對(duì)艾滋病治愈之路“舉步維艱”的元兇

HIV是導(dǎo)致艾滋病的元兇，盡管高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（HAART）能有效地抑制病毒復(fù)制，延長(zhǎng)患者的壽命，但因?yàn)镠IV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)的存在使得艾滋病無(wú)法治愈。HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)隱藏在被感染細(xì)胞的基因組中，如果中斷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療，HIV能夠恢復(fù)快速?gòu)?fù)制從而導(dǎo)致艾滋病進(jìn)展。有復(fù)制能力的HIV悄悄潛伏在細(xì)胞內(nèi)，逃脫免疫系統(tǒng)監(jiān)視，從而形成HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)。如何準(zhǔn)確檢測(cè)HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)，可為今后艾滋病治愈提供思路。以下是HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)的檢測(cè)方法特點(diǎn)的總結(jié)。

病毒生長(zhǎng)試驗(yàn)（viral OUtqrowth assav，VOA）

20世紀(jì)90年代首次采用VOA檢測(cè)HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)，將靜息CD4+T細(xì)胞稀釋到每孔只有一個(gè)細(xì)胞后，激活細(xì)胞內(nèi)病毒基因表達(dá)并誘導(dǎo)HIV-1從潛伏感染細(xì)胞中釋放，得出有復(fù)制能力的潛伏感染細(xì)胞數(shù)。該方法價(jià)格昂貴、需要大量血液培養(yǎng)、需要在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行2～3周的培養(yǎng)，且刺激一次不能激活所有的潛伏病毒，低估HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)大小。

活化T細(xì)胞后檢測(cè)HIVRNA試驗(yàn)

在T細(xì)胞激活情況下，通過(guò)qPCR檢測(cè)整個(gè)HIV-1生命周期不同形式的RNA，以RNA為基礎(chǔ)的檢測(cè)縮短了細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間。但一輪刺激并不能激活所有T細(xì)胞產(chǎn)生HIV RNA，會(huì)在一定程度上低估HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)大小。

PCR測(cè)定法檢測(cè)HlVDNA潛伏儲(chǔ)存庫(kù)

基于PCR方法檢測(cè)HIV DNA成為更簡(jiǎn)便檢測(cè)潛伏儲(chǔ)存庫(kù)的方法，并為VOA試驗(yàn)提供補(bǔ)充。這種方法簡(jiǎn)單快速。從qPCR檢測(cè)HIV-l DNA確定攜帶HIVDNA數(shù)量，到數(shù)字PCR檢測(cè)HIV-1 DNA進(jìn)行HIV絕對(duì)定量，還有Alu-PCR檢測(cè)整合HIV-1 DNA數(shù)量去評(píng)價(jià)HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)大小。

由于PCR方法檢測(cè)出的病毒97%存在缺陷，缺陷病毒不能產(chǎn)生具有傳染性的HIV，且受到細(xì)胞毒性T細(xì)胞的積極監(jiān)控。所以這種方法因?yàn)槿毕菪圆《镜臄U(kuò)增而被嚴(yán)重夸大。

治療中斷后反彈時(shí)間作為測(cè)量潛伏儲(chǔ)存庫(kù)的大小

中斷治療后病毒反彈時(shí)間反映了HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)的大小，盡管觀察治療中斷后病毒反彈時(shí)間是確定患者是否治愈的唯一方法，但是該方法作為檢測(cè)潛伏儲(chǔ)存庫(kù)大小時(shí)，存在道德問(wèn)題，如抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的中斷或重新治療會(huì)產(chǎn)生一定的耐藥性。

完整前病毒DNA檢測(cè)（nlact proviral DNA assay，IPDA）

PCR檢測(cè)HIV潛伏儲(chǔ)存庫(kù)時(shí)被缺陷病毒嚴(yán)重夸大后，隨后實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)90%缺陷病毒的缺陷發(fā)生在包裝信號(hào)（）和env區(qū)，通過(guò)數(shù)字PCR檢測(cè)和env區(qū)識(shí)別出完整病毒與缺陷病毒。