抗-M抗體檢測方式及臨床意義研究*

嚴潔婷，丁夢圓，許學明，張 輝，湯龍海，王明元

（蘇州市紅十字中心血站，江蘇 215000）

紅細胞同種抗體是指針對自身紅細胞缺少的抗原產(chǎn)生相對應的抗體。MNS血型系統(tǒng)是第二個被發(fā)現(xiàn)的血型系統(tǒng),針對MNS血型系統(tǒng)產(chǎn)生的不規(guī)則抗體常見,其中抗—M抗體最常見,多為自然產(chǎn)生,也有因細菌感染或輸血產(chǎn)生。大多數(shù)抗—M最適反應溫度是4℃,在37℃無活性,臨床意義不大,容易被臨床忽視。抗—M大多屬于IgM性質(zhì)的天然抗體,有研究顯示約78%抗—M同時存在IgG成分[1],IgG型抗—M會導致溶血性輸血反應(hemolytic transfusion reactions,HTRs)及胎兒新生兒溶血(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)。本文比較在不同反應溫度下微柱凝膠法鑒定抗—M抗體的靈敏度,為實驗室抗—M鑒定及臨床輸血提供參考。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集2020年3月—9月蘇州市中心血站及醫(yī)院抗篩結(jié)果陽性標本206例,通過試管法初篩抗—M陽性標本15例。

1.2 試劑與儀器 試劑譜細胞組(上海血液生物,批號20200611),直接抗球蛋白試劑盒(上海血液生物,批號20185002),低離子抗人球蛋白卡(瑞士Biorad,批號50531.48.11),抗—N血清試劑(上海血液生物,批號201904280),抗—M血清試劑(上海血液生物,批號20200701),2-ME應用液(上海血液生物,批號20207701),KA-2200血清學離心機(日本Kubota),血型卡離心機(瑞士DiaMed),微柱凝膠孵育器(瑞士DiaMed),WP850(MS-2586DTW)型微波爐(LG電子天津電器有限公司)。

1.3 操作方法

1.3.1 直接抗球蛋白試驗(DAT)：試管中加入1滴直接抗球蛋白試劑,1滴2%～5%洗滌后患者紅細胞懸液,1 000 g離心15 s,肉眼觀察凝集情況。利用微柱凝膠法檢測直接抗球蛋白。

1.3.2 試管法檢測抗—M：取10支試管,分別加入1～10號譜細胞各1滴,血漿各2滴,混勻,1 000 g離心15 s,肉眼觀察凝集情況。

1.3.3 自身抗體鑒定試驗：試管中加入2滴患者血清,1滴患者紅細胞懸液,1 000 g離心15 s,肉眼觀察凝集情況;微柱凝膠卡中加入2滴患者血清,1滴患者紅細胞懸液,37℃孵育15 min,離心觀察結(jié)果。

1.3.4 微柱凝膠法檢測IgG型抗—M抗體：將2 mL患者血清與2 mL 2-ME應用液混合,在37℃反應10 min以破壞IgM抗—M,然后將處理后的血清與試劑譜細胞在微柱凝膠卡中反應,反應溫度分別為37℃和4℃。離心觀察結(jié)果。

1.3.5 MN分型檢測：取2支試管,分別加入1滴抗—M血清試劑或抗—N血清試劑,再加入標本懸浮紅細胞各1滴,1 000 g離心15 s,觀察凝集結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 試管法抗—M初篩檢測206例標本中15例凝集陽性,存在抗—M抗體,4℃反應條件下反應增強。

2.2 DAT及自身抗體試驗15例初篩抗—M陽性標本自身抗體均為陰性,DAT陽性1例,其余為陰性。見表1。

2.3 IgG型抗—M檢測15例初篩抗—M陽性標本中,在4℃下微柱凝膠卡中14例標本(93.33%)顯示為IgG型抗—M增強的反應性,37℃下7例標本(46.67%)有反應性。見表1。

表1 初篩陽性標本15例實驗室檢查結(jié)果

2.4 MN分型15例初篩抗—M陽性標本MN分型均為NN。

2.5 臨床資料分析15例抗—M陽性患者中10例(66.67%)為女性。序號為2、6、7、10、13的5例患者(33.33%)無免疫史,其抗—M為天然抗體。1例標本的血清與譜細胞試管法室溫反應結(jié)果為陰性,4℃反應為陽性,且檢測出4℃反應性IgG抗—M。1例首次妊娠產(chǎn)婦血清抗—M抗體陽性,其子存在嚴重HDFN,治療前血紅蛋白為76 g/L,總膽紅素為209μmol/L,經(jīng)M抗原陰性懸浮紅細胞輸血治療后血紅蛋白升至119 g/L,總膽紅素降至90μmol/L,病情明顯好轉(zhuǎn)。該例具體實驗室結(jié)果見表2。

表2 新生兒溶血標本實驗室檢查

3 討 論

抗—M抗體為MN血型系統(tǒng)最常見抗體,分為天然抗體和免疫抗體,本研究抗—M陽性患者中33.33%為天然抗體。大多數(shù)抗—M抗體為IgM性質(zhì),在鹽水中凝集[2]。本研究中試管法篩查206例標本,其中15例存在抗—M抗體。微柱凝膠法對15例抗—M陽性標本進行IgG類抗—M檢測,檢出率為93.33%,6.67%標本僅存在IgM類抗—M。通常試管法僅能檢出IgM類抗體,有研究稱少數(shù)IgG類抗—M能在室溫鹽水介質(zhì)中發(fā)生凝集反應[3],因此不能單獨采用試管法鑒定抗體的特異性,需要與能夠鑒定IgG類抗體的方法組合使用。微柱凝膠卡中添加了抗人球蛋白,可檢測IgG類抗體,因此結(jié)合試管法和微柱凝膠法可以檢測不同抗體種類。

多數(shù)抗—M抗體具有溫度敏感性,在4℃下反應性強,室溫下反應弱,37℃時反應減弱甚至消失。本研究中1例標本室溫下試管法檢測為陰性,4℃呈弱陽性,同時存在4℃反應性IgG型抗—M,提示在日常實驗室檢查中抗—M由于溫度敏感性易被漏檢。進行抗體鑒定時,需將血清和譜細胞在4℃孵育后離心進行判定,防止漏檢。

IgG抗體可通過胎盤屏障,引起孕婦習慣性流產(chǎn)、新生兒溶血甚至死胎[4-5]。37℃有活性的IgG抗體可參與HTRs過程,并引起致命性HDFN[6]。以往研究認為抗—M很少引起急性和遲發(fā)性HTRs,抗—M引起的HDFN也極罕見。近年來,寧夏、南京、上海等地均有報道IgG抗—M導致的HTRs及HDFN[7-10]。MNs血型系統(tǒng)引起新生兒溶血病類似ABO血型系統(tǒng),無輸血史的第一胎也可能發(fā)病,低效價抗體也會引起嚴重的HDFN[6]。邊巴卓瑪?shù)萚11]指出,IgG抗—M引起的HDFN嚴重貧血和黃疸的比例高,不僅會導致新生兒的急性死亡,也會導致膽紅素腦病的發(fā)生,因此IgG抗—M檢測必不可少。本研究中,4℃反應性IgG抗—M陽性率為93.33%,顯著高于以往報道[1,12],37℃反應性IgG抗—M的陽性率為46.67%,提示利用微柱凝膠法檢測抗—M時,4℃下孵育可以提高檢出率,減少漏診。蘇州地區(qū)IgG抗—M攜帶率高,獻血者中檢出IgG抗—M抗體。37℃反應性IgG抗—M占比接近50%。低溫麻醉下,4℃反應性抗-M抗體可能會導致HTRs,37℃反應性抗—M在室溫便可引起HTRs,陸瓊等[13]發(fā)現(xiàn),4℃反應性抗—M也會引起HDFN,因此輸血實驗室應把不同反應溫度下抗—M檢測以及區(qū)分抗體類型作為常規(guī)項目。

DAT陽性是診斷HDFN的直接證據(jù)之一,表明新生兒紅細胞被母體IgG型抗體包被。有研究報道,由抗—M引起的HDFN,即使胎兒出生時MNS血型系統(tǒng)發(fā)育完全,DAT一般呈陰性。有學者認為抗—M致敏的紅細胞在血管內(nèi)清除較快,導致DAT陰性;另一種解釋是,與抗—K、抗—Ge導致的HDFN機制類似,MNS抗原表達于紅系祖細胞上而非成熟紅細胞上,因此抗—M更多是導致紅系祖細胞的破壞而非成熟紅細胞[14-17]。本研究中1例患者血清中存在的IgG抗-M導致嚴重的新生兒溶血,患兒直抗陰性。經(jīng)輸注M抗原陰性懸浮紅細胞1單位后,膽紅素顯著降低,血紅蛋白顯著升高,病情好轉(zhuǎn),證實抗—M導致的HDFN直抗可能為陰性,易引起臨床誤診漏診,造成嚴重后果,應引起輸血界同仁的重視,及時發(fā)現(xiàn)抗—M引起HDFN并進行輸血治療具有重要意義。

本研究具有局限性,如抗—M標本量較少,抗—M在不同溫度的抗體效價對HTRs及HDFN的影響未進行進一步探討。

綜上所述,本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),蘇州地區(qū)IgG型抗—M抗體比例較其他地區(qū)高,37℃反應性IgG型抗體占比高。抗體鑒定時應常規(guī)進行不同反應溫度下試管法及微柱凝膠法檢測,特別是微柱凝膠法檢測抗—M時采用4℃反應條件下孵育可以提高檢出率?？埂狹抗體引起HDFN病情嚴重,但溶血相關(guān)檢查缺少典型改變。血站需加強獻血者血液質(zhì)量管理,臨床應提高對孕婦流產(chǎn)、死胎、新生兒溶血或嚴重貧血的警惕性。提倡對首次妊娠的孕婦常規(guī)進行抗體篩查,判斷抗體特異性、類型等,并及時與臨床溝通,結(jié)合血紅蛋白及膽紅素水平、新生兒出生評分,積極開展早期有效的輸血治療。