補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方阻止白血病復(fù)發(fā)機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

孫維龍，許鑫欣，陶霞，施偉鵬，竺佳，范晨陽(yáng)，李帝萱，楊向東

（天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，國(guó)家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300381）

臨床中化療是成人急性白血?。ˋL）治療的主要選擇，但預(yù)后通常不容樂(lè)觀［1-2］。急性髓細(xì)胞性白血?。ˋML）和急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）的長(zhǎng)期緩解率水平很低，尤其ALL 的長(zhǎng)期緩解率僅為30%～40%，化療后復(fù)發(fā)仍是困擾AL 治療的重要問(wèn)題［3-4］。在骨髓中，對(duì)造血干細(xì)胞（HSC）的增殖、分化、存活和歸巢起支持作用的最小解剖結(jié)構(gòu)是骨髓微環(huán)境（即龕）。這個(gè)微環(huán)境由骨細(xì)胞、血管周細(xì)胞、骨內(nèi)膜細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及間充質(zhì)干細(xì)胞等共同構(gòu)成［5］。其中，間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）與HSC 的關(guān)系尤為密切，它可以通過(guò)物理支持和分泌可溶性因子來(lái)調(diào)控HSC 的維持和分化，是龕中的關(guān)鍵元素［6］。在白血病進(jìn)程中，白血病干細(xì)胞（LSC）會(huì)通過(guò)“劫持”作用將龕改造為適合LSC 生長(zhǎng)并改變HSC 功能的環(huán)境［7］。不同的細(xì)胞因子利用多種途徑實(shí)現(xiàn)了這種作用，并由此介導(dǎo)了LSC的動(dòng)員、歸巢和耐藥性，最終成為臨床復(fù)發(fā)的重要原因［8］。針對(duì)被“劫持”龕的治療，可能為治療白血病復(fù)發(fā)提供新的研究方向［9］。

現(xiàn)代中醫(yī)藥作為中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的發(fā)展和延伸，是我國(guó)臨床醫(yī)學(xué)的重要組成部分。癌癥的臨床治療中，中醫(yī)藥憑借增效減毒、預(yù)防復(fù)發(fā)、延長(zhǎng)生存時(shí)間等多方面的優(yōu)勢(shì)，發(fā)揮著獨(dú)特的補(bǔ)充作用［10］。其中，補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方對(duì)于延長(zhǎng)復(fù)發(fā)難治白血病患者生存周期的效果顯著［11］。在前期研究中，筆者證明了補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方（BSJDTLF）對(duì)輻射后小鼠的MSC 具有修復(fù)作用，并能在MSC 與K562 細(xì)胞的共培養(yǎng)中下調(diào)白血病相關(guān)基因［12］。這為研究BSJDTLF 的藥理機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)與信息技術(shù)的發(fā)展，中醫(yī)藥的研究已經(jīng)從傳統(tǒng)的“單一藥物”“單一靶點(diǎn)”過(guò)渡到“多組分”“多靶點(diǎn)”的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究模式。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中藥靶點(diǎn)預(yù)測(cè)、生物活性化合物篩選、毒性評(píng)價(jià)、機(jī)制研究等方面發(fā)揮了巨大的作用，為中醫(yī)藥復(fù)方的研究提供了新的策略［13-14］。同時(shí)，基于高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，蛋白組學(xué)、基因組學(xué)也越來(lái)越多參與疾病研究，尤其是腫瘤的研究中［15-16］。其中蛋白組學(xué)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞和組織內(nèi)復(fù)雜的蛋白質(zhì)進(jìn)行全面的定性和定量分析，較為全面的覆蓋不同樣本中蛋白質(zhì)的變化關(guān)系［17］。因此，高通量蛋白組學(xué)可以從側(cè)面驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的篩選成果。在本研究中，筆者首先基于質(zhì)譜分析明確BSJDTLF 的化合物成分，再通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)相結(jié)合的方法，研究BSJDTLF 與白血病之間的關(guān)系，并對(duì)其作用機(jī)制、靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)。具體研究流程見圖1。

圖1 研究分析的流程圖

1 材料和方法

1.1 BSJDTLF中化合物的鑒定

1.1.1 BSJDTLF的藥物組成

組方：全蝎10 g，僵蠶10 g，鹿角片15 g，龜甲15 g，白附子10 g，人參10 g，枸杞子10 g，滑石10 g，青黛5 g，甘草5 g。藥物來(lái)源于天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房。

1.1.2 BSJDTLF的樣品制備

取復(fù)方藥粉10 g加100 mL水煎煮30 min，煎煮后約得50 mL提取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45 ℃水浴上濃縮至一定體積后的復(fù)方濃縮液，將濃縮液放入培養(yǎng)皿中，在-80 ℃冰箱預(yù)冷凍后，放入凍干機(jī)至過(guò)夜凍干，取出凍干后的樣品密封保存待用。精確稱取10.00 mg 樣品至離心管中，加入1 mL 超純水溶解，離心（14 000 rpm/min，20 min，4 ℃），取上清液100 μL至進(jìn)樣小瓶中，以超純水作為空白溶劑，進(jìn)樣。

1.1.3 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜分析在Thermo Fisher Q-Orbitrap MS（QExative）系統(tǒng)下完成，離子源為高能電噴霧離子源（HESI 源），掃描模式為Full-ms/ dd-ms2，正負(fù)離子模式下同時(shí)采集。源參數(shù)：源噴霧電壓（spray voltage）正離子為3.5 kV，負(fù)離子為2.8 kV，毛細(xì)管溫度（capillary temperature）320 ℃，離子源加熱溫度（probe heater temperature）350 ℃，鞘氣（sheath gas，N2）為35，輔助氣（auxiliary gas，N2）為10，S-lens 水平為50 V，碰撞能量為20、40、60 V，掃描范圍為m/z 100～1 500，分辨率為70 000。

1.1.4 質(zhì)譜儀器

超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀UHPLC-/ESI-QOrbitrap MS（美國(guó)Thermo Fisher Scientific）；3K15 型高速離心機(jī)（美國(guó)Sigma 公司）；KQ-250E 型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；AX 205 型十萬(wàn)分之一天平（瑞士Mettler Toledo 公司）；BP121S 型萬(wàn)分之一天平（德國(guó)Sartorius 公司）；XW-80A 型渦旋混合器（上海滬西分析儀器廠）；日本東京理化EYELA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀DPE-2150（山東愛博科技貿(mào)易有限公司）。

1.1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

將采集到的原始數(shù)據(jù)利用Xcalibur（4.2，Thermo-Fisher Scientific）軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄、分析及處理，化合物的鑒定是基于文獻(xiàn)基礎(chǔ)，根據(jù)化合物的質(zhì)荷比、二級(jí)碎片進(jìn)行。

1.2 化合物相關(guān)靶點(diǎn)的收集

質(zhì)譜結(jié)果中化合物的相關(guān)靶點(diǎn)是在TCMSP（https：//tcmspw.com/tcmsp.php）與CTD（http：//ctdbase.org/）兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到的。檢索結(jié)果通過(guò)Uniprot（https：//www.uniprot.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)一為基因名稱。并對(duì)統(tǒng)一名稱后的靶點(diǎn)與化合物對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)行了合并，并刪除了重復(fù)項(xiàng)。

1.3 已知白血病相關(guān)靶點(diǎn)的收集

通過(guò)“l(fā)eukemia”為關(guān)鍵詞在NCBI（https：//www.ncbi. nlm. nih. gov/gene/）于GENE CARD（https：//www.genecards. org/）兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行了搜索，去除了搜索結(jié)果中的重復(fù)基因，整合了兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)共有的2 864個(gè)靶點(diǎn)。

1.4 蛋白質(zhì)組學(xué)

實(shí)驗(yàn)中的蛋白質(zhì)組學(xué)測(cè)定是委托天津舍維斯生物技術(shù)有限公司進(jìn)行（項(xiàng)目編號(hào)：QLSWS003-20190614001），采用了由ABSCIEX公司研發(fā)的iTRAQ技術(shù)。

1.5 GO、KEGG和關(guān)鍵子網(wǎng)絡(luò)的分析

首先使用STRING（https：//string-db.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行了PPI 分析，并得到了相關(guān)靶點(diǎn)的功能和通路富集。隨后，將PPI 關(guān)系導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1 中進(jìn)行了網(wǎng)絡(luò)圖的繪制，使用MCODE 插件對(duì)其核心子網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行篩選。

1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

7 周 齡 的 雄 性BALB/c 小 鼠，SPF 級(jí)，體 質(zhì) 量（22±2）g，北京華阜康科技股份有限公司，許可證編號(hào)SCXK-20190008。飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物中心SPF級(jí)屏障內(nèi)，給予常規(guī)飲食，定期更換墊料。

1.7 分組及給藥方法

采用隨機(jī)分組法分為給藥組與對(duì)照組（n=6），給藥組給予BSJDTLF（以10 g/50 mL 的濃度制作水煎劑）灌胃，每天1 次，每次0.2 mL。對(duì)照組給予生理鹽水（NS）灌胃每天1 次，每次0.2 mL。4 周后統(tǒng)一處死小鼠，并提取MSC。

1.8 小鼠MSC的提取和培養(yǎng)

在無(wú)菌條件下從小鼠骨髓中提取髓內(nèi)細(xì)胞，使用針對(duì)小鼠MSC 的選擇培養(yǎng)液MesenCult 套裝（STEMCELL CAT#05513）配合貼壁法對(duì)MSC 進(jìn)行純化培養(yǎng)。所用MSC均遵照以上方法進(jìn)行了3次傳代。

2 結(jié)果

2.1 BSJDTLF中化合物的鑒定

BSJDTLF 的水溶液10 g/50 mL，經(jīng)過(guò)濃縮、凍干制取上機(jī)樣本。隨后使用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。將采集到的原始數(shù)據(jù)利用Xcalibur（4.2，Thermo-Fisher Scientific）軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄、分析及處理。其中化合物的鑒定是基于文獻(xiàn)的基礎(chǔ)，根據(jù)化合物的質(zhì)荷比、二級(jí)碎片進(jìn)行的。通過(guò)準(zhǔn)確的分子離子質(zhì)量及二級(jí)碎片進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)精度誤差閾值在5 ppm以內(nèi)，共鑒定出182個(gè)化合物，鑒定結(jié)果見圖2。

圖2 正、負(fù)離子模式下的水提物總離子流圖

2.2 BSJDTLF中化合物的靶點(diǎn)

使用TCMSP與CTD數(shù)據(jù)庫(kù)［18］，在數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索與質(zhì)譜結(jié)果中182個(gè)化合物相關(guān)的靶點(diǎn)，將這些靶點(diǎn)結(jié)果通過(guò)Uniprot及DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)一為基因名稱。去除重復(fù)項(xiàng)后，共得到與其中100種化合物相關(guān)的1 969個(gè)靶點(diǎn)。

2.3 BSJDTLF與白血病相關(guān)靶點(diǎn)的篩選

以“l(fā)eukemia”為關(guān)鍵字，分別在NCBI GENE 與GENE CARD 數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索，其中，在NCBI 中檢索到29 693 個(gè)結(jié)果，在GENE CARD 檢索到15 655 個(gè)結(jié)果。為了增強(qiáng)疾病與基因的相關(guān)性，筆者對(duì)兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索結(jié)果進(jìn)行了交集比對(duì)，再去除重復(fù)項(xiàng)后，共得到了2 864個(gè)共有靶點(diǎn)作為白血病相關(guān)靶點(diǎn)使用。隨后，將在TCMSP與CTD數(shù)據(jù)庫(kù)得到的BSJDTLF中化合物相關(guān)基因（1 969個(gè)）與2 864個(gè)白血病相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行比對(duì)，共篩選到了623個(gè)靶點(diǎn)。這些靶點(diǎn)可能揭示BSJDTLF 作用于白血病、延緩復(fù)發(fā)的具體機(jī)制。見圖3。

圖3 BSJDTLF中化合物1 969個(gè)靶點(diǎn)與NCBI和GENE CARD中白血病相關(guān)基因的交集

2.4 BSJDTLF給藥小鼠MSC的蛋白質(zhì)組學(xué)分析

通過(guò)質(zhì)譜與數(shù)據(jù)庫(kù)分析篩選到了623 個(gè)BSJDTLF作用于白血病的可能靶點(diǎn)。但是這種基于已有實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)庫(kù)分析可能存在偏差，為了進(jìn)一步驗(yàn)證BSJDTLF對(duì)于MSC 的作用關(guān)系，本研究采用iTRAQ（isobaric tagsf or relative and absolute quantitation）技 術(shù) 對(duì)BSJDTLF 灌胃小鼠及NS 灌胃小鼠的MSC 進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)分析，以明確其產(chǎn)生差異的靶點(diǎn)。iTRAQ 是一種相對(duì)和絕對(duì)定量的高通量分析方法，目前被廣泛的運(yùn)用到癌癥，尤其是白血病的研究中［19-20］。

將未經(jīng)處理的7 周齡BALB/c 小鼠隨機(jī)分為兩組（n=6），分別給予BSJDTLF 和NS灌胃（0.2 mL/d）。給藥28 d 后，處死小鼠并提取骨髓細(xì)胞，使用選擇培養(yǎng)液，通過(guò)貼壁法對(duì)小鼠的MSC 進(jìn)行了選擇性擴(kuò)增。在得到滿足蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)所需數(shù)量的細(xì)胞后，使用iTRAQ 技術(shù)將兩組樣本進(jìn)行了高通量蛋白質(zhì)組學(xué)測(cè)定。對(duì)兩組的蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)后，共得到了728 個(gè)差異蛋白（差異性＞1.2）。這些差異蛋白為進(jìn)一步分析BSJDTLF 作用于白血病的潛在靶點(diǎn)提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

2.5 BSJDTLF潛在靶點(diǎn)的分析

將數(shù)據(jù)庫(kù)中BSJDTLF 與白血病相關(guān)的623 個(gè)靶點(diǎn)同蛋白組學(xué)產(chǎn)生差異的728 個(gè)蛋白進(jìn)行了比對(duì)、分析。再去除重復(fù)結(jié)果后，共得到了50 個(gè)共表達(dá)的基因（見圖4）。這50 個(gè)共表達(dá)基因可能成為揭示BSJDTLF 作用途徑的潛在靶點(diǎn)。在篩選出補(bǔ)腎解毒的潛在靶點(diǎn)后，通過(guò)STRING 對(duì)這些靶點(diǎn)進(jìn)行了PPI 與功能、通路的富集分析，隨后使用Cytoscape 對(duì)個(gè)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行了優(yōu)化。見圖5。

圖4 數(shù)據(jù)庫(kù)、疾病相關(guān)基因、蛋白質(zhì)組學(xué)的結(jié)果進(jìn)行交集比對(duì)圖

圖5 50個(gè)潛在靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

通過(guò)Cytoscape，同時(shí)也構(gòu)建出了這50個(gè)潛在靶點(diǎn)與BSJDTLF 中化合物的關(guān)系，這些靶點(diǎn)共與29種化合物相對(duì)應(yīng)。見圖6。

圖6 潛在靶點(diǎn)與相關(guān)化合物的網(wǎng)絡(luò)圖

此外，本研究還使用STRING 對(duì)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行了GO 條目下功能注釋的富集分析。從細(xì)胞組分（cellular component，CC）、分 子 功 能（molecular function，MF）、生物過(guò)程（biological process，BP）三個(gè)部分描繪了潛在靶點(diǎn)的功能富集（見圖7）。在這三個(gè)方面本研究著重于BP 部分的功能富集，其中在“strength”值排名前15 的條目中包含了腫瘤壞死因子產(chǎn)生、調(diào)控 及 自噬細(xì) 胞 相關(guān)（GO：0032640、GO：1903265、GO：0048102）。見表1。

表1 功能富集中與生物過(guò)程有關(guān)的排名前15的條目

圖7 潛在靶點(diǎn)的功能富集分析圖

在KEGG通路富集分析中，選取了排名前15的通路，錯(cuò)誤發(fā)生率（false discovery rate）均＜0.01。通路中包含了與慢性白血?。╩mu05220）、凋亡（mmu04215）、急性白血病（mmu05221）、VEGF（mmu04370）相關(guān)的通路。見表2。

表2 通路富集中排名前15的KEGG通路

2.6 潛在靶點(diǎn)K-Core核的分析

選取Cytoscape3.7.1 中的MCODE 插件對(duì)50 個(gè)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行K-Core 分析。K-Core 是一種分解相互作用的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系的拓?fù)浞治?，可以在?fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系結(jié)構(gòu)中尋找到重要的節(jié)點(diǎn)［21］。在置信度＞15，KCore為2的條件下，篩選出了潛在靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)中的核心子網(wǎng)絡(luò)（見圖8）。這個(gè)核心子網(wǎng)絡(luò)中，包含了10 個(gè)靶點(diǎn)：Mmp2、Stmn1、Icam1、Creb1、App、Alb、Cdk1、Dnmt1、Fth1、Rela。通過(guò)中心性計(jì)算，Icam1、Alb、Rela 三個(gè)靶點(diǎn)的中介中心性最高。這個(gè)核心子網(wǎng)絡(luò)中的節(jié)點(diǎn)，尤其是Icam1、Alb、Rela 及相關(guān)基因可能是BSJDTLF的作用靶點(diǎn)。

圖8 50個(gè)潛在靶點(diǎn)的K-Core

3 討論

在本研究中，首先通過(guò)液相色譜質(zhì)譜分析BSJDTLF 中的化學(xué)成分，共發(fā)現(xiàn)182 種化合物。在TCMSP 和CTD 中將這些化合物的靶點(diǎn)進(jìn)行檢索，得到了與之相關(guān)的1 969個(gè)靶點(diǎn)。將1 969個(gè)靶點(diǎn)與白血病相關(guān)靶點(diǎn)和蛋白質(zhì)組學(xué)的差異蛋白進(jìn)行了比對(duì)，篩選出50 個(gè)潛在靶點(diǎn)。最后，對(duì)這些潛在靶點(diǎn)進(jìn)行了功能富集、通路富集、PPI和K-Core方面的數(shù)據(jù)分析。

在功能富集分析中，首先著重于BP 部分的內(nèi)容。此部分排名前15 的條目中，發(fā)現(xiàn)了與腫瘤壞死因子（TNF）相關(guān)的富集（GO：0032640、GO：1903265）。TNF被證明與白血病的關(guān)系密切，它參與白血病發(fā)生的所有步驟，包括細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖、血管生成和髓外浸潤(rùn)［22］。尤其在白血病干細(xì)胞（LSC）對(duì)骨髓微環(huán)境的改造中，TNF 與其他因子共同誘導(dǎo)了MSC 的改變［23］。抑制TNF-1α 的表達(dá)可以增強(qiáng)化療對(duì)白血病干細(xì)胞的作用，減少耐藥性，因此TNF 可以作為白血病治療的靶點(diǎn)［24］。在中醫(yī)藥的有關(guān)研究中，有證據(jù)表明人參皂苷可以對(duì)白血病細(xì)胞的TNF 產(chǎn)生影響，從而抑制LSC 的增殖［25］。

在KEGG 分析中，除去慢性白血病（mmu05220）、急性白血病（mmu05221）的相關(guān)通路，VEGF 信號(hào)通路（mmu04370）也應(yīng)引起重視。在非腫瘤化的龕中，VEGF 參與介導(dǎo)MSC 的增殖與分化，對(duì)機(jī)體的功能修復(fù)起到正向作用［26-27］。然而在被白細(xì)胞作用的微環(huán)境中，VEGF 產(chǎn)生了異常的上調(diào)［28］。這種上調(diào)介導(dǎo)的血管重塑構(gòu)建了針對(duì)HSC 的“陷阱”，使得MSC 對(duì)HSC 的支持作用減弱，同時(shí)又保護(hù)了LSC 免于化療殺傷［29］。而對(duì)于VEGF 的靶向治療大多數(shù)基于已有藥物的聯(lián)合用藥［30-31］。這些藥物雖然可以抑制白血病中VEGF 的分泌，延長(zhǎng)了患者的生存時(shí)間［32］。但是，針對(duì)VEGF 的靶向藥物或減緩聯(lián)合用藥副作用的研究仍有很大的空間［32］。

在PPI分析中，使用K-Core對(duì)潛在靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)的核心子網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行了篩選，這個(gè)子網(wǎng)絡(luò)共包含了10 個(gè)節(jié) 點(diǎn)：Mmp2、Stmn1、Icam1、Creb1、App、Alb、Cdk1、Dnmt1、Fth1、Rela。其中，Icam1、Rela 是兩個(gè)中介中心節(jié)點(diǎn)。Icam1（即CD54），可被IL-1 和TNF 誘導(dǎo)，并被巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)［33-34］。在白血病中，Icam1 也被證實(shí)與白血病細(xì)胞對(duì)龕的改造相關(guān)，白血病細(xì)胞會(huì)分泌刺激因子增強(qiáng)Icam1 的分泌水平，從而促進(jìn)其與龕的黏附［35］。但是，針對(duì)Icam1 的靶向治療研究進(jìn)展并不順利，這源于其在正常的龕和腫瘤化的龕中扮演的不同角色［36］。Rela（p65）是NF-κB的結(jié)合因子，在研究中被證明與MSC 的增殖、分化關(guān)系密切［37］。在癌癥環(huán)境下，Rela 的激活可以促進(jìn)MSC 的腫瘤化［38］。白血病的臨床治療中，伊馬替尼耐藥白血病細(xì)胞內(nèi)的Rela 的表達(dá)水平明顯上調(diào)［39］。針對(duì)Rela的靶向治療可能為白血病提供一種新的治療方案［40］。此外，也有文獻(xiàn)報(bào)道在急性白血病中Rela 與TNF 存在高度相關(guān)性［41］。這與筆者在功能富集分析結(jié)果中出現(xiàn)TNF的相關(guān)條目相對(duì)應(yīng)。

相關(guān)實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)驗(yàn)證了筆者篩選的潛在靶點(diǎn)與白血病的相關(guān)性以及在白血病治療中的潛在價(jià)值。針對(duì)疾病多靶點(diǎn)的調(diào)控研究是近年來(lái)中醫(yī)藥研究的主要方向之一，在多種癌癥的治療方面取得了進(jìn)展［42-43］。同時(shí)，中藥在疾病中的雙向調(diào)節(jié)作用也被越來(lái)越多的研究證明［44］。中藥的雙向調(diào)節(jié)作用是否會(huì)在多靶點(diǎn)的調(diào)控中發(fā)揮獨(dú)特的作用，這種調(diào)節(jié)能否運(yùn)用到白血病的治療中？這為今后的研究提出了方向。

綜上所述，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與蛋白組學(xué)相結(jié)合的方法，從理論和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證方面篩選出了BSJDTLF 的潛在靶點(diǎn)。還通過(guò)文獻(xiàn)挖掘，分析結(jié)果中的功能富集、通路富集和PPI 節(jié)點(diǎn)在白血病中的作用。這些研究為進(jìn)一步揭示BSJDTLF 的作用機(jī)制提供了科學(xué)依據(jù)。在后續(xù)的研究中，筆者將利用白血病小鼠模型對(duì)篩選出的潛在結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

4 結(jié)論

本研究使用來(lái)自多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的BSJDTLF 相關(guān)靶標(biāo)以及通過(guò)Cytoscape 構(gòu)建了中藥復(fù)方化合物-靶點(diǎn)-疾病的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，篩選網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，預(yù)測(cè)了補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方阻止白血病復(fù)發(fā)的具體機(jī)制，為進(jìn)一步的研究提供了科學(xué)基礎(chǔ)。