脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白4在腎透明細(xì)胞癌中的表達及臨床意義

朱 軍，唐 矛

（上海市寶山區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院泌尿外科，上海 寶山 201900）

腎透明細(xì)胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC）是最常見的腎惡性腫瘤類型，占所有腎細(xì)胞癌的80%~90%[1]，以含有脂質(zhì)和糖原的透明細(xì)胞質(zhì)為主要組織學(xué)特征。細(xì)胞質(zhì)脂質(zhì)含量增加提示ccRCC腫瘤細(xì)胞中脂質(zhì)代謝發(fā)生改變，脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白4（fatty acid transport protein 4，F(xiàn)ATP4）屬于哺乳動物長鏈脂酰輔酶A合成酶家族，通過與輔酶A的酯化作用激活脂肪酸。FATP4擅長激活超長鏈脂肪酸，且自身具有轉(zhuǎn)運功能[2]。一項研究FATP4功能的報道表明，F(xiàn)ATP2、FATP4的過度表達增強了人肝癌細(xì)胞對脂肪酸的攝取[3]。此外，Yen等研究提示了高FATP4表達與通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的人類乳腺癌腫瘤進展相關(guān)[4]。本研究評估了ccRCC腫瘤組織和正常腎組織之間FATP4表達的差異。并分析了ccRCC病人中FATP4表達的臨床病理特征的相關(guān)性，探討其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017-12~2019-12本院收治的ccRCC病人80例為研究對象，根據(jù)國際抗癌聯(lián)合會（UICC）TNM分類分期標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ期25例，Ⅱ期39例，Ⅲ期10例，Ⅳ期6例。其中男性53例，女性27例，年齡51～79歲，平均年齡（63.7±8.5）歲。另選取40例因非腫瘤或腫瘤疾病手術(shù)切除的正常腎組織樣本作為對照組，排除標(biāo)準(zhǔn)：排除伴有急性心肌梗死、嚴(yán)重感染性疾病、阻塞性肺病等。每例做成4μm厚的切片并做免疫組化。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)。所有病人均簽署知情同意書。兩組病人的年齡、性別等一般資料差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 處理方法

收集經(jīng)手術(shù)取得的組織標(biāo)本，標(biāo)本切片厚為5μm，全部標(biāo)本均常規(guī)脫蠟、水化，免疫組織化學(xué)染色，采用免疫組化二步法測定FATP4的表達。將已知陽性片作為陽性對照標(biāo)準(zhǔn)，采用PBS取代第一抗體作為陰性對照。

結(jié)果判定：應(yīng)用免疫組化S-P法染色，在免疫組化染色中，F(xiàn)ATP4陽性信號為細(xì)胞漿或細(xì)胞膜的棕黃色顆粒物質(zhì)。將每個組織切片在光鏡下觀察5個高倍視野（×200），統(tǒng)計陽性細(xì)胞數(shù)并計算陽性細(xì)胞率，根據(jù)陽性細(xì)胞在觀察細(xì)胞中所占比例定義如下：陽性細(xì)胞數(shù)<25%（-），25%~50%（+），50%~75%（++），>75%（+++）。其中（++）和（+++）定義為高表達，（-）和（+）定義為低表達。

比較FATP4的陽性表達率在ccRCC病人不同臨床病理特征中的差異。采用spearson秩相關(guān)分析FATP4的陽性表達率與臨床病理特征的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 18.0軟件處理數(shù)據(jù)，兩組間的FATP4的陽性表達率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。FATP4的陽性表達率與臨床特征的相關(guān)性分析采用spearson相關(guān)性分析（檢驗水準(zhǔn)P=0.01）。

2 結(jié)果

2.1 FATP4在正常腎組織和ccRCC腫瘤組織中的表達率的比較

通過比較ccRCC腫瘤組織和正常腎組織中FATP4的表達，結(jié)果顯示ccRCC腫瘤組織的FATP4的陽性表達率顯著高于正常腎組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

表1 FATP4在正常腎組織和ccRCC腫瘤組織中的表達（n，%）

2.2 FATP4表達與ccRCC臨床特征的關(guān)系

FATP4的陽性表達在ccRCC病人的不同臨床病理特征中的差異如下表所示，不同年齡、性別、臨床分級病人之間FATP4的陽性表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），是否轉(zhuǎn)移，是否伴肉瘤樣特征病人的FATP4的陽性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。在TNM分期Ⅲ-Ⅳ的病人中，F(xiàn)ATP4高表達的比率顯著高于低表達的比率（P＜0.05）。在合并腫瘤壞死和復(fù)發(fā)的病人中，F(xiàn)ATP4高表達的比率顯著高于低表達的比率（P＜0.05）。提示FATP4高表達與TNM分期、腫瘤壞死和復(fù)發(fā)有關(guān)。

2.3 FATP4的表達和TNM分期、腫瘤壞死和復(fù)發(fā)的相關(guān)性分析

采用Spearson相關(guān)分析法對ccRCC組織中FATP4的陽性表達率進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示ccRCC組織中FATP4的表達與TNM分期、腫瘤壞死呈顯著正相關(guān)關(guān)系（P＜0.01），與是否復(fù)發(fā)無顯著相關(guān)性。

3 討論

表2 ccRCC病人中FATP4的表達

腎癌是全球第12位最常見的實體腫瘤[5]，ccRCC是最常見的組織學(xué)亞型，占所有腎臟腫瘤的90%左右[6]。ccRCC組織細(xì)胞起源于腎近端小管，具有豐富的透明細(xì)胞質(zhì)，原因在于糖原和脂質(zhì)含量較高。由于線粒體數(shù)量較多，因此也可能存在嗜酸性細(xì)胞或顆粒細(xì)胞[7]。ccRCC通常表現(xiàn)為15.3%~21.5%的轉(zhuǎn)移率和71%~81.3%的5年存活率[8]。高達30%的病人在診斷時出現(xiàn)轉(zhuǎn)移性疾病，約20%~30%的接受手術(shù)的受試者會復(fù)發(fā)。因此，早期診斷或探索敏感的因子對于提高這些病人的生存率至關(guān)重要。

脂質(zhì)代謝失調(diào)被認(rèn)為是腫瘤的特征之一，癌細(xì)胞不僅能合成脂肪酸，還會增強外源性脂肪酸的攝取，以應(yīng)對特定遺傳和環(huán)境條件下對脂肪酸的需求增加。有報告發(fā)現(xiàn)，在缺氧等代謝應(yīng)激條件下，細(xì)胞外脂質(zhì)清除是癌細(xì)胞維持活力和/或生長的重要適應(yīng)機制[9]。另一項研究表明，當(dāng)癌細(xì)胞從增殖狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)檫w移狀態(tài)時，會降低脂質(zhì)的生物合成并依賴于外源性脂質(zhì)攝取[10]。在各種實驗?zāi)Ｐ椭?，已建議FATP作為膜轉(zhuǎn)運蛋白和/或作為具有CoA合成酶活性的酶來促進長鏈脂肪酸的轉(zhuǎn)運[11]。哺乳動物FATP家族由六個成員組成，F(xiàn)ATP1到FATP6[12]。其中FATP4通?？稍诙喾N細(xì)胞中檢測到，包括心臟、肝臟、大腦、腎臟、肌肉、皮膚和內(nèi)皮細(xì)胞[13]。

本研究表明，ccRCC腫瘤組織中FATP4的表達高于正常腎組織，研究結(jié)果提示，通過FATP4跨細(xì)胞膜的脂肪酸轉(zhuǎn)運增加可能是ccRCC的腫瘤特異性特征。此外，F(xiàn)ATP4表達與ccRCC高TNM分期、腫瘤壞死和復(fù)發(fā)有關(guān)。這些結(jié)果表明FATP4在ccRCC腫瘤組織中的高表達可能有助于ccRCC的腫瘤發(fā)生和腫瘤進展。同時，ccRCC腫瘤細(xì)胞顯示出FATP4表達顯著增加，F(xiàn)ATP4在80例ccRCC病人中有35例高表達。表明ccRCC細(xì)胞在代謝上與正常細(xì)胞不同，并且在腫瘤發(fā)生過程中更傾向于從細(xì)胞外來源攝取脂肪酸的機制。本研究結(jié)果與既往報道結(jié)果相似，毛英等研究結(jié)果顯示FABP4可通過促進EMT等促進腫瘤細(xì)胞的侵襲[14]。

此外，臨床上，腫瘤細(xì)胞中FATP4高表達與TNM分期、腫瘤壞死和腫瘤復(fù)發(fā)有關(guān)，與ccRCC的其他臨床病理參數(shù)無相關(guān)性。推測其原因可能在于在ccRCC腫瘤組織中，F(xiàn)ATP4的高表達可能會降低線粒體中脂肪酸的利用并促進脂肪酸通過質(zhì)膜的攝取，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)積累并促進腫瘤進展[15]。

本研究又分析了ccRCC組織中FATP4的陽性表達率與臨床特征的相關(guān)性，結(jié)果顯示FATP4的表達與TNM分期、腫瘤壞死呈顯著正相關(guān)關(guān)系（P＜0.01），與是否復(fù)發(fā)無顯著相關(guān)性。提示隨著ccRCC病人TNM分期的增加，病人FATP4水平隨之升高（P<0.05），能夠預(yù)測病人的嚴(yán)重程度。然而在本研究中，盡管在合并復(fù)發(fā)的病人中，F(xiàn)ATP4高表達的比率顯著高于低表達的比率，但FATP4的表達增加與是否復(fù)發(fā)無顯著相關(guān)性。

綜上所述，ccRCC腫瘤組織中FATP4的表達與腎癌的臨床病理特征關(guān)系密切，包括TNM分期和腫瘤壞死，檢測FATP4的陽性表達對于評估腎癌的惡性程度和預(yù)后具有重要臨床指導(dǎo)價值。