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    補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方阻止白血病復(fù)發(fā)機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

    2021-10-09 08:53:40孫維龍許鑫欣陶霞施偉鵬竺佳范晨陽(yáng)李帝萱楊向東
    中醫(yī)藥信息 2021年6期
    關(guān)鍵詞:小鼠數(shù)據(jù)庫(kù)分析

    孫維龍,許鑫欣,陶霞,施偉鵬,竺佳,范晨陽(yáng),李帝萱,楊向東

    (天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,國(guó)家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心,天津 300381)

    臨床中化療是成人急性白血?。ˋL)治療的主要選擇,但預(yù)后通常不容樂(lè)觀[1-2]。急性髓細(xì)胞性白血?。ˋML)和急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL)的長(zhǎng)期緩解率水平很低,尤其ALL 的長(zhǎng)期緩解率僅為30%~40%,化療后復(fù)發(fā)仍是困擾AL 治療的重要問(wèn)題[3-4]。在骨髓中,對(duì)造血干細(xì)胞(HSC)的增殖、分化、存活和歸巢起支持作用的最小解剖結(jié)構(gòu)是骨髓微環(huán)境(即龕)。這個(gè)微環(huán)境由骨細(xì)胞、血管周細(xì)胞、骨內(nèi)膜細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及間充質(zhì)干細(xì)胞等共同構(gòu)成[5]。其中,間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)與HSC 的關(guān)系尤為密切,它可以通過(guò)物理支持和分泌可溶性因子來(lái)調(diào)控HSC 的維持和分化,是龕中的關(guān)鍵元素[6]。在白血病進(jìn)程中,白血病干細(xì)胞(LSC)會(huì)通過(guò)“劫持”作用將龕改造為適合LSC 生長(zhǎng)并改變HSC 功能的環(huán)境[7]。不同的細(xì)胞因子利用多種途徑實(shí)現(xiàn)了這種作用,并由此介導(dǎo)了LSC的動(dòng)員、歸巢和耐藥性,最終成為臨床復(fù)發(fā)的重要原因[8]。針對(duì)被“劫持”龕的治療,可能為治療白血病復(fù)發(fā)提供新的研究方向[9]。

    現(xiàn)代中醫(yī)藥作為中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的發(fā)展和延伸,是我國(guó)臨床醫(yī)學(xué)的重要組成部分。癌癥的臨床治療中,中醫(yī)藥憑借增效減毒、預(yù)防復(fù)發(fā)、延長(zhǎng)生存時(shí)間等多方面的優(yōu)勢(shì),發(fā)揮著獨(dú)特的補(bǔ)充作用[10]。其中,補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方對(duì)于延長(zhǎng)復(fù)發(fā)難治白血病患者生存周期的效果顯著[11]。在前期研究中,筆者證明了補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方(BSJDTLF)對(duì)輻射后小鼠的MSC 具有修復(fù)作用,并能在MSC 與K562 細(xì)胞的共培養(yǎng)中下調(diào)白血病相關(guān)基因[12]。這為研究BSJDTLF 的藥理機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

    隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)與信息技術(shù)的發(fā)展,中醫(yī)藥的研究已經(jīng)從傳統(tǒng)的“單一藥物”“單一靶點(diǎn)”過(guò)渡到“多組分”“多靶點(diǎn)”的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究模式。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中藥靶點(diǎn)預(yù)測(cè)、生物活性化合物篩選、毒性評(píng)價(jià)、機(jī)制研究等方面發(fā)揮了巨大的作用,為中醫(yī)藥復(fù)方的研究提供了新的策略[13-14]。同時(shí),基于高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,蛋白組學(xué)、基因組學(xué)也越來(lái)越多參與疾病研究,尤其是腫瘤的研究中[15-16]。其中蛋白組學(xué)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞和組織內(nèi)復(fù)雜的蛋白質(zhì)進(jìn)行全面的定性和定量分析,較為全面的覆蓋不同樣本中蛋白質(zhì)的變化關(guān)系[17]。因此,高通量蛋白組學(xué)可以從側(cè)面驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的篩選成果。在本研究中,筆者首先基于質(zhì)譜分析明確BSJDTLF 的化合物成分,再通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)相結(jié)合的方法,研究BSJDTLF 與白血病之間的關(guān)系,并對(duì)其作用機(jī)制、靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)。具體研究流程見圖1。

    圖1 研究分析的流程圖

    1 材料和方法

    1.1 BSJDTLF中化合物的鑒定

    1.1.1 BSJDTLF的藥物組成

    組方:全蝎10 g,僵蠶10 g,鹿角片15 g,龜甲15 g,白附子10 g,人參10 g,枸杞子10 g,滑石10 g,青黛5 g,甘草5 g。藥物來(lái)源于天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房。

    1.1.2 BSJDTLF的樣品制備

    取復(fù)方藥粉10 g加100 mL水煎煮30 min,煎煮后約得50 mL提取液,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45 ℃水浴上濃縮至一定體積后的復(fù)方濃縮液,將濃縮液放入培養(yǎng)皿中,在-80 ℃冰箱預(yù)冷凍后,放入凍干機(jī)至過(guò)夜凍干,取出凍干后的樣品密封保存待用。精確稱取10.00 mg 樣品至離心管中,加入1 mL 超純水溶解,離心(14 000 rpm/min,20 min,4 ℃),取上清液100 μL至進(jìn)樣小瓶中,以超純水作為空白溶劑,進(jìn)樣。

    1.1.3 質(zhì)譜條件

    質(zhì)譜分析在Thermo Fisher Q-Orbitrap MS(QExative)系統(tǒng)下完成,離子源為高能電噴霧離子源(HESI 源),掃描模式為Full-ms/ dd-ms2,正負(fù)離子模式下同時(shí)采集。源參數(shù):源噴霧電壓(spray voltage)正離子為3.5 kV,負(fù)離子為2.8 kV,毛細(xì)管溫度(capillary temperature)320 ℃,離子源加熱溫度(probe heater temperature)350 ℃,鞘氣(sheath gas,N2)為35,輔助氣(auxiliary gas,N2)為10,S-lens 水平為50 V,碰撞能量為20、40、60 V,掃描范圍為m/z 100~1 500,分辨率為70 000。

    1.1.4 質(zhì)譜儀器

    超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀UHPLC-/ESI-QOrbitrap MS(美國(guó)Thermo Fisher Scientific);3K15 型高速離心機(jī)(美國(guó)Sigma 公司);KQ-250E 型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);AX 205 型十萬(wàn)分之一天平(瑞士Mettler Toledo 公司);BP121S 型萬(wàn)分之一天平(德國(guó)Sartorius 公司);XW-80A 型渦旋混合器(上海滬西分析儀器廠);日本東京理化EYELA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀DPE-2150(山東愛博科技貿(mào)易有限公司)。

    1.1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

    將采集到的原始數(shù)據(jù)利用Xcalibur(4.2,Thermo-Fisher Scientific)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄、分析及處理,化合物的鑒定是基于文獻(xiàn)基礎(chǔ),根據(jù)化合物的質(zhì)荷比、二級(jí)碎片進(jìn)行。

    1.2 化合物相關(guān)靶點(diǎn)的收集

    質(zhì)譜結(jié)果中化合物的相關(guān)靶點(diǎn)是在TCMSP(https://tcmspw.com/tcmsp.php)與CTD(http://ctdbase.org/)兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到的。檢索結(jié)果通過(guò)Uniprot(https://www.uniprot.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)一為基因名稱。并對(duì)統(tǒng)一名稱后的靶點(diǎn)與化合物對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)行了合并,并刪除了重復(fù)項(xiàng)。

    1.3 已知白血病相關(guān)靶點(diǎn)的收集

    通過(guò)“l(fā)eukemia”為關(guān)鍵詞在NCBI(https://www.ncbi. nlm. nih. gov/gene/)于GENE CARD(https://www.genecards. org/)兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行了搜索,去除了搜索結(jié)果中的重復(fù)基因,整合了兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)共有的2 864個(gè)靶點(diǎn)。

    1.4 蛋白質(zhì)組學(xué)

    實(shí)驗(yàn)中的蛋白質(zhì)組學(xué)測(cè)定是委托天津舍維斯生物技術(shù)有限公司進(jìn)行(項(xiàng)目編號(hào):QLSWS003-20190614001),采用了由ABSCIEX公司研發(fā)的iTRAQ技術(shù)。

    1.5 GO、KEGG和關(guān)鍵子網(wǎng)絡(luò)的分析

    首先使用STRING(https://string-db.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行了PPI 分析,并得到了相關(guān)靶點(diǎn)的功能和通路富集。隨后,將PPI 關(guān)系導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1 中進(jìn)行了網(wǎng)絡(luò)圖的繪制,使用MCODE 插件對(duì)其核心子網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行篩選。

    1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    7 周 齡 的 雄 性BALB/c 小 鼠,SPF 級(jí),體 質(zhì) 量(22±2)g,北京華阜康科技股份有限公司,許可證編號(hào)SCXK-20190008。飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物中心SPF級(jí)屏障內(nèi),給予常規(guī)飲食,定期更換墊料。

    1.7 分組及給藥方法

    采用隨機(jī)分組法分為給藥組與對(duì)照組(n=6),給藥組給予BSJDTLF(以10 g/50 mL 的濃度制作水煎劑)灌胃,每天1 次,每次0.2 mL。對(duì)照組給予生理鹽水(NS)灌胃每天1 次,每次0.2 mL。4 周后統(tǒng)一處死小鼠,并提取MSC。

    1.8 小鼠MSC的提取和培養(yǎng)

    在無(wú)菌條件下從小鼠骨髓中提取髓內(nèi)細(xì)胞,使用針對(duì)小鼠MSC 的選擇培養(yǎng)液MesenCult 套裝(STEMCELL CAT#05513)配合貼壁法對(duì)MSC 進(jìn)行純化培養(yǎng)。所用MSC均遵照以上方法進(jìn)行了3次傳代。

    2 結(jié)果

    2.1 BSJDTLF中化合物的鑒定

    BSJDTLF 的水溶液10 g/50 mL,經(jīng)過(guò)濃縮、凍干制取上機(jī)樣本。隨后使用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。將采集到的原始數(shù)據(jù)利用Xcalibur(4.2,Thermo-Fisher Scientific)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄、分析及處理。其中化合物的鑒定是基于文獻(xiàn)的基礎(chǔ),根據(jù)化合物的質(zhì)荷比、二級(jí)碎片進(jìn)行的。通過(guò)準(zhǔn)確的分子離子質(zhì)量及二級(jí)碎片進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)精度誤差閾值在5 ppm以內(nèi),共鑒定出182個(gè)化合物,鑒定結(jié)果見圖2。

    圖2 正、負(fù)離子模式下的水提物總離子流圖

    2.2 BSJDTLF中化合物的靶點(diǎn)

    使用TCMSP與CTD數(shù)據(jù)庫(kù)[18],在數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索與質(zhì)譜結(jié)果中182個(gè)化合物相關(guān)的靶點(diǎn),將這些靶點(diǎn)結(jié)果通過(guò)Uniprot及DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)一為基因名稱。去除重復(fù)項(xiàng)后,共得到與其中100種化合物相關(guān)的1 969個(gè)靶點(diǎn)。

    2.3 BSJDTLF與白血病相關(guān)靶點(diǎn)的篩選

    以“l(fā)eukemia”為關(guān)鍵字,分別在NCBI GENE 與GENE CARD 數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索,其中,在NCBI 中檢索到29 693 個(gè)結(jié)果,在GENE CARD 檢索到15 655 個(gè)結(jié)果。為了增強(qiáng)疾病與基因的相關(guān)性,筆者對(duì)兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索結(jié)果進(jìn)行了交集比對(duì),再去除重復(fù)項(xiàng)后,共得到了2 864個(gè)共有靶點(diǎn)作為白血病相關(guān)靶點(diǎn)使用。隨后,將在TCMSP與CTD數(shù)據(jù)庫(kù)得到的BSJDTLF中化合物相關(guān)基因(1 969個(gè))與2 864個(gè)白血病相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行比對(duì),共篩選到了623個(gè)靶點(diǎn)。這些靶點(diǎn)可能揭示BSJDTLF 作用于白血病、延緩復(fù)發(fā)的具體機(jī)制。見圖3。

    圖3 BSJDTLF中化合物1 969個(gè)靶點(diǎn)與NCBI和GENE CARD中白血病相關(guān)基因的交集

    2.4 BSJDTLF給藥小鼠MSC的蛋白質(zhì)組學(xué)分析

    通過(guò)質(zhì)譜與數(shù)據(jù)庫(kù)分析篩選到了623 個(gè)BSJDTLF作用于白血病的可能靶點(diǎn)。但是這種基于已有實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)庫(kù)分析可能存在偏差,為了進(jìn)一步驗(yàn)證BSJDTLF對(duì)于MSC 的作用關(guān)系,本研究采用iTRAQ(isobaric tagsf or relative and absolute quantitation)技 術(shù) 對(duì)BSJDTLF 灌胃小鼠及NS 灌胃小鼠的MSC 進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)分析,以明確其產(chǎn)生差異的靶點(diǎn)。iTRAQ 是一種相對(duì)和絕對(duì)定量的高通量分析方法,目前被廣泛的運(yùn)用到癌癥,尤其是白血病的研究中[19-20]。

    將未經(jīng)處理的7 周齡BALB/c 小鼠隨機(jī)分為兩組(n=6),分別給予BSJDTLF 和NS灌胃(0.2 mL/d)。給藥28 d 后,處死小鼠并提取骨髓細(xì)胞,使用選擇培養(yǎng)液,通過(guò)貼壁法對(duì)小鼠的MSC 進(jìn)行了選擇性擴(kuò)增。在得到滿足蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)所需數(shù)量的細(xì)胞后,使用iTRAQ 技術(shù)將兩組樣本進(jìn)行了高通量蛋白質(zhì)組學(xué)測(cè)定。對(duì)兩組的蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)后,共得到了728 個(gè)差異蛋白(差異性>1.2)。這些差異蛋白為進(jìn)一步分析BSJDTLF 作用于白血病的潛在靶點(diǎn)提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

    2.5 BSJDTLF潛在靶點(diǎn)的分析

    將數(shù)據(jù)庫(kù)中BSJDTLF 與白血病相關(guān)的623 個(gè)靶點(diǎn)同蛋白組學(xué)產(chǎn)生差異的728 個(gè)蛋白進(jìn)行了比對(duì)、分析。再去除重復(fù)結(jié)果后,共得到了50 個(gè)共表達(dá)的基因(見圖4)。這50 個(gè)共表達(dá)基因可能成為揭示BSJDTLF 作用途徑的潛在靶點(diǎn)。在篩選出補(bǔ)腎解毒的潛在靶點(diǎn)后,通過(guò)STRING 對(duì)這些靶點(diǎn)進(jìn)行了PPI 與功能、通路的富集分析,隨后使用Cytoscape 對(duì)個(gè)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行了優(yōu)化。見圖5。

    圖4 數(shù)據(jù)庫(kù)、疾病相關(guān)基因、蛋白質(zhì)組學(xué)的結(jié)果進(jìn)行交集比對(duì)圖

    圖5 50個(gè)潛在靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

    通過(guò)Cytoscape,同時(shí)也構(gòu)建出了這50個(gè)潛在靶點(diǎn)與BSJDTLF 中化合物的關(guān)系,這些靶點(diǎn)共與29種化合物相對(duì)應(yīng)。見圖6。

    圖6 潛在靶點(diǎn)與相關(guān)化合物的網(wǎng)絡(luò)圖

    此外,本研究還使用STRING 對(duì)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行了GO 條目下功能注釋的富集分析。從細(xì)胞組分(cellular component,CC)、分 子 功 能(molecular function,MF)、生物過(guò)程(biological process,BP)三個(gè)部分描繪了潛在靶點(diǎn)的功能富集(見圖7)。在這三個(gè)方面本研究著重于BP 部分的功能富集,其中在“strength”值排名前15 的條目中包含了腫瘤壞死因子產(chǎn)生、調(diào)控 及 自噬細(xì) 胞 相關(guān)(GO:0032640、GO:1903265、GO:0048102)。見表1。

    表1 功能富集中與生物過(guò)程有關(guān)的排名前15的條目

    圖7 潛在靶點(diǎn)的功能富集分析圖

    在KEGG通路富集分析中,選取了排名前15的通路,錯(cuò)誤發(fā)生率(false discovery rate)均<0.01。通路中包含了與慢性白血?。╩mu05220)、凋亡(mmu04215)、急性白血病(mmu05221)、VEGF(mmu04370)相關(guān)的通路。見表2。

    表2 通路富集中排名前15的KEGG通路

    2.6 潛在靶點(diǎn)K-Core核的分析

    選取Cytoscape3.7.1 中的MCODE 插件對(duì)50 個(gè)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行K-Core 分析。K-Core 是一種分解相互作用的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系的拓?fù)浞治?,可以在?fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系結(jié)構(gòu)中尋找到重要的節(jié)點(diǎn)[21]。在置信度>15,KCore為2的條件下,篩選出了潛在靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)中的核心子網(wǎng)絡(luò)(見圖8)。這個(gè)核心子網(wǎng)絡(luò)中,包含了10 個(gè)靶點(diǎn):Mmp2、Stmn1、Icam1、Creb1、App、Alb、Cdk1、Dnmt1、Fth1、Rela。通過(guò)中心性計(jì)算,Icam1、Alb、Rela 三個(gè)靶點(diǎn)的中介中心性最高。這個(gè)核心子網(wǎng)絡(luò)中的節(jié)點(diǎn),尤其是Icam1、Alb、Rela 及相關(guān)基因可能是BSJDTLF的作用靶點(diǎn)。

    圖8 50個(gè)潛在靶點(diǎn)的K-Core

    3 討論

    在本研究中,首先通過(guò)液相色譜質(zhì)譜分析BSJDTLF 中的化學(xué)成分,共發(fā)現(xiàn)182 種化合物。在TCMSP 和CTD 中將這些化合物的靶點(diǎn)進(jìn)行檢索,得到了與之相關(guān)的1 969個(gè)靶點(diǎn)。將1 969個(gè)靶點(diǎn)與白血病相關(guān)靶點(diǎn)和蛋白質(zhì)組學(xué)的差異蛋白進(jìn)行了比對(duì),篩選出50 個(gè)潛在靶點(diǎn)。最后,對(duì)這些潛在靶點(diǎn)進(jìn)行了功能富集、通路富集、PPI和K-Core方面的數(shù)據(jù)分析。

    在功能富集分析中,首先著重于BP 部分的內(nèi)容。此部分排名前15 的條目中,發(fā)現(xiàn)了與腫瘤壞死因子(TNF)相關(guān)的富集(GO:0032640、GO:1903265)。TNF被證明與白血病的關(guān)系密切,它參與白血病發(fā)生的所有步驟,包括細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖、血管生成和髓外浸潤(rùn)[22]。尤其在白血病干細(xì)胞(LSC)對(duì)骨髓微環(huán)境的改造中,TNF 與其他因子共同誘導(dǎo)了MSC 的改變[23]。抑制TNF-1α 的表達(dá)可以增強(qiáng)化療對(duì)白血病干細(xì)胞的作用,減少耐藥性,因此TNF 可以作為白血病治療的靶點(diǎn)[24]。在中醫(yī)藥的有關(guān)研究中,有證據(jù)表明人參皂苷可以對(duì)白血病細(xì)胞的TNF 產(chǎn)生影響,從而抑制LSC 的增殖[25]。

    在KEGG 分析中,除去慢性白血病(mmu05220)、急性白血病(mmu05221)的相關(guān)通路,VEGF 信號(hào)通路(mmu04370)也應(yīng)引起重視。在非腫瘤化的龕中,VEGF 參與介導(dǎo)MSC 的增殖與分化,對(duì)機(jī)體的功能修復(fù)起到正向作用[26-27]。然而在被白細(xì)胞作用的微環(huán)境中,VEGF 產(chǎn)生了異常的上調(diào)[28]。這種上調(diào)介導(dǎo)的血管重塑構(gòu)建了針對(duì)HSC 的“陷阱”,使得MSC 對(duì)HSC 的支持作用減弱,同時(shí)又保護(hù)了LSC 免于化療殺傷[29]。而對(duì)于VEGF 的靶向治療大多數(shù)基于已有藥物的聯(lián)合用藥[30-31]。這些藥物雖然可以抑制白血病中VEGF 的分泌,延長(zhǎng)了患者的生存時(shí)間[32]。但是,針對(duì)VEGF 的靶向藥物或減緩聯(lián)合用藥副作用的研究仍有很大的空間[32]。

    在PPI分析中,使用K-Core對(duì)潛在靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)的核心子網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行了篩選,這個(gè)子網(wǎng)絡(luò)共包含了10 個(gè)節(jié) 點(diǎn):Mmp2、Stmn1、Icam1、Creb1、App、Alb、Cdk1、Dnmt1、Fth1、Rela。其中,Icam1、Rela 是兩個(gè)中介中心節(jié)點(diǎn)。Icam1(即CD54),可被IL-1 和TNF 誘導(dǎo),并被巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)[33-34]。在白血病中,Icam1 也被證實(shí)與白血病細(xì)胞對(duì)龕的改造相關(guān),白血病細(xì)胞會(huì)分泌刺激因子增強(qiáng)Icam1 的分泌水平,從而促進(jìn)其與龕的黏附[35]。但是,針對(duì)Icam1 的靶向治療研究進(jìn)展并不順利,這源于其在正常的龕和腫瘤化的龕中扮演的不同角色[36]。Rela(p65)是NF-κB的結(jié)合因子,在研究中被證明與MSC 的增殖、分化關(guān)系密切[37]。在癌癥環(huán)境下,Rela 的激活可以促進(jìn)MSC 的腫瘤化[38]。白血病的臨床治療中,伊馬替尼耐藥白血病細(xì)胞內(nèi)的Rela 的表達(dá)水平明顯上調(diào)[39]。針對(duì)Rela的靶向治療可能為白血病提供一種新的治療方案[40]。此外,也有文獻(xiàn)報(bào)道在急性白血病中Rela 與TNF 存在高度相關(guān)性[41]。這與筆者在功能富集分析結(jié)果中出現(xiàn)TNF的相關(guān)條目相對(duì)應(yīng)。

    相關(guān)實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)驗(yàn)證了筆者篩選的潛在靶點(diǎn)與白血病的相關(guān)性以及在白血病治療中的潛在價(jià)值。針對(duì)疾病多靶點(diǎn)的調(diào)控研究是近年來(lái)中醫(yī)藥研究的主要方向之一,在多種癌癥的治療方面取得了進(jìn)展[42-43]。同時(shí),中藥在疾病中的雙向調(diào)節(jié)作用也被越來(lái)越多的研究證明[44]。中藥的雙向調(diào)節(jié)作用是否會(huì)在多靶點(diǎn)的調(diào)控中發(fā)揮獨(dú)特的作用,這種調(diào)節(jié)能否運(yùn)用到白血病的治療中?這為今后的研究提出了方向。

    綜上所述,本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與蛋白組學(xué)相結(jié)合的方法,從理論和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證方面篩選出了BSJDTLF 的潛在靶點(diǎn)。還通過(guò)文獻(xiàn)挖掘,分析結(jié)果中的功能富集、通路富集和PPI 節(jié)點(diǎn)在白血病中的作用。這些研究為進(jìn)一步揭示BSJDTLF 的作用機(jī)制提供了科學(xué)依據(jù)。在后續(xù)的研究中,筆者將利用白血病小鼠模型對(duì)篩選出的潛在結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

    4 結(jié)論

    本研究使用來(lái)自多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的BSJDTLF 相關(guān)靶標(biāo)以及通過(guò)Cytoscape 構(gòu)建了中藥復(fù)方化合物-靶點(diǎn)-疾病的關(guān)系網(wǎng)絡(luò),篩選網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn),預(yù)測(cè)了補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方阻止白血病復(fù)發(fā)的具體機(jī)制,為進(jìn)一步的研究提供了科學(xué)基礎(chǔ)。

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