紅藤中空栓干預盲腸結(jié)扎穿孔膿毒癥模型兔腹腔感染的研究

張金梅，劉世超，頡 玙，張 敏，雷 霆

(1. 陜西中醫(yī)藥大學，陜西 咸陽 712000；2. 陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，陜西 咸陽 712000)

腹腔感染是外科疾病中最常見、發(fā)病率極高的病癥之一，具有范圍廣、持續(xù)時間長、病情復雜、致死率高等特征[1]。急性膽囊炎、闌尾炎、急性胰腺炎、胃腸道穿孔、腹腔內(nèi)膿腫及種種原因并發(fā)的腹膜炎等均可導致腹腔感染，病原菌常為腸桿菌科、擬桿菌屬、腸球菌屬等，主要的感染類型為混合型[2]。腹腔感染可以導致機體出現(xiàn)微循環(huán)以及代謝紊亂，如果得不到及時有效的治療，可進一步發(fā)展為膿毒癥、膿毒癥休克，甚至出現(xiàn)多器官功能障礙綜合征而致死[3-4]，因此預防和早期診治腹腔感染十分重要。陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院自制的紅藤中空栓有清熱解毒、止痛的作用，臨床治療感染性疾病有較好療效。本研究以腹腔感染兔為模型，觀察了紅藤中空栓對腹腔感染兔血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)和降鈣素原(PCT)的影響，旨在評價紅藤中空栓治療腹腔感染的價值，為臨床治療腹腔感染提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料與方法

1.1實驗動物 選取健康清潔級新西蘭大耳兔(成都達碩動物公司，20190311)50只，雌雄各半，體重(2.0±0.2)kg。實驗于陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心進行，大耳兔采用清潔飼料及超凈水單籠飼養(yǎng)。實驗經(jīng)過了動物協(xié)會、倫理委員會的審查同意。

1.2實驗藥物 紅藤中空栓(院內(nèi)制劑，采用熱熔法制備栓殼，以栓殼外觀質(zhì)量、栓劑融變時限為檢驗指標，采用正交實驗法優(yōu)選紅藤中空栓制備工藝處方并制備)，硫酸慶大霉素注射液(陜西頓斯制藥有限公司，國藥準字H61021690)。

1.3實驗試劑 兔TNF-α ELISA試劑盒、兔IL-6 ELISA試劑盒、兔PCT測定試劑盒(武漢博士德工程有限公司)。

1.4實驗方法 50只大耳兔適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為假手術(shù)組、模型組、紅藤中空栓組、抗生素組、聯(lián)合組，每組10只。兔稱重后，用1.5%戊巴比妥鈉溶液2 mL/kg經(jīng)耳緣靜脈注射麻醉，在無菌操作下于中下腹正中做5 cm長切口，探查盲腸與闌尾，除假手術(shù)組外，其余組參考文獻[5-6]方法用4號絲線在盲腸與闌尾交界處的稍下方結(jié)扎，用直徑2.5 mm注射器針頭避開血管于結(jié)扎線以下由腸系膜側(cè)向?qū)?cè)對穿2次闌尾，使腸內(nèi)容物流至腹腔內(nèi)，查術(shù)野無活動出血點后回納盲腸，腹壁用4號線分兩層縫合。待動物蘇醒后放回兔籠。術(shù)后觀察兔的精神狀態(tài)以及活動情況，以兔出現(xiàn)肢體蜷縮、萎靡、不思飲食、活動減少，部分兔出現(xiàn)呼吸困難并逐漸加重為造模成功。在造模成功后24 h開始干預，假手術(shù)組、模型組給予生理鹽水生理鹽水16.3 mg/kg肌注和栓殼納肛3次/d，間隔6 h 1次，間隔期間禁食，連續(xù)干預5 d；紅藤中空栓組給予紅藤中空栓納肛，均3次/d，間隔6 h 1次，間隔期間禁食，連續(xù)干預5 d；抗生素組給予硫酸慶大霉素注射液16.3 mg(4 057 IU)/kg肌注，1次/d，連續(xù)干預5 d；聯(lián)合組按照紅藤中空栓組和抗生素組給藥方法聯(lián)合干預。

1.5觀察指標及方法 ①肉眼觀察各組大耳兔術(shù)后呼吸及精神狀態(tài)。②分別于術(shù)后第1天和干預1，3，5 d后，采用ELISA法檢測各組大耳兔血清中TNF-α、IL-6水平，采用免疫熒光法測定血清中PCT水平。③干預5 d后處死各組大耳兔，病理解剖觀察腹腔內(nèi)感染情況。

2 結(jié) 果

2.1各組大耳兔一般情況 假手術(shù)組大耳兔術(shù)后切口愈合良好，正常進食、進水，狀態(tài)同適應性飼養(yǎng)階段；各造模組大耳兔均出現(xiàn)精神不振、不思飲食、活動減少、眼周分泌物增多、呼吸聲粗快且逐漸加重、大便不成形等癥狀。

2.2各組大耳兔血清中TNF-α、IL-6、PCT水平比較 術(shù)后第1天，各造模組間血清TNF-α、IL-6、PCT水平均明顯高于假手術(shù)組(P均<0.05)，各造模組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)；干預1 d后，抗生素組、聯(lián)合組血清TNF-α、IL-6水平均明顯低于模型組和紅藤中空栓組(P均<0.05)，聯(lián)合組明顯低于抗生素組(P均<0.05)；干預3 d后，紅藤中空栓組、抗生素組、聯(lián)合組血清TNF-α、IL-6水平和抗生素組、聯(lián)合組血清PCT水平均明顯低于模型組(P均<0.05)，且抗生素組、聯(lián)合組血清TNF-α、IL-6水平均明顯低于紅藤中空栓組(P均<0.05)，聯(lián)合組血清TNF-α、IL-6水平均明顯低于抗生素組(P均<0.05)；干預5 d后，紅藤中空栓組、抗生素組、聯(lián)合組血清TNF-α、IL-6、PCT水平均明顯低于模型組(P均<0.05)，且抗生素組、聯(lián)合組均明顯低于紅藤中空栓組(P均<0.05)，聯(lián)合組均明顯低于抗生素組(P均<0.05)。見表1～3。

表1 假手術(shù)組和腹腔感染各組大耳兔血清中TNF-α水平比較

2.3各組大耳兔干預5 d后腹腔病理學情況 干預5 d后，聯(lián)合組腹腔內(nèi)的膿性分泌物較其他造模組少，腹水顏色淡且無臭味，闌尾無充血，腸管上無膿苔，闌尾與腸管無粘連，病變范圍局限。見表4。

表2 假手術(shù)組和腹腔感染各組大耳兔血清中IL-6水平比較

表3 假手術(shù)組和腹腔感染各組大耳兔血清中PCT水平比較

表4 假手術(shù)組和腹腔感染各組大耳兔干預5 d后腹腔病理學情況

3 討 論

腹腔感染的菌群主要有大腸桿菌以及銅綠假單胞菌，對慶大霉素具有較高的敏感性，因此本次實驗抗生素選用慶大霉素。慶大霉素是一種廣譜抗生素，不僅對大腸埃希菌、銅綠假單孢菌、肺炎克雷伯菌等革蘭陰性桿菌具有較強的抑菌作用，還可有效抑制炎癥反應的發(fā)生。

TNF-α、IL-6為炎癥反應中最為重要和成熟的炎癥介質(zhì)。TNF-α是炎癥反應過程中急性早期促炎因子，其能夠增加內(nèi)皮細胞的通透性，從而降低循環(huán)血容量，使血液濃縮及組織低灌注，進一步加重膿毒癥的臟器損傷[7]。IL-6為多效性功能因子，既有致炎性，又有抗炎性。IL-6主要由單核巨噬細胞、成纖維細胞等重要生物活性細胞因子產(chǎn)生，可被腫瘤壞死因子誘導并可能增強腫瘤壞死因子的有害作用，誘導T、B淋巴細胞分化并刺激肝細胞合成急性期蛋白，催化和放大炎癥反應和毒性，導致組織損傷；血清IL-6水平與患者炎癥反應的嚴重程度呈正相關(guān)，其水平持續(xù)升高則認為預后不良[8-9]。PCT為新的感染性生物標記物，敏感性與特異性均較高，其以游離形態(tài)存在于血清中，一般較穩(wěn)定，當機體發(fā)生感染時，短時間內(nèi)PCT水平會明顯升高，通常在感染控制后迅速下降，且 PCT水平與感染程度呈正相關(guān)[10-11]。聯(lián)合檢測TNF-α、IL-6與PCT對于評估腹腔感染情況有重要價值。

近些年中藥治療腹腔感染理論研究不斷深入，中藥制劑與抗生素類藥物相比，具有毒副作用小、且不會產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點，大大彌補了現(xiàn)代醫(yī)學治療感染性疾病的不足。中藥紅藤又稱為大血藤，是外科常用的一種藥物，具有清熱解毒、祛風通絡、活血止痛等功效，在臨床上常用于治療風濕痹痛、跌打腫痛、熱毒瘡癰、腸癰腹痛等疾病，有明顯抗炎作用[12]?，F(xiàn)代藥理學研究證實紅藤可通過凝固微生物中的原生質(zhì)及影響酶的合成，從而能夠起到抑制真菌以及細菌感染的作用[13]。周靜[14]通過實驗證實紅藤總皂苷、綠原酸成分對大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌及糞球菌的標準株和臨床株均有抑制作用，從細胞及整體水平驗證了其對細菌性腹膜炎的多靶點作用，能有效抑制腹膜粘連的出現(xiàn)及惡化。

中空栓劑為一種新型栓劑，其中空腔內(nèi)可填充液體、固體、混懸液、膠體等分散體系的藥物[15]。相較于普通栓劑，中空栓劑外殼可為空白基質(zhì)或含藥基質(zhì)，栓壁薄，在2 min內(nèi)軟化釋放，起效遠快于普通栓劑[16]；且中空栓劑藥量可以隨個體化需求臨時填充藥物進行調(diào)整，其使用更加便捷[17]。另外中空栓劑可彌補中藥制劑口感差及胃腸道刺激反應，注射液使用操作性強、風險大的遺憾，提高患者的依從性。總之，中空栓劑特有的優(yōu)點，不僅解決了傳統(tǒng)中藥制劑煎煮時間長、口感差、操作不方便等缺點，還補充了其他制劑的不足，有很高的應用價值。

本實驗結(jié)果顯示，抗生素組、聯(lián)合組干預5 d后血清TNF-α、IL-6、PCT水平均明顯低于同期紅藤中空栓組，聯(lián)合組均明顯低于同期抗生素組；且聯(lián)合組腹腔內(nèi)的膿性分泌物較其他造模組少，腹水無臭味，腸管上無膿苔，闌尾與腸管無粘連，病變范圍局限。提示紅藤中空栓、慶大霉素單用和聯(lián)合應用均可降低血清中炎性因子水平，控制腹腔感染，但紅藤中空栓聯(lián)合慶大霉素干預效果更好，其具體作用機制有待于進一步探討。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。