HBV前S1抗原與HBV-DNA在判斷HBV感染中的臨床價值

王 俊，安 良，王朋斌，趙曉軍

1.西安高新醫(yī)院檢驗(yàn)科,陜西西安 710075;2.陜西省渭南市潼關(guān)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西渭南 710000

乙型肝炎病毒(HBV)是DNA病毒的一種，當(dāng)前在臨床上常用的HBV血清標(biāo)志物為乙型肝炎五項(xiàng)，具體包括乙型肝炎病毒e抗體(HBeAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗體(HBsAb)[1]。HBV血清標(biāo)志物檢測可以反映機(jī)體對HBV的免疫應(yīng)答情況，但是不能對HBV的傳染性、復(fù)制情況進(jìn)行直接反映[2]。臨床上一般將HBV-DNA作為監(jiān)測患者抗病毒治療效果的重要指標(biāo)，但是由于使用的儀器比較昂貴，使其在基層醫(yī)院的應(yīng)用受到了限制。HBV前S1抗原在病毒復(fù)制、裝配、感染和刺激機(jī)體發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中發(fā)揮著重要的作用，同時在診斷乙型肝炎、判斷最終的治療效果及預(yù)后情況方面有積極的作用[3]。本研究對HBV前S1抗原與HBV-DNA在判斷HBV感染中的臨床應(yīng)用價值進(jìn)行了探討，以期為臨床治療乙型肝炎患者提供科學(xué)的依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年6月至2019年3月在西安高新醫(yī)院與陜西省渭南市潼關(guān)縣人民醫(yī)院住院的乙型肝炎患者與門診體檢者共206例為研究對象，其中HBV-DNA陽性125例[41例HBeAg陽性患者納入HBeAg陽性組，84例HBeAg陰性患者納入HBeAg陰性組]。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)乙型肝炎患者均符合乙型肝炎相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)無其他重大軀體疾病；(3)無精神障礙。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)心、腎功能嚴(yán)重異常；(2)長期服用對肝臟造成損傷的藥物；(3)臨床各項(xiàng)資料不完整。206例研究對象中男133例，女73例；年齡20～72歲，平均(45.6±1.2)歲。選擇部分確診的乙型肝炎患者(33例)對其進(jìn)行拉米夫定抗病毒藥物治療。本研究得到兩所醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批，所有研究對象均知情同意。

1.2方法

1.2.1治療方法 對部分確診的乙型肝炎患者進(jìn)行拉米夫定(國藥準(zhǔn)字：H20100141；江西青峰藥業(yè)有限公司)抗病毒藥物治療，口服，1次0.5 mg，1次/天，連續(xù)治療3個月。

1.2.2HBV前S1抗原檢測 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法對HBV前S1抗原進(jìn)行檢測：使用酶標(biāo)抗體、固相化抗體進(jìn)行檢測，如果標(biāo)本中存在相關(guān)抗原，則會形成抗體復(fù)合物(抗體-抗原-酶標(biāo))，加入3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物后會有顯色反應(yīng)發(fā)生，反之則無顯色反應(yīng)。HBV前S1抗原雙抗體夾心ELISA試劑盒由英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司提供。

1.2.3熒光定量PCR檢測 從血清中提取DNA后采用熒光定量PCR檢測方法進(jìn)行檢測。PCR檢測儀(LightCycler)先在50 ℃條件下反應(yīng)2 min，循環(huán)1次后在94 ℃條件下保溫5 min，循環(huán)1次之后按照94 ℃ 10 s→60 ℃ 45 s，循環(huán)5次。再按照94 ℃ 10 s→60 ℃ 45 s,循環(huán)40次。60 ℃采集FAM.JOE熒光通道的信號。

1.3觀察指標(biāo) (1)分析不同陽性標(biāo)志物人群血清中HBV前S1抗原、HBV-DNA的檢測結(jié)果。(2)比較HBeAg陽性組與HBeAg陰性組血清HBV前S1抗原、HBV-DNA的檢測結(jié)果。(3)分析部分乙型肝炎患者(33例)接受拉米夫定抗病毒藥物治療前后的情況。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1不同陽性標(biāo)志物人群血清中HBV前S1抗原、HBV-DNA的檢測結(jié)果分析 治療前，HBsAg、HBeAg、HBcAb同時陽性的人群中，HBV-DNA、HBV前S1抗原、HBV前S1抗原聯(lián)合HBV-DNA陽性率高于其他各項(xiàng)標(biāo)志物陽性組合陽性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同陽性標(biāo)志物人群血清中HBV前S1抗原、HBV-DNA的檢測結(jié)果分析[n(%)]

2.2兩組HBV-DNA陽性患者HBV前S1抗原、HBV-DNA的檢測結(jié)果分析 治療前，HBeAg陽性組HBV-DNA、HBV前S1抗原、HBV前S1抗原聯(lián)合HBV-DNA陽性率高于HBeAg陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組HBV-DNA陽性患者血清中HBV前S1抗原、HBV-DNA的檢測結(jié)果分析[n(%)]

2.3部分乙型肝炎患者接受治療前后的情況分析 33例乙型肝炎患者治療后HBeAg、HBV前S1抗原、HBV-DNA檢測陽性例數(shù)少于治療前，治療后HBeAb檢測陽性例數(shù)多于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 部分乙型肝炎患者接受治療前后的情況分析(n,n=33)

3 討 論

乙型肝炎是臨床上較為常見的疾病，HBV前S1抗原在HBV外膜蛋白中屬于非常重要的組成部分，它是HBV基因S2區(qū)、前S1區(qū)、S區(qū)編碼的產(chǎn)物[4]。HBV前S1抗原主要存在于病毒顆粒表面，與HBV的復(fù)制存在緊密的聯(lián)系，免疫原性非常高[5]。HBV前S1抗原在HBV侵入、分泌、組裝中發(fā)揮著重要的作用，而機(jī)體對HBV前S1抗原的有效免疫應(yīng)答可以發(fā)揮阻止HBV侵入肝臟，清除肝臟中已有HBV的功效[6-7]。

本研究結(jié)果顯示，治療前，HBsAg、HBeAg、HBcAb同時陽性患者中，HBV-DNA、HBV前S1抗原、HBV前S1抗原聯(lián)合HBV-DNA陽性率高于其他各項(xiàng)標(biāo)志物陽性組合陽性率(P<0.05)。這說明HBV前S1抗原、HBV-DNA之間有一定的聯(lián)系。HBV前S1抗原會引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，其體液免疫應(yīng)答一般在HBV感染的初期出現(xiàn)[8]。本研究結(jié)果顯示，HBeAg陽性組HBV-DNA、HBV前S1抗原、HBV前S1抗原聯(lián)合HBV-DNA陽性率高于HBeAg陰性組(P<0.05)，這與其他學(xué)者的研究結(jié)果基本一致[9]。血清中的HBeAg、HBV前S1抗原、HBV-DNA會同時出現(xiàn)或者消失，這就說明當(dāng)HBV前S1抗原為陽性時，更有利于臨床對乙型肝炎的診斷，且可以將其作為反映病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄的重要指標(biāo)。

由于受到各種因素的影響，HBV為了逃避機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)，會在前C區(qū)發(fā)生變異，而變異會使HBeAg變?yōu)殛幮?，但是這并不代表HBV的復(fù)制下降，而對HBV前S1抗原進(jìn)行檢測可以有效減少因?yàn)镠BV變異而發(fā)生的HBeAg假陰性現(xiàn)象。有研究者認(rèn)為，HBV前S1抗原可在臨床診斷乙型肝炎中發(fā)揮重要作用[10]。為了避免HBeAg檢測出現(xiàn)假陰性的情況，可對HBV-DNA、HBV前S1抗原進(jìn)行檢測，以對HBV在機(jī)體內(nèi)的感染、復(fù)制的情況進(jìn)行準(zhǔn)確反映[10]。

對乙型肝炎患者進(jìn)行拉米夫定治療可以有效抑制HBV的復(fù)制，使肝細(xì)胞膜上的靶抗原減少，最終使新生的肝細(xì)胞免受HBV感染，以及細(xì)胞毒性T細(xì)胞的侵襲[11]。本研究結(jié)果顯示，在部分采用拉米夫定治療的確診患者中，治療后HBeAg、HBV前S1抗原、HBV-DNA檢測陽性例數(shù)少于治療前，治療后HBeAb檢測陽性例數(shù)多于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這就說明HBV前S1抗原消失與HBV的清除能力有一定的關(guān)系。

HBV-DNA、HBeAg在臨床上被認(rèn)為是判斷HBV感染、復(fù)制情況的較好指標(biāo)，有研究報(bào)道當(dāng)HBeAg轉(zhuǎn)為陰性時提示病毒被有效清除[12]。但也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，當(dāng)HBeAg轉(zhuǎn)為陰性時乙型肝炎患者體內(nèi)的病毒依然存在復(fù)制現(xiàn)象[13]，因此，對HBV前S1抗原進(jìn)行檢測更能反映HBV感染、復(fù)制情況。

HBeAg、HBV前S1抗原、HBV-DNA陽性提示乙型肝炎患者具有傳染性。由于HBV的變異特性，臨床檢測方法存在一定的不足，對患者進(jìn)行乙型肝炎五項(xiàng)檢測或者是單純的HBV-DNA檢測得到的結(jié)果依然有較大的差異。乙型肝炎五項(xiàng)檢測的方法簡單、靈敏度較高、檢查費(fèi)用較低，這使其在臨床上有一定的使用價值。臨床上一般通過HBeAg檢測結(jié)果對病毒在機(jī)體內(nèi)的感染、復(fù)制情況進(jìn)行初步判斷，且將HBV-DNA陽性作為病毒在機(jī)體內(nèi)感染、復(fù)制的金標(biāo)準(zhǔn)[14]。但是，由于HBV-DNA檢測對實(shí)驗(yàn)室有一定要求，不是每個醫(yī)院都具備檢測條件，在一般的情況下，HBV前S1抗原可以替代常規(guī)檢測方法或者是作為HBV-DNA、HBeAg的補(bǔ)充檢測指標(biāo)對HBV在機(jī)體內(nèi)的感染、復(fù)制情況進(jìn)行判斷，且可對患者的預(yù)后進(jìn)行判斷[15]。HBV前S1抗原聯(lián)合血清標(biāo)志物檢測可以為臨床治療乙型肝炎患者提供科學(xué)依據(jù)。

綜上所述，乙型肝炎診斷中，可以將HBV前S1抗原作為判斷HBV感染的重要指標(biāo)。