高通量測序技術在膿毒癥患者病原學檢測及治療中的運用

陸輝志，石玉琴

（1.武漢科技大學 醫(yī)學院，湖北 武漢 430065；2.武漢市第三醫(yī)院 重癥醫(yī)學科，湖北 武漢 430074）

0 引言

病原體感染導致患者嚴重感染，誘發(fā)全身炎癥反應綜合征，即為膿毒癥[1]，可發(fā)展為嚴重膿毒癥和膿毒癥休克，甚至死亡。診斷金標準是血液培養(yǎng)[2]，但該方法耗時長，診斷陽性率低，尤其對于已使用過抗生素的患者，陽性率明顯降低。近年來，高通量測序技術（highthmughput sequencing，HTs）高速發(fā)展[3]，不需培養(yǎng)分群，直接測序鑒別病原體，檢測速度快、準確率高、覆蓋范圍廣。本研究旨在探討運用高通量測序技術檢測膿毒癥患者病原學，指導針對性抗生素的運用。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取2019年1月至2019年12月武漢市第三醫(yī)院重癥監(jiān)護室（Intensivecare unit，ICU）收治的89例膿毒癥患者，按照隨機數(shù)字表法分為觀察組（46例）和對照組（43例）。納入標準：符合診斷標準[4]。排除標準：①合并惡性腫瘤；②接受過免疫抑制治療。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。向患者及家屬交代治療方案，并簽署知情同意書，經(jīng)本院醫(yī)學倫理研究委員會批準通過，見表1。

表1 一般情況比較

1.2 治療方案。對照組：抗感染治療前，抽取10～20 mL血液標本進行血培養(yǎng)檢測。觀察組：在血培養(yǎng)聯(lián)合HTs檢測，另抽取10 mL血液標本保存于4℃環(huán)境中，由深圳華大基因研究進行HTs。兩組患者使用亞胺培南/西司他丁鈉（韓國中外制藥株式會社，進口藥品注冊證號H20120403，1～2 g，分3次滴注）聯(lián)合萬古霉素（希杰有限公司，進口藥品注冊證號H20100289，2 g，分兩次）抗感染治療，同時針對原發(fā)病的治療、液體復蘇等治療。待血培養(yǎng)及HTs結果報告后，必要時更換敏感藥物。連續(xù)治療1周后，復查血培養(yǎng)及或HTs，感染控制，病情穩(wěn)定，同時一次HTs檢測陰性或連續(xù)兩次血培養(yǎng)陰性后，給予出院，出院后連續(xù)隨訪3個月。

1.3 觀察指標。比較兩組檢測情況（病原體陽性率、報告時間及檢出類型）、治療效果及并發(fā)癥的發(fā)生情況。①病原學檢測陽性率=陽性例數(shù)／總例數(shù)×100%；②病原體報告時間=報告日期一采血日期；③病原體檢出類型包括：細菌、真菌、病毒及其他病原體；③并發(fā)癥：急性腎損傷、低血壓及急性肺損傷發(fā)生率。

1.4 統(tǒng)計學分析。采用SPSS 21.0軟件處理，計數(shù)資料采用卡方檢驗，計量資料用（±s）表示，樣本均數(shù)比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2.3 并發(fā)癥比較。兩組患者在發(fā)生并發(fā)癥如急性腎損傷、低血壓及急性肺損傷發(fā)生率方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表4。

表4 并發(fā)癥比較[n(%)]

2 結果

2.1 病原體檢測情況比較。觀察組病原體陽性率為95.65%，明顯高于對照組（41.86%）；觀察組病原體發(fā)報告時間明顯早于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。兩組患者病原體類型檢測方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 病原體檢測情況比較（例）

2.2 治療效果比較。觀察組治療時間明顯短于對照組；觀察組治療存活率91.30%，明顯高于對照組（67.44%），差異有顯著性統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表3。

表3 治療效果比較（例）

3 討論

膿毒癥是指明確或可疑的病原體感染，引起的全身炎癥反應綜合征[5]。隨著社會老齡化、侵入性醫(yī)療手段的增加，膿毒癥發(fā)病率不斷上升，國外流行病學結果顯示[6-7]，膿毒癥發(fā)病率為0.3%，約9%發(fā)展成嚴重膿毒癥，3%發(fā)展為膿毒性休克，是重癥監(jiān)護室死亡率較高的疾病之一。膿毒癥的早期、快速、準確診斷對于治療效果至關重要，目前臨床上膿毒癥的病原學診斷主要依賴于血培養(yǎng)[8]，但該方法耗時長，陽性率較低，容易漏診、誤診[9]。

HTs可從整體上分析病原微生物群體的組成情況，也可獲得含量低的病原序列，并通過未知序列鑒定新物種，迅速識別各類病原微生物[10]。HTs目前可檢測出約2700余種病原體，包括細菌、病毒、真菌、寄生蟲等，特別是病毒、支原體、衣原體等少見病原體類型的診斷，更是補充了血培養(yǎng)的不足。本臨床研究顯示，使用高通量測序檢測的觀察組病原體測陽性率為95.65%，明顯高于對照組（41.86%），觀察組病原體發(fā)報告時間明顯早于對照組，差異有顯著性統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。兩組患者病原體類型檢測方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。觀察組治療時間明顯短于對照組，觀察組治療存活率91.30%，明顯高于對照組（67.44%），差異有顯著性統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。兩組患者在發(fā)生并發(fā)癥如急性腎損傷、低血壓及急性肺損傷發(fā)生率方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

綜上所述，應用高通量測序檢測方法在膿毒癥病原學診斷和評價療效較好，聯(lián)合血培養(yǎng)檢測，可減少漏診率，提高診斷的準確性。