高效液相色譜熒光法測定炒黨參中4種多環(huán)芳烴

◎ 陽文武，向春燕，萬 莉，王文婷，周祥德

（1.重慶市萬州食品藥品檢驗所，重慶 404000；2.重慶市黔江食品藥品檢驗所，重慶 409000）

炒黨參是常用的藥食兩用中藥材[1-2]，具有健脾益肺、養(yǎng)血生津等功效[3]。人們常用炒黨參煲湯，用以補中氣、養(yǎng)血生津、增強免疫力[4]。多環(huán)芳烴（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs） 是 有機物不完全燃燒時產(chǎn)生的含有兩個以上苯環(huán)的碳氫化合物，是重要的食品和環(huán)境污染物，黨參在炒制過程中可能產(chǎn)生多環(huán)芳烴[5]。PAHs有200余種，其中大多數(shù)具有遺傳毒性、致突變性和致癌性，如苯并[a]蒽、?、苯并[b]熒蒽和苯并[a]芘等[6]。歐盟委員會835/2011號文件規(guī)定了部分食材中多環(huán)芳烴限量值，其中苯并[a]蒽、?苯并[b]熒蒽和苯并[a]芘的總量不得大于 12 μg·kg-1，苯并 [a]芘不得大于2 μg·kg-1，而我國《食品安全國家標準 食品中污染物限量》（GB 2762—2017）中僅規(guī)定了苯并[a]芘的最高限量值，其中油脂及其制品中的限量值最大，為10 μg·kg-1。為提高炒黨參的質(zhì)量安全水平，加強與國際標準接軌，對炒黨參中4種多環(huán)芳烴的含量進行測定具有十分重要的現(xiàn)實意義。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

LC-20A高效液相色譜儀、KH-2000DB型超聲波、IKA MS3渦旋振蕩器、Waters固相萃取裝置、Sartorius SQP型分析天平、BiotageTurboVap2氮吹儀、SIGMA 4-16S離心機。

乙腈、正己烷、二氯甲烷均為色譜純，DiKMA公司；苯并[a]蒽、?、苯并[b]熒蒽和苯并[a]芘標準溶液，100 μg·mL-1，美國CHEM SERVICE公司；MIP-PAHs固相萃取柱。

1.2 試驗方法

1.2.1 混合標準工作液配制

分別精確量取各標準溶液適量，用乙腈稀釋成1 μg·mL-1的單標溶液，精確吸取各單標溶液，配制成濃度為 1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1和 100 ng·mL-1的系列混合標準工作液。

1.2.2 供試品溶液制備

稱取2 g（精確到0.001 g）試樣于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋振蕩30 s后，超聲提取30 min，4 500 r·min-1離心5 min，吸取上清液于氮吹管中，離心管下層用10 mL乙腈重復提取1次，合并提取液于氮吹管中，氮吹至近干；加入5 mL正己烷，渦旋振蕩30 s溶解，待凈化。將待凈化溶液全部加入MIP-PAHs固相萃取柱，用2 mL正己烷洗滌氮吹管并加入柱中，用3 mL的正己烷淋洗2次，棄去淋洗液，再用10 mL二氯甲烷洗脫并收集凈化液到離心管中；氮吹至近干，用乙腈定容至1.0 mL，過濾，待測。

1.2.3 色譜條件

Waters PAH C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈-水為流動相，梯度洗脫見表1。柱溫30 ℃；進樣量10 μL；檢測波長：激發(fā)和發(fā)射波長見表2。

表1 HPLC-FLD流動相洗脫梯度及流速表

表2 多環(huán)芳烴的激發(fā)波長、發(fā)射波長及其切換色譜時間表

2 結(jié)果與分析

2.1 多環(huán)芳烴色譜圖

在1.2.3的色譜條件下，各色譜峰分離度良好，色譜圖見圖1。

圖1 4種多環(huán)芳烴色譜圖

2.2 方法的線性范圍與檢測限

取系列混合標準工作液在1.2.3色譜條件下分別測定，以各PAHs的峰面積（Y）為縱坐標，濃度（X）為橫坐標，繪制工作曲線，各PAHs在1～100 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關系良好，r≥0.999 8，結(jié)果見表3。當炒黨參的稱樣量為2 g，定容體積為1 mL時，4種PAHs的檢測限見表3。

表3 線性關系和檢測限表

2.3 加標回收率

稱取空白樣品6份，每份約2 g，分別精確加入濃度為50 ng·mL-1的混合標準溶液1 mL，按1.2.2方法制備供試品溶液，在1.2.3色譜條件下分別測定，計算平均回收率，結(jié)果見表4。由表4可知，苯并[a]蒽、?、苯并[b]熒蒽和苯并[a]芘的平均回收率分別為86.3%、84.5%、88.0%和90.6%，RSD分別為1.4%、1.9%、1.9%和1.0%，表明方法準確度良好。

表4 回收率和RSD表（n=6）

2.4 樣品測定

按1.2.2方法處理樣品，在1.2.3色譜條件下分別測定，結(jié)果見表5。由表5可知，4種PAHs在20批炒黨參中均有檢出，均符合我國相關限量標準。但長期食用含PAHs的炒黨參仍有潛在的健康安全風險。

表5 樣品含量測定結(jié)果表

3 結(jié)論與討論

（1）制備供試品溶液時，參考《食品安全國家標準 食品中多環(huán)芳烴的測定》（GB 5009.265—2016）中的方法發(fā)現(xiàn)色譜峰基線效果不好，通過摸索，最終確定了1.2.2項方法。

（2）色譜條件在《食品安全國家標準 食品中多環(huán)芳烴的測定》（GB 5009.265—2016）基礎上進行優(yōu)化，最終確定了1.2.3項色譜條件。

采用乙腈振蕩超聲提取后，用多環(huán)芳烴專用SPE小柱凈化，通過高效液相色譜分離，外標法定量，方法快速靈敏，重復性好，可用于炒黨參中4種多環(huán)芳烴的定量分析。