抗核抗體譜檢測對自身免疫性疾病診斷的價值

王 艷

（沈陽迪安醫(yī)學檢驗所有限公司，遼寧 沈陽 110000）

自身免疫疾病是指機體對自身抗原發(fā)生免疫反應而導致自身組織損害所引起的疾病，其種類較多，病理機制復雜，常見類風濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎炎、甲亢等疾病，同時包括多發(fā)性大動脈炎、自身免疫性睪丸炎等非常見疾病，全身各器官系統(tǒng)都可發(fā)生自身免疫性疾病[1]。隨著臨床研究深入，眾多疾病相繼被列為自身免疫性疾病，且自身抗體可存在于無自身免疫性疾病的正常人，如抗甲狀腺球蛋白、甲狀腺上皮細胞、胃壁細胞、細胞核DNA抗體等[2]。為深入探析抗核抗體譜檢測對自身免疫性疾病診斷價值，本次研究抽取100例自身免疫性疾病患者與健康者進行臨床分析對比，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年9月至2019年9月在某院接受抗核抗體譜檢測的100例自身免疫性疾病患者為臨床研究對象，將其作為觀察組，其中包括男性58例，女性42例，年齡25～76歲，平均年齡（48.38±5.64）歲，疾病種類：系統(tǒng)性紅斑狼瘡38例、混合性結(jié)締組織病26例、干燥綜合征18例、系統(tǒng)性硬化12例、血小板減少性紫癜4例、風濕性關(guān)節(jié)炎（RA）2例；同時選擇100例健康體檢者作為對照組，其中男性60例，女性40例，年齡26～77歲，平均年齡（49.63±6.17）歲；兩組患者一般資料的比較，P＞0.05，有可比性。納入標準：①所有患者年齡均18歲以上。②臨床檢驗依從性高；排除標準：①合并嚴重心、肺、肝、腎等合并癥者。②存在精神異常、認知功能低下者。③過敏體質(zhì)者。④存在血液疾病者。⑤存在凝血功能異常者。⑥存在惡性腫瘤者。⑦家屬未簽訂知情同意書者及中途退出者。

1.2 方法 通過歐蒙印跡法試劑盒檢測抗核抗體譜（IgG），本次研究所選擇的試劑盒均由歐蒙（杭州醫(yī)學實驗診斷有限公司）出品，嚴格執(zhí)行說明書檢測標準，針對患者Sm、SCL-70、CENP B等抗原不同的IgG類抗體進行檢驗。具體操作流程如下：①檢驗科免疫組工作人員需規(guī)范抗核抗體譜（IgG）檢測，保證結(jié)果的準確性，型號名稱：ANA譜1，靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小體，組蛋白，核糖體P蛋白；類型：IgG；基質(zhì)：抗原包被的檢測膜條；規(guī)格：16×01（16）。②適應證包括：夏普綜合征（MCTD），系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE），干燥綜合征，進行性系統(tǒng)性硬化癥，多肌炎皮肌炎、重疊綜合征、局限型進行性系統(tǒng)性硬化癥（CREST綜合征），原發(fā)性膽汁性肝硬化。③主要組成成分包括：包被抗原的檢測膜條：nRNP/Sm、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小體、組蛋白、核糖體P蛋白、AMA M2，規(guī)格（4×16條/16條）；陽性對照為人體IgG，100倍濃縮（規(guī)格：1×0.02 mL）；酶結(jié)合物為：堿性磷酸酶標記的羊抗人IgG，10倍濃縮（規(guī)格：1×3 mL）；直接使用樣本緩沖液，清洗緩沖液為10倍濃縮，底物液為：NBT/BCIP（四唑硝基苯胺蘭/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸鹽），直接使用。④樣本儲存均在2～8 ℃條件下保存，無須冷凍，未開封前，除非特別說明，試劑盒自生產(chǎn)日起可穩(wěn)定18個月，稀釋后的酶結(jié)合物和清洗緩沖液需在一個工作日內(nèi)用完。樣本要求：樣本為人血清或 EDTA、肝素或檸檬酸鹽抗凝的血漿；穩(wěn)定性要求待檢患者樣本于2～8 ℃可穩(wěn)定14 d，稀釋后的樣本應在同一個工作日內(nèi)檢測。樣本稀釋要求患者樣本用樣本緩沖液1∶101稀釋，如可取15 μL血清用1.5 mL樣本緩沖液稀釋并用漩渦混勻器充分混勻，不可用加樣器混勻。⑤使用前所有試劑均必須于室溫（18～25 ℃）平衡30 min。從第一次使用起，試劑盒保存在2～8 ℃，良好情況下可穩(wěn)定至所標示的有效期；為防止膜條發(fā)生冷凝，只有當膜條平衡到室溫后才可打開包裝，取出膜條后應立即密封好原包裝并將其保存于2～8 ℃。陽性對照過程中，均為100倍濃縮，使用時用干凈的吸管從瓶中吸取所需陽性對照，用樣本緩沖液1∶101稀釋，如：15 μL陽性對照用1.5 mL樣本緩沖液稀釋并充分混勻，已稀釋的陽性對照應在同一個工作日用完。⑥預處理需取出所需的膜條，將其放入溫育槽內(nèi)。

1.3 觀察指標 觀察兩組受檢者的臨床檢測結(jié)果，分析38例SLE、26例MCTD、18例SS、12例PSS、4例ITP、2例RA患者與對照組受檢者在ANA、抗Sm、抗SS-A、抗SCL-70、抗JO-1、抗PCNA、抗核小體、抗組蛋白、抗nRNP、抗SS-B、抗PM-SCL、抗dsDNA、抗核糖體、P蛋白、抗AMA M2陽性率檢出率。

1.4 統(tǒng)計學方法 使用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，組內(nèi)比較采用重復測量設(shè)計資料的方差分析，組間比較采用成組χ2檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

SLE的ANA、抗Sm、抗SS-A、抗SS-B、抗核小體、抗組蛋白、抗dsDNA、抗核糖體P蛋白等陽性檢出率均顯著高于對照組，組間對比差異明顯（P均＜0.05）。見表1。

表1 兩組受檢者血清抗核抗體譜檢測結(jié)果對比[n（%）]

3 討 論

自身免疫性疾病與患者機體自身的免疫系統(tǒng)之間存在著十分密切的聯(lián)系，臨床研究發(fā)現(xiàn)，自身免疫性疾病患者不僅存在T細胞的細胞免疫現(xiàn)象，同時還有B細胞活化所造成的體液免疫現(xiàn)象發(fā)生，可見，其均屬于多種抗體共同作用的產(chǎn)物，從而致使自身免疫性疾病患者的臨床癥狀趨向于多樣化，且不易診斷，從而嚴重威脅其生命健康安全[3]。

臨床研究發(fā)現(xiàn)，自身免疫性疾病的病因主要包括自身抗原的出現(xiàn)、免疫調(diào)節(jié)異常、交叉抗原、遺傳因素等，自身抗原多見于隱蔽抗原的釋放，如晶狀體，而自身抗原發(fā)生改變多見于類風濕因子（RF）[4]；免疫調(diào)節(jié)異常多于見多克隆刺激劑的旁路活化與Th1和Th2細胞功能失衡；交叉感染的常見病菌包括柯薩奇病毒、鏈球菌感染，前者可導致糖尿病，后者可導致急性腎小球腎炎，風濕性心臟病等疾病；遺傳因素多因MHC單型不同而存在差異，如DR3個體易患重癥肌無力；而DR4與類風濕管理密切，B27與強直性脊柱炎關(guān)聯(lián)密切，且DR2與肺出血肺炎綜合征高度相關(guān)[5]。自身免疫性疾病患者的臨床癥狀較為復雜，大多數(shù)原因不明，可能與遺傳、感染、藥物及環(huán)境等因素有關(guān)，患者血清中?？蓹z出高滴度自身抗體，同時出現(xiàn)與免疫反應有關(guān)的病理變化，病變部位主要是有淋巴細胞和漿細胞浸潤為主的慢性炎癥；女性多于男性，病程一般較長，多為發(fā)作與緩解反復交替出現(xiàn)[6]。同時，受損或抗原性發(fā)生變化的組織可激發(fā)自身抗體的產(chǎn)生，如心肌缺血時，壞死的心肌可導致抗心肌自身抗體形成，但此抗體并無致病作用，屬于一種典型的繼發(fā)性免疫反應。自身免疫系統(tǒng)疾病多在自身抗體作用下引發(fā)多器官損傷，因此加強臨床檢測，在控制病情發(fā)展，提升臨床治療的針對性方面具有十分重要的意義[7-9]。

本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗核抗體在多種自身免疫病中均呈不同程度的陽性率，針對ANA、抗Sm、抗SS-A、抗SCL-70、抗JO-1、抗PCNA等類型，能夠按其核內(nèi)各個分子的性能不同可將各ANA區(qū)分開來，提升其診斷分辨率。陳向華等[10]人發(fā)現(xiàn)：抗核抗體檢測的血樣結(jié)果為陽性的患者占所有受檢患者的6.32%。

綜上所述，抗核抗體譜檢測針對自身免疫性疾病的臨床診斷具有十分積極的應用價值，診斷率高，可有效分辨不同疾病機制，為臨床治療提供可靠的數(shù)據(jù)支持，適應于臨床上作進一步推廣普及。