青藍(lán)石膏口服液藥效學(xué)試驗(yàn)

韓盧生，李煥榮，王玉民

（1.河南省盧氏縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 472200；2. 北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)科學(xué)院/國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心 102206）

禽巴氏桿菌病導(dǎo)致禽類高死亡率和低生產(chǎn)性能，造成養(yǎng)禽業(yè)巨大損失[1]。該病以發(fā)熱、腹瀉、呼吸困難為特征[2]。疫苗免疫和抗生素治療是主要手段，中藥治療的病例報(bào)道很多[3,4]。而中獸藥以其綜合藥效作用及耐藥性、藥物殘留等較少發(fā)生在治療畜禽傳染病方面顯示其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[5-6]。

青藍(lán)石膏口服液選取大青葉、生石膏、生地黃、牡丹皮、板藍(lán)根等進(jìn)行配伍，對(duì)癥于禽巴氏桿菌病新研制的中獸藥復(fù)方制劑，組方中的藥物皆有清熱、涼血、抗菌消炎的功效[7-8]，符合中獸醫(yī)對(duì)巴氏桿菌病的辨證分析，推測(cè)其對(duì)防治禽巴氏桿菌起到一定作用。本研究旨在針對(duì)雞巴氏桿菌病臨床癥狀與病理特點(diǎn)，制定體外抑菌、殺菌、抗炎、解熱等系列試驗(yàn)，為青藍(lán)石膏口服液預(yù)防與治療禽巴氏桿菌病提供藥效學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物、藥品和菌種

試驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)昆明種小鼠（雄性）、成年Sprague Dawley（SD）大鼠購(gòu)自北京金牧陽(yáng)試驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限責(zé)任公司（動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（軍）2007-0004和2007-0001）。

青藍(lán)石膏口服液，河北科星藥業(yè)有限公司中試產(chǎn)品，生產(chǎn)批號(hào)：20110602。含生藥1.0g/mL；雞巴氏桿菌，批號(hào)：1812，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2 動(dòng)物飼養(yǎng)條件

大、小鼠均雌雄各半分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度為20℃±2℃，濕度為60%±5%。自由飲水，給藥前禁食12h，自由飲水。

2 方法

2.1 體外抑菌殺菌試驗(yàn)

2.1.1 體外抑菌試驗(yàn)（MIC）

在肉湯培養(yǎng)基增菌，挑取單個(gè)菌落接種到2mL營(yíng)養(yǎng)肉湯內(nèi)，37℃培養(yǎng)18～24h，受試藥物用一次性過(guò)濾器過(guò)濾除菌。采用二倍稀釋法測(cè)定青藍(lán)石膏口服液的MIC。每支試管加入2mL滅菌的含5%血清營(yíng)養(yǎng)肉湯，加入2mL受試藥物，依次倍比稀釋，設(shè)7個(gè)稀釋度，同時(shí)設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。37℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。以無(wú)菌生長(zhǎng)的最低稀釋度為MIC。

2.1.2 體外殺菌試驗(yàn)

取上述清潔透明的各試管培養(yǎng)物，劃線接種含血清的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h，沒(méi)有菌落生長(zhǎng)的試管內(nèi)藥物的稀釋度即該菌的最小殺菌濃度（MBC）。

2.2 解熱試驗(yàn)

大鼠雌雄分籠飼養(yǎng)，每組雌雄各半，每組6只，觀察3d后，稱重測(cè)體溫。設(shè)3個(gè)劑量組（高、中、低劑量組）及對(duì)照組，口服給藥，給藥30min后背部皮下注射2-4二硝基苯酚2mL，給藥濃度為25mg/kg體重。對(duì)照組不給藥僅注射2-4二硝基苯酚2mL。給藥后每30min時(shí)監(jiān)測(cè)一次體溫，觀察體溫變化。

2.3 抗炎試驗(yàn)

雄性小鼠32只，隨機(jī)分為4組，青藍(lán)石膏口服液3個(gè)劑量組和模型組，每組8只。中藥對(duì)照組灌胃，按0.25g/kg、0.5g/kg、0.75g/kg體重給藥濃度0.1mL/只，0.2mL/只，0.3mL/只，1次/d，連續(xù)3d。最后一次給藥后30min，將各組小鼠右耳的前后兩側(cè)涂上二甲苯，用量0.1mL，致炎時(shí)間為15sec。等待1h，麻醉處死小鼠后將兩耳剪下，用打孔器在兩耳的同一位置打下直徑為8mm的圓形耳片，立即稱重，每鼠右耳片減去左耳片質(zhì)量即為耳片炎癥腫脹度。

2.4 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用SPSS12.0軟件對(duì)測(cè)定的數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異顯著。試驗(yàn)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±S）表示。

3 結(jié)果

3.1 體外抑菌殺菌試驗(yàn)

抑菌試驗(yàn)結(jié)果顯示青藍(lán)石膏口服液對(duì)多殺性巴氏桿菌體外抑菌的最高稀釋度為26，最低抑菌濃度為1∶64，生藥含量為15.625mg/mL；對(duì)巴氏桿菌體外殺菌最高稀釋度為25，最低殺菌濃度為1∶32，生藥含量為31.25mg/mL。

3.2 解熱試驗(yàn)

結(jié)果見(jiàn)表1。由表可知青藍(lán)石膏口服液高劑量組在給藥90min和150min可明顯降低致熱大鼠模型體溫，可使2-4二硝基苯酚對(duì)大鼠的制熱作用失效；中、低劑量組使大鼠高體溫的維持時(shí)間縮短，升溫幅度減小。

表1 大鼠解熱試驗(yàn)體溫測(cè)定結(jié)果

3.3 抗炎試驗(yàn)

青藍(lán)石膏口服液高、中、低劑量組的腫脹值較生理鹽水組顯著減小（P＜0.05）（表2），且給藥劑量越大效果越明顯，各給藥組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05)，表明青藍(lán)石膏口服液可顯著性抑制由二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度。

表2 抗炎作用測(cè)定結(jié)果

4 討論

禽巴氏桿菌病是由禽多殺性巴氏桿菌引起的一種接觸性傳染病，可危害多種家禽、野禽。其特征表現(xiàn)為敗血性過(guò)程，發(fā)病率和死亡率都很高[7]，預(yù)防與藥物治療均可發(fā)揮一定作用。隨著減抗替抗政策的頒布和對(duì)動(dòng)物源食品安全的要求，研究開(kāi)發(fā)新中獸藥替代抗生素不失為一種好的手段。

在中藥新藥的開(kāi)發(fā)中，中藥藥效學(xué)評(píng)價(jià)是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。許多中藥或中藥復(fù)方制劑通過(guò)藥效學(xué)作用研究，用來(lái)確定新藥預(yù)期的藥效，闡明新藥的作用機(jī)制或用來(lái)確定新藥作用的強(qiáng)度[8]。金青口服液藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)對(duì)小鼠和發(fā)熱家兔有抗菌、解熱、消炎等藥效學(xué)作用[9]。復(fù)方大青葉合劑可減輕炎性癥狀，降低大腸桿菌引起的家兔體溫升高，并對(duì)葡萄球菌，鏈球菌，流感桿菌等多種細(xì)菌有抑制作用[10]。有研究顯示大青葉有明顯的抑菌作用，尤其對(duì)革蘭氏陰性菌的更加顯著[11]；大青葉提取物對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹有抑制作用[12]。板藍(lán)根不同有效部位多種提取物皆有不同程度的抑菌和解熱作用[13]；生石膏歸屬于陽(yáng)明病治療用藥，可用于清解里熱。生石膏對(duì)發(fā)熱的家兔有顯著的退熱作用[14]；此外，牡丹皮水煎劑可抑制多種急性炎癥反應(yīng)的發(fā)生[15]；生地黃也有抗炎與降溫作用[16]。

青藍(lán)石膏口服液藥效學(xué)結(jié)果顯示，最低抑菌生藥含量為15.625 mg/mL，最低殺菌生藥含量為31.25mg/mL，MIC和MBC分別為1∶64和1∶32；高中低劑量組均具有明顯抗炎效果，且具有劑量依賴性；各劑量在一定程度上均可緩解對(duì)2,4-二硝基苯酚引起的體溫升高，高劑量組降溫速度快、效果明顯，但中低劑量組可縮小高溫持續(xù)時(shí)間，降低升溫幅度。

5 結(jié)論

青藍(lán)石膏口服液對(duì)雞多殺性巴氏桿菌有抑菌、殺菌作用，也有抗炎、解熱等藥效學(xué)作用。為臨床用藥治療相關(guān)疾病奠定基礎(chǔ)。