋亡紊亂，胃癌相關(guān)基因突變、引起端粒酶活性增加，促進(jìn)胃癌的發(fā)生，但清除Hp可控制萎縮性胃炎患兒的胃黏膜發(fā)生進(jìn)一步萎縮。本文結(jié)果顯示，不同類型上消化道疾病患兒Hp陽(yáng)性率不同，胃癌組Hp陽(yáng)性率顯著高于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍和胃潰瘍組，提示Hp感染參與上消化道疾病的發(fā)展。

Sox2是具有代表性的干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，且已被證實(shí)其突變和異常表達(dá)與多種惡性腫瘤有關(guān)[7]。研究[8]發(fā)現(xiàn)，Hp通過(guò)抑制Sox2蛋白的表達(dá)，導(dǎo)致胃黏膜萎縮和腸化生，進(jìn)而增加胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。還有研究[9]發(fā)現(xiàn)，Hp感染可促進(jìn)大量細(xì)胞因子產(chǎn)生，誘導(dǎo)Sox2甲基化，使Sox2蛋白表達(dá)減少，進(jìn)而出現(xiàn)胃組織不典型增生。本研究結(jié)果顯示，胃癌組Sox2蛋白陽(yáng)性率顯著低于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍和胃潰瘍組，說(shuō)明Hp感染與Sox2蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示Hp感染可能通過(guò)下調(diào)Sox2蛋白的表達(dá)參與上消化道疾病的病變。

CyclinD1是一種細(xì)胞周期正向轉(zhuǎn)換因子，正常組織中表達(dá)很低，過(guò)度表達(dá)后可促進(jìn)細(xì)胞周期G1-S期轉(zhuǎn)換，加速細(xì)胞周期，使細(xì)胞異常增殖，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。研究[10]發(fā)現(xiàn)Hp自身及其代謝產(chǎn)物有潛在的致癌活性，可導(dǎo)致CyclinD1基因突變、擴(kuò)增，增加胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本文結(jié)果顯示，胃癌組CyclinD1蛋白陽(yáng)性率顯著高于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍和胃潰瘍組，說(shuō)明Hp感染與CyclinD1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，提示Hp感染可能通過(guò)上調(diào)CyclinD1蛋白的表達(dá)參與上消化道疾病的發(fā)生。