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    小麥莖基腐病抗性QTL的分析

    2021-09-23 09:17:14周淼平楊學(xué)明姚金保
    麥類(lèi)作物學(xué)報(bào) 2021年5期
    關(guān)鍵詞:基腐病連鎖抗性

    周淼平,張 鵬,楊學(xué)明,陳 達(dá),姚金保

    (江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所,江蘇南京 210014)

    小麥莖基腐病(wheat crown rot,WCR),又稱(chēng)鐮刀莖基腐病(Fusarium crown rot),是發(fā)生在干旱和半干旱地區(qū)的世界性小麥病害,該病害在澳大利亞、新西蘭、南美洲、美國(guó)西北部太平洋沿岸、加拿大、意大利、北非、中東和中國(guó)均有發(fā)生[1]。在澳大利亞該病害主要由假禾谷鐮刀菌(Fusariumpseudograminearum)引起[2],在中國(guó)主要由禾谷鐮刀菌(F.graminearum)和亞洲鐮刀菌(F.asiaticum)引起,但近幾年假禾谷鐮刀菌呈上升趨勢(shì)[3]。病原菌首先侵染小麥的莖基部,在苗期莖基部葉鞘和莖稈出現(xiàn)褐變,嚴(yán)重時(shí)引起根部褐變腐爛,造成死苗。后期隨著小麥的生長(zhǎng),病原菌沿莖稈向上擴(kuò)展,使小麥多個(gè)節(jié)和節(jié)間出現(xiàn)褐變,嚴(yán)重時(shí)造成枯白穗,從而導(dǎo)致小麥減產(chǎn)。感染莖基腐病的小麥籽粒中還可能殘留DON等毒素[4],影響小麥的食用、飼用和種用價(jià)值。由于該病害的流行,在澳大利亞,小麥和大麥每年的損失超過(guò)9 700萬(wàn)澳元[2];美國(guó)西北部太平洋沿岸發(fā)病嚴(yán)重田塊,產(chǎn)量損失可達(dá)35%[5]。近年來(lái),由于常年實(shí)施秸稈還田,造成土壤中菌源積累,我國(guó)河北中南部、山西南部、陜西中東部、河南和山東大部、江蘇和安徽北部的小麥莖基腐病有加重趨勢(shì),河南沁陽(yáng)以及江蘇沿海部分田塊小麥損失高達(dá)30%以上[3,6]。

    目前對(duì)小麥莖基腐病的防治主要采用農(nóng)業(yè)措施與藥劑防治相結(jié)合的方法,不僅增加農(nóng)業(yè)成本,而且污染環(huán)境,不利于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展,因此,種植抗病品種無(wú)疑是防治小麥莖基腐病最經(jīng)濟(jì)和有效的途徑??共∑贩N的培育需要抗性穩(wěn)定的抗源用于雜交配組以及明確的抗性機(jī)理指導(dǎo)育種,國(guó)內(nèi)外研究人員對(duì)小麥莖基腐病的抗性鑒定方法、抗源的篩選以及抗性機(jī)理的解析方面已經(jīng)取得了一些研究成果。前人采用病麥粒接種、菌液直接浸泡接種等方法先后建立了田間成株期以及室內(nèi)苗期的抗性鑒定方法;并運(yùn)用這些鑒定方法對(duì)3 400余份常規(guī)小麥、硬粒小麥、小黑麥和野生小麥進(jìn)行了莖基腐病的抗性篩選,篩選到2-49、Sunco、CI12633等一批中抗材料,但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)免疫和高抗材料[2,7-10]。遺傳分析表明,小麥對(duì)莖基腐病的抗性是一個(gè)數(shù)量性狀[11-19]。Wallwork等[11]首先在Kukri的4B染色體上發(fā)現(xiàn)抗性主效QTL,隨后科研工作者分別對(duì)莖基腐病抗源2-49[12-14]、W21MMT70[13,15]、CSCR6[16]、Sunco[13-14]、Ernie[17]、Maco[18]、Otis[18]、IRN497[14]、CPI133814[14]和EGA Wylie[19]的抗性QTL也進(jìn)行了定位,發(fā)現(xiàn)這些QTL分布在小麥的13條染色體上,其中3BL和4B染色體上存在抗性主效QTL,最高可分別解釋48.8%[16]和48.0%[11]的表型抗性。Erginbas-Orakci等[20]采用自然群體和DArT標(biāo)記進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,在3B和2D染色體上也發(fā)現(xiàn)抗莖基腐病QTL。通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇,可以將主效QTL和微效QTL進(jìn)行聚合,從而提高小麥對(duì)莖基腐病的抗性,有效降低小麥莖基腐病的危害,如Bovill等[13]將2-49的1D染色體抗性QTL與W21MMT70的3B染色體抗性QTL 聚合后,發(fā)現(xiàn)聚合植株莖基腐病嚴(yán)重度比不含抗性QTL的植株降低51.2%。

    已經(jīng)報(bào)道的小麥莖基腐病QTL定位研究多采用SSR等分子標(biāo)記來(lái)構(gòu)建遺傳連鎖圖,這些標(biāo)記多態(tài)性差且數(shù)量有限,影響遺傳連鎖圖的基因組覆蓋度,從而降低了小麥莖基腐病抗性QTL的檢出效率以及QTL定位的精度。近幾年,隨著二代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展以及小麥基因組的拼接完成,開(kāi)發(fā)大量的適合高通量檢測(cè)的SNP標(biāo)記成為可能并得到廣泛使用,也為小麥莖基腐病抗性QTL的精確定位提供了方便。Yang等[21]利用660K SNP芯片,采用GWAS(genome-wide association studies)方法對(duì)234個(gè)黃淮麥區(qū)小麥品種進(jìn)行分析,在6A染色體上發(fā)現(xiàn)小麥莖基腐病抗性QTL。采用同樣方法,Jin等[22]利用55K SNP芯片對(duì)358個(gè)小麥品種(系)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,在5DL 染色體上發(fā)現(xiàn)莖基腐病抗性QTL。

    本研究采用中抗莖基腐病品種CI12633與感莖基腐病品種揚(yáng)麥158構(gòu)建重組自交系群體,用二代測(cè)序技術(shù)開(kāi)發(fā)SNP標(biāo)記,結(jié)合已有的SSR基因型資料以及群體莖基腐病抗性鑒定結(jié)果,以期獲得莖基腐病抗性QTL位點(diǎn),為今后開(kāi)展抗莖基腐病小麥的分子標(biāo)記輔助育種奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    CI12633品種是提莫菲維小麥(FriticumtimopheeviiZhuk.)的六倍體衍生系,我國(guó)作為白粉病抗源引進(jìn),研究發(fā)現(xiàn)該品種不僅含有多個(gè)抗白粉病基因,而且抗小麥黃花葉病,中抗小麥莖基腐病和小麥紋枯病。揚(yáng)麥158為江蘇里下河地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所培育的品種,曾在長(zhǎng)江中下游地區(qū)大面積種植,是綜合抗性好的廣適性品種,中抗小麥白粉病和小麥赤霉病,但感小麥莖基腐病。

    以揚(yáng)麥158為母本,CI12633為父本,配制雜交,采用單粒傳的方法培育重組自交系群體,該群體含有198個(gè)家系,本研究對(duì)其中94個(gè)家系進(jìn)行了基因型分析和莖基腐病抗性鑒定。

    1.2 遺傳連鎖圖的構(gòu)建

    通過(guò)二代測(cè)序方法開(kāi)發(fā)該重組自交系群體的SNP標(biāo)記,結(jié)合已有的群體多態(tài)性SSR標(biāo)記,采用JoinMap 4.0軟件構(gòu)建遺傳連鎖圖。SNP標(biāo)記的開(kāi)發(fā)以及遺傳連鎖圖的構(gòu)建見(jiàn)周淼平等[23]的方法,該遺傳圖譜總遺傳距離為2 510.7 cM,包含31個(gè)連鎖群,含有3 355個(gè)分子標(biāo)記,通過(guò)已有的SSR和小麥基因組信息,可以將所有連鎖群分配至相應(yīng)的染色體。

    1.3 重組自交系群體的莖基腐病抗性鑒定

    群體莖腐病的抗性鑒定在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行,鑒定方法參照Liu等[24]的方法并略作修改,小麥種子經(jīng)70%乙醇消毒2 min后,用無(wú)菌水沖洗3~4次,置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中催芽,待芽長(zhǎng)為5 mm左右時(shí),在禾谷鐮刀菌孢子懸浮液(含1×106個(gè)孢子·mL-1)中接種1~2 min,接種后的種子呈直線(xiàn)均勻排列在滅過(guò)菌的濕潤(rùn)紙巾(24×24 cm)上,芽的生長(zhǎng)方向一致且均指向紙巾邊緣(種子距紙巾邊緣2 cm左右),將紙巾沿種子排列方向,從一端向另一端卷起,芽的生長(zhǎng)方向向上置于塑料容器中,22 ℃、90%濕度培養(yǎng)14~16 d,調(diào)查莖腐病發(fā)病情況。

    根據(jù)病害嚴(yán)重度將莖腐病病級(jí)分為0~5級(jí):0級(jí)為葉鞘無(wú)病癥;1級(jí)為第一葉鞘病斑長(zhǎng)度小于1.0 cm;2級(jí)為第一葉鞘病斑長(zhǎng)度在1.0~2.0 cm之間;3級(jí)為第一葉鞘病斑長(zhǎng)度大于2.0 cm,幼苗未萎焉;4級(jí)為幼苗出現(xiàn)萎焉病癥;5級(jí)為幼苗死亡。

    群體的每個(gè)家系調(diào)查10~15株幼苗,計(jì)算平均病級(jí),每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)2次,2次重復(fù)的平均病級(jí)用于數(shù)據(jù)分析和QTL定位。莖基腐抗性鑒定進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)試驗(yàn),分別稱(chēng)為E1、E2和E3。

    1.4 數(shù)據(jù)分析和QTL定位

    采用R軟件計(jì)算重組自交系群體和親本莖基腐病抗性鑒定的數(shù)據(jù)平均值、頻率分布、試驗(yàn)間相關(guān)性和方差。采用MapQTL 5.0軟件進(jìn)行QTL分析,首先進(jìn)行QTL區(qū)間作圖法(interval mapping)進(jìn)行初步定位,然后采用復(fù)合QTL作圖法(MQM mapping)進(jìn)一步詳細(xì)分析,根據(jù)置換檢測(cè)(permutation test)推薦的LOD值判定是否存在QTL。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 群體莖基腐病抗性的鑒定結(jié)果

    從表1可以看出,3次試驗(yàn)抗病親本CI12633和感病親本揚(yáng)麥158之間的病級(jí)差異極顯著,群體家系存在超親分離現(xiàn)象,群體病級(jí)分布基本呈正態(tài)分布,表明小麥對(duì)莖基腐病的抗性是由多基因控制的數(shù)量性狀(表1,圖1)。

    圖1 群體莖基腐病病級(jí)分布

    表1 供試小麥群體及其親本的莖基腐病抗性鑒定結(jié)果(病級(jí))Table 1 Identification result(disease grade) of WCR resistance in the population and their parents

    群體的3次抗性鑒定試驗(yàn)結(jié)果相關(guān)性很高,E1與E2、E2與E3、E1與E3的相關(guān)系數(shù)分別為0.8、0.8和0.6,表明在控溫控濕的人工條件下,群體各家系的莖基腐病的抗性在不同試驗(yàn)基本表現(xiàn)一致。方差分析結(jié)果(表2)顯示,各家系間的莖基腐病抗性差異均達(dá)極顯著水平,進(jìn)一步驗(yàn)證群體各家系對(duì)莖基腐病的抗性有很大差異。

    表2 試驗(yàn)的方差分析Table 2 ANOVA of the experiments

    2.2 群體莖基腐病抗性QTL的定位結(jié)果

    結(jié)合群體基因型資料和莖基腐病抗性鑒定資料,采用MapQTL 5.0分析軟件,分別在1D、2B、3B(2)、7A和7D染色體上定位到6個(gè)莖基腐病抗性QTL(圖2和表3),其中1D和3B染色體上的抗性QTL來(lái)自抗病親本CI12633,2B、7A和7D染色體上的抗性QTL來(lái)自感病親本揚(yáng)麥158,單個(gè)QTL的表型解釋率在9.2%~14.6%之間。1D、2B和3B(與Chr3B_479785994緊密連鎖)染色體上的抗性QTL在3次試驗(yàn)中均能檢測(cè)到,表明這些抗性QTL比較穩(wěn)定,受環(huán)境影響較小,是小麥抗莖基腐病的主效QTL。3B染色體上位于Xgwm181.1-Xgwm340間的QTL和7A染色體上位于Xwmc388-Xgwm635間的QTL只在E1試驗(yàn)中檢測(cè)到;7D染色體上位于Xgwm37-Xcfa2040間的QTL只在E3試驗(yàn)中檢測(cè)到,表明這些抗性QTL可能受環(huán)境影響較大,只在特定條件下發(fā)揮作用。

    表3 小麥莖基腐病抗性QTLsTable 3 QTLs for WCR resistance

    下劃線(xiàn)表示分子標(biāo)記所在位置。

    3 討 論

    3.1 小麥莖基腐病抗性QTL位置比較

    澳大利亞莖基腐病的危害較重,因而對(duì)小麥莖基腐病的研究較為重視,先后篩選獲得了Kukri[11]、2-49[12-14]、Sunco[13-14]、W21MMT70[13,15]、Ernie[17]、CSCR6[16]、EGA Wylie[19]等中抗莖基腐病材料,對(duì)這些材料的莖基腐病抗性QTL進(jìn)行了定位,在3B染色體長(zhǎng)臂發(fā)現(xiàn)了抗性主效QTL,該QTL最高可解釋48.8%的表型變異[16]。本研究在3B染色體上檢測(cè)到2個(gè)莖基腐病抗性QTL,通過(guò)小麥物理圖譜比對(duì),發(fā)現(xiàn)與Chr3B_479785994緊密連鎖的QTL與上述文獻(xiàn)報(bào)道的QTL位置接近,可能為同一QTL;另一QTL位于3B染色體長(zhǎng)臂的末端,Poole等[18]也曾在3B染色體長(zhǎng)臂Xgwm299-Xgwm181區(qū)間檢測(cè)到抗病QTL,與本研究發(fā)現(xiàn)的QTL位置接近,但兩者有沒(méi)有關(guān)聯(lián),目前尚不清楚。本研究在1D染色體上檢測(cè)到的莖基腐病抗性QTL與Chr1D_416032418緊密連鎖,通過(guò)小麥物理圖譜比對(duì),發(fā)現(xiàn)與2-49[12-14]1D染色體上檢測(cè)到的QTL位置較為接近,可能為同一QTL。本研究在2B染色體上檢測(cè)到與Chr2B-518870327緊密連鎖的QTL,通過(guò)小麥物理圖譜比對(duì),發(fā)現(xiàn)與Mendos[15]、Sunco[13-14]和Janz[14]中檢測(cè)到的QTL位置接近,可能為相同抗莖基腐病抗性QTL。本研究在7A和7D染色體上檢測(cè)到的抗性QTL,與已報(bào)道相應(yīng)染色體的QTL位置不一致,可能為新發(fā)現(xiàn)的莖基腐病抗性QTL。

    3.2 影響小麥莖基腐病抗性QTL定位的主要因素

    小麥莖基腐病抗性的鑒定受環(huán)境因素影響較大,在田間,氣候條件、小麥生長(zhǎng)狀況以及小麥紋枯病、小麥根腐病、小麥全蝕病等根部和莖基部病害都會(huì)干擾小麥莖基腐病的發(fā)生和發(fā)展,進(jìn)而影響抗病QTL的檢出效率。從已經(jīng)報(bào)道的莖基腐病抗性QTL表型解釋率也進(jìn)一步驗(yàn)證了這一點(diǎn)。Collard等[12]報(bào)道,全部QTL只能解釋 40.6%的表型變異;Bovill等[15]報(bào)道,檢測(cè)到的3個(gè)QTL也只能解釋44.4%的表型變異,這些研究結(jié)果說(shuō)明,由于環(huán)境因素和遺傳連鎖圖基因組覆蓋度不足的影響,仍有不少Q(mào)TL未能檢出。本研究在室內(nèi)控溫控濕的條件下進(jìn)行了莖基腐病抗性鑒定,有效減少了由于溫度、濕度等環(huán)境條件以及其他根部和莖基部病害的影響。另外,采用二代測(cè)序方法開(kāi)發(fā)SNP標(biāo)記,構(gòu)建高密度群體遺傳連鎖圖,加大對(duì)小麥基因組的覆蓋度,使得檢出的莖基腐病抗性QTL數(shù)目較以往研究有所改善,定位精度大幅提高,并且小麥基因組已經(jīng)測(cè)序組裝并發(fā)布,SNP標(biāo)記的使用更利于已檢出莖基腐病抗性QTL間的比較分析以及候選抗病基因的克隆。

    本研究雖然通過(guò)控制環(huán)境因素以及提高遺傳連鎖圖質(zhì)量來(lái)提高抗病QTL的檢出效率,但每次試驗(yàn)檢出的QTL只能解釋表型變異的40%左右,仍然有不少抗病QTL未能檢出,主要原因是進(jìn)行群體分析的家系數(shù)偏少,只有94個(gè),所以,今后的研究需加大群體的家系數(shù)目,改良小麥莖基腐病的鑒定方法,進(jìn)一步提高抗病QTL的檢出效率。

    4 結(jié) 論

    采用高密度SNP遺傳連鎖圖結(jié)合群體小麥莖基腐病抗性鑒定資料,在1D、2B、3B(2)、7A和7D染色體上檢測(cè)到6個(gè)莖基腐病抗性QTL,單個(gè)QTL可解釋9.2%~14.6%的表型變異;其中1D和3B染色體的抗性QTL來(lái)自CI12633,2B、7A和7D染色體的抗性QTL來(lái)自揚(yáng)麥158;1D、2B和3B(與Chr3B_479785994緊密連鎖)染色體上的抗性QTL為穩(wěn)定的莖基腐病抗性QTL。

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