酒炙胡蘆巴炮制工藝研究

付凌燕，聶姍姍，李夢(mèng)瑤

（吉林省吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 吉林 132000）

0 引言

胡蘆巴為豆科植物胡蘆巴（Trigonella foenum-graecum L.）的干燥成熟種子。夏季果實(shí)成熟時(shí)采割植株，曬干，打下種子，除去雜質(zhì)。性溫，味苦，歸腎經(jīng)，具有溫腎、祛寒、止痛等功效[1]。臨床主要用于腎臟虛冷，小腹冷痛，小腸疝氣，寒濕腳氣，是我國(guó)傳統(tǒng)的溫腎補(bǔ)陽(yáng)藥物。由于胡蘆巴生品質(zhì)堅(jiān)硬，不易破碎。酒炙后易于粉碎，利于有效成分溶出，并且能增強(qiáng)溫腎作用。

1 炮制歷史沿革

1.1 古代炮制方法

胡蘆巴始載于《嘉祐本草》，別名苦豆、香草、蘆巴子，為豆科植物胡蘆巴（Trigonella Foenum-graecum Linn.）的干燥成熟種子。性溫，味苦，歸腎經(jīng)，具有溫腎、祛寒、止痛等功效，臨床主要用于腎臟虛冷，小腹冷痛，小腸疝氣，寒濕腳氣，是我國(guó)傳統(tǒng)的溫腎補(bǔ)陽(yáng)藥物。胡蘆巴自宋代應(yīng)用于臨床至今已有近千年的歷史，具有多種不同的炮制方法。在胡蘆巴漫長(zhǎng)的應(yīng)用過(guò)程中，有關(guān)胡蘆巴炮制的方法也得到了不斷地發(fā)展和豐富。

1.2 現(xiàn)代炮制方法

胡蘆巴現(xiàn)代多采用鹽炙法，通過(guò)對(duì)歷版《中國(guó)藥典》《全國(guó)中藥炮制規(guī)范》、各省、市等地方炮制規(guī)范收載的有關(guān)胡蘆巴的炮制方法進(jìn)行歸納整理可知，胡蘆巴的炮制方法比較一致，全國(guó)各地的炮制方法主要為鹽胡蘆巴。

2 炮制工藝研究

胡蘆巴藥材現(xiàn)代的炮制方法中酒炒比較少見(jiàn)，《浙江省中藥炮制規(guī)范2015年版》中收載的炮制方法為“取胡蘆巴飲片，照酒炙法炒至表面深黃棕色時(shí)，取出，攤涼。用時(shí)搗碎”[2]?！陡＝ㄊ≈兴庯嬈谥埔?guī)范2012年版》中收載的炮制方法為“取凈胡蘆巴，照酒炙法炒干”[3]?！陡拭C省中藥炮制規(guī)范2009年版》中收載的炮制方法為“取凈胡蘆巴，用黃酒拌勻，稍悶潤(rùn)，置鍋內(nèi)，用文火加熱，炒至表面深黃棕色，出鍋，放涼，用時(shí)搗碎”[4]?！稄V東省中藥材飲片加工炮制手冊(cè)1977年版》中收載的炮制方法為“取凈胡蘆巴，每10斤加入酒2斤，拌勻，稍悶，使吸盡酒液，蒸2 h曬干或用文火炒至身干轉(zhuǎn)黃色有香氣時(shí)取出放冷，用時(shí)打碎”[5]。上述工藝火候僅表述為文火炒干，依靠主觀判斷，人為影響因素較大，易使飲片質(zhì)量參差不齊。

2.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇

胡蘆巴原藥材標(biāo)準(zhǔn)中收載了性狀、鑒別、檢查、浸出物及含量測(cè)定項(xiàng)，其中含量測(cè)定項(xiàng)以胡蘆巴堿為測(cè)定指標(biāo)?；诖?，我們選擇以胡蘆巴的外觀性狀、浸出物和胡蘆巴堿含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)來(lái)篩選酒炒工藝參數(shù)，通過(guò)正交試驗(yàn)來(lái)確定最佳的黃酒加入量、黃酒悶潤(rùn)時(shí)間、炒制時(shí)間。

2.2 儀器與試藥

高效液相色譜儀（Waters e2695，四元低壓梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外檢測(cè)器），色譜柱：Apollo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），超聲波清洗器（JCX-400Z型，山東省濟(jì)寧市超聲電子儀器廠）。胡蘆巴堿對(duì)照品（純度78.4%，中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)：110883-201604 20 mg）。甲醇[色譜純，霍尼韋爾貿(mào)易（上海）有限公司]，純凈水（吉林娃哈哈食品有限公司），冰醋酸（色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。CY-2型炒藥機(jī)（河北安國(guó)東方制藥機(jī)械廠）。

2.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)的測(cè)定方法

采用高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》2015年版，四部，通則0512）測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.05%十二烷基磺酸鈉溶液-冰醋酸（20:80:0.1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm。理論板數(shù)按胡蘆巴堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算其含量（方法學(xué)考察見(jiàn)【含量測(cè)定】項(xiàng)下研究）。

2.4 炮制工藝的優(yōu)化

2.4.1 藥材凈制

根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版一部中胡蘆巴標(biāo)準(zhǔn)要求，該藥材凈制的方法為除去雜質(zhì)，洗凈，干燥。故藥材炒制之前需除去雜質(zhì)，取凈胡蘆巴作為酒炒原材料。

2.4.2 單因素考察

根據(jù)查閱的文獻(xiàn)及現(xiàn)有飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)記載，胡蘆巴的酒炒制方法多為“加黃酒拌勻，悶透，文火加熱，炒至有香氣逸出”，故先以外觀性狀及氣味為指標(biāo)，選取黃酒加入量、黃酒悶潤(rùn)時(shí)間、炒制時(shí)間進(jìn)行單因素考察。

2.4.2.1 黃酒加入量

選取同一批次胡蘆巴藥材5份，分別加入黃酒5%、10%、20%、30%、40%悶潤(rùn)4 h，記錄胡蘆巴的外觀和氣味。結(jié)果，黃酒加入5%時(shí)不能完全將樣品潤(rùn)透，黃酒加入20%時(shí)樣品已能完全潤(rùn)透。

2.4.2.2 黃酒悶潤(rùn)時(shí)間

選取同一批次胡蘆巴藥材5份，分別加入黃酒10%，悶潤(rùn)1 h、2 h、4 h、6 h、8 h記錄胡蘆巴的外觀和氣味。結(jié)果，悶潤(rùn)1 h樣品不能完全潤(rùn)透，悶潤(rùn)4 h樣品已能完全潤(rùn)透。

2.4.2.3 炒制時(shí)間

選取同一批次胡蘆巴藥材5份，加入黃酒10%，悶潤(rùn)4 h，置于適宜大小的炒鍋內(nèi)，于130 ℃溫度下，分別炒30 min、40 min、50 min、60 min、70 min，同一頻率翻炒均勻，取出后攤平，晾涼至室溫，記錄胡蘆巴的外觀和氣味。結(jié)果，在同一溫度下不同炒制時(shí)間飲片的外觀性狀及氣味有所不同，炒制30 min，基本無(wú)香味，炒制40 min，稍有香氣，炒制70 min以后，有炒糊的跡象，切開(kāi)后斷面顏色加深，嘗之味苦，表明該溫度下炒制藥材明顯變糊。

2.4.3 工藝參數(shù)正交試驗(yàn)考察

2.4.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，用小型炒藥鍋開(kāi)展酒炙胡蘆巴炮制工藝優(yōu)化研究，經(jīng)單因素考察，針對(duì)黃酒加入量、悶潤(rùn)時(shí)間（h）、炒制時(shí)間（min）因素，以胡蘆巴堿的含量和浸出物為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選酒炙胡蘆巴的最佳炮制工藝，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1和表2。

表1 因素水平表

表2 正交試驗(yàn)表

2.4.3.2 試驗(yàn)結(jié)果分析

表2中，6號(hào)試驗(yàn)含量最高，9號(hào)試驗(yàn)浸出物量最高，可取用之，利用正交設(shè)計(jì)軟件進(jìn)行表計(jì)算分析，分辨出主次因素，預(yù)測(cè)更好的水平組合。

通過(guò)正交表可知，各因素對(duì)試驗(yàn)指標(biāo)的影響主次順序：悶潤(rùn)時(shí)間（h）>黃酒濃度（%）=炒制時(shí)間（min），根據(jù)方差分析數(shù)據(jù)顯示各因素對(duì)胡蘆巴堿含量無(wú)顯著影響，綜合極差和方差分析結(jié)果，以胡蘆巴堿含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，所以?xún)?yōu)水平組合A2B3C2即黃酒加入10%，悶潤(rùn)6 h，炒制50 min。

通過(guò)正交表可知，各因素對(duì)試驗(yàn)指標(biāo)的影響主次順序：炒制時(shí)間（min）>黃酒濃度（%）>順悶潤(rùn)時(shí)間（h），根據(jù)方差分析數(shù)據(jù)顯示各因素對(duì)胡蘆巴堿含量無(wú)顯著影響，綜合極差和方差分析結(jié)果，以浸出物為評(píng)價(jià)指標(biāo)，所以?xún)?yōu)水平組合A3B3C2即黃酒加入20%，悶潤(rùn)6 h，炒制50 min。

2.4.4 最佳工藝的確定

2.4.4.1 初選最優(yōu)工藝條件

對(duì)胡蘆巴堿含量（%） A2B3C2 （胡蘆巴堿含量越高越好）。對(duì)浸出物含量（%） A3B3C2 （浸出物含量越高越好）。

2.4.4.2 綜合平衡確定最優(yōu)工藝

由于兩個(gè)指標(biāo)單獨(dú)，分析出來(lái)的最優(yōu)條件不一致，所以必須根據(jù)因素對(duì)兩個(gè)指標(biāo)影響的主次順序，綜合考慮確定出最優(yōu)條件。對(duì)胡蘆巴堿含量選A2為好，對(duì)浸出物量選A3為好，因?yàn)槎卟灰恢?，所以根?jù)試驗(yàn)結(jié)果確定，當(dāng)取A2時(shí)胡蘆巴堿含量比選A3增加3.07%（有利），浸出物量比選A3下降1.19%（不利），當(dāng)取A3時(shí)胡蘆巴堿含量比選A2下降3.17%（不利），浸出物量比選A2增加1.17%（有利）。對(duì)“有利”部分A2>A3，對(duì)“不利”部分A2

2.4.5 最佳工藝的驗(yàn)證

根據(jù)確定的最佳炮制工藝，連續(xù)驗(yàn)證十批，考察外觀、水分、灰分、浸出物、含量測(cè)定質(zhì)控指標(biāo)。結(jié)果表明，炮制工藝穩(wěn)定，可進(jìn)行下一步中試驗(yàn)證。

2.5 炮制工藝驗(yàn)證

將最終確定的酒炙胡蘆巴生產(chǎn)工藝在吉林市國(guó)安藥業(yè)飲片生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行中試驗(yàn)證，生產(chǎn)企業(yè)具備中藥飲片炮制工藝驗(yàn)證資質(zhì)。經(jīng)驗(yàn)證，本研究所確定的酒炙胡蘆巴炮制工藝重現(xiàn)性好、生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，可作為胡蘆巴藥材酒炒的合理工藝，驗(yàn)證結(jié)論以及成品質(zhì)量檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 企業(yè)工藝驗(yàn)證結(jié)果（%）

3 結(jié)果與討論

正交試驗(yàn)所用樣品為1公斤，小試所用樣品為2.5公斤，中試所用樣品為30公斤，因?yàn)橹性嚍槟M藥廠實(shí)際生產(chǎn)情況，炮制樣品數(shù)量增加12倍，炒制時(shí)間由正交試驗(yàn)的40 min增加到70 min左右，所以在進(jìn)行酒炙胡蘆巴時(shí)應(yīng)以性狀顏色為主要參照指標(biāo)，以炒制到深黃棕色為最佳。

定性研究不能確定炮制對(duì)胡蘆巴化學(xué)成分的研究，但是通過(guò)定量研究發(fā)現(xiàn)炮制前后胡蘆巴堿含量略有降低。

胡蘆巴的應(yīng)用已經(jīng)突破了傳統(tǒng)的應(yīng)用范圍，但是胡蘆巴飲片，尤其是胡蘆巴炮制品，缺少必要的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和量化的加工工藝，給胡蘆巴的合理應(yīng)用帶來(lái)困難。中國(guó)藥典雖然確定了胡蘆巴的質(zhì)量控制指標(biāo)，但是胡蘆巴堿僅能代表水溶性成分在加工過(guò)程中受到的影響，因?yàn)楹J巴應(yīng)用的另一個(gè)主要方向是提取甾體皂苷元，所以在考察胡蘆巴的質(zhì)量時(shí)還應(yīng)該從脂溶性成分方面考慮，以更加合理全面的控制胡蘆巴的質(zhì)量，保證綜合利用有穩(wěn)定可靠的原料來(lái)源。