免疫組化染色和特殊染色對顯示幽門螺桿菌的檢驗分析

鄧士杰 喻朝霞

【摘要】目的：探討分析免疫組化染色和特殊染色對顯示幽門螺桿菌的檢驗情況。方法：2018年1至2021年1月收集本院60例幽門螺桿菌感染患者，所有患者均取病理活檢，對組織進行免疫組化染色和特殊染色，分析兩種方法的幽門螺桿菌陽性率、靈敏度和特異性。結(jié)果：相比特殊染色，免疫組化染色幽門螺桿菌陽性率高（P<0.05），靈敏度和特異性高（P<0.05）。結(jié)論：相比特殊染色，免疫組化染色顯示幽門螺桿菌的檢驗的效果更佳，陽性率高，漏診率低，靈敏度和特異性高，具有臨床價值。

【關(guān)鍵詞】特殊染色；免疫組化染色；幽門螺桿菌；靈敏度；特異性

【中圖分類號】R446.【文獻標(biāo)識碼】A.【文章編號】2096-5249（2021）14-0151-02

幽門螺桿菌（HP）是一種生長條件嚴(yán)格的螺旋狀微厭氧菌。1983年首次從慢性活動性胃炎患者的胃黏膜活檢中分離出來，是唯一能在人胃中存活的微生物種類[1]。在世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)公布的致癌物清單中，幽門螺桿菌被列入Ⅰ類致癌物清單[2]。研究指出，幽門螺桿菌生活在人體胃的幽門部分，是最常見的細菌病原體之一，5歲以下的感染率高達50%[3]。這種細菌感染首先引起慢性胃炎，進而導(dǎo)致胃潰瘍和胃萎縮。在嚴(yán)重的情況下，它會發(fā)展成胃癌。據(jù)統(tǒng)計，首先感染幽門螺桿菌的人群，萎縮性胃炎和胃癌的發(fā)病率較高[4]。幽門螺桿菌感染與胃癌的死亡率是平行的。幽門螺桿菌寄生于胃黏膜，67%～80%的胃潰瘍和95%的十二指腸潰瘍是由幽門螺桿菌引起的[5]。因此對于幽門螺桿菌的檢測是必要的，診斷幽門螺桿菌感染的方法很多，如活檢、幽門螺桿菌分離培養(yǎng)、快速尿素酶試驗、尿素呼氣試驗、尿氨排泄試驗、血清學(xué)試驗、組織活檢等。本研究分析比較免疫組化染色和特殊染色對顯示幽門螺桿菌的檢驗情況。

1？對象與方法

1.1.研究對象

2018年1月至2021年1月收集本院60例幽門螺桿菌感染患者，年齡41～78（60.24±3.64）歲，男37例，女23例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)過培養(yǎng)法確定為幽門螺桿菌感染患者；對本研究知情同意并自愿參與的患者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：其他病原菌感染性疾病。

1.2.方法

病理活檢。檢查前，患者應(yīng)禁食禁水。胃鏡管應(yīng)從患者的食道插入患者的胃部，在胃鏡觀察下，用活檢鉗從病灶處取出組織，并確保組織上無血、黏液等。如果有血液、污垢、黏液等，可以用水清洗。

石蠟切片。取出組織后，用10%甲醛固定，保證新鮮。將石蠟在80%、90%、95%和100%酒精中浸泡2 h，以置換組織中的透明劑。石蠟包埋的組織被放置在熔化的固體石蠟中。石蠟?zāi)毯?，將組織包裹在其中。石蠟塊被修剪和切片。切片機用于切片。石蠟切片的厚度一般為4～6 μm。用眼科鑷子提起蠟帶，在40～45 ℃的水面上輕輕展開。輕微起皺的蠟帶會因水的張力和溫度而自然平滑。切片在恒溫水面上完全壓平后，將蠟片撈到切片中部，倒出切片上的殘留水分，放入60～65 ℃的恒溫烘箱中烘烤。切片漂白干燥溫控器烘箱15～30 min ，去除溶解組織間隙中的石蠟。

免疫組化，石蠟切片60 ℃烘烤30 min。石蠟切片常規(guī)二甲苯脫蠟 Ⅰ 從二甲苯Ⅱ到無水乙醇過程如下：無水乙醇Ⅱ-無水乙醇Ⅲ-95%乙醇-90%乙醇-80%乙醇-70%乙醇-蒸餾水洗滌并浸泡使用?？乖迯?fù)，將切片浸入裝有0.01 M檸檬酸緩沖溶液（pH 6.0）的沸騰壓力鍋中，蓋上蓋子。添加壓力閥后，切片繼續(xù)加熱至空氣噴射。計數(shù)2 min 后，用自來水沖洗切片至室溫。取出切片，用蒸餾水沖洗2次，每次3 min 0.01 mpbs溶液沖洗兩次，除去l磷酸鹽緩沖鹽浴液（PBS）溶液，每片1滴（50 μL）與1滴羊血清孵育。血清被去除。X抗體1滴（50 μL），室溫孵育后，每片加入1滴聚合物增強劑（A劑），每片加入1滴聚合物增強劑（B劑），3滴PBS每片加入溶液，每片加入2滴DAB溶液。結(jié)果在顯微鏡下觀察。梯度酒精脫水為70%-80%-90%-100%Ι-100%II。脫色為二甲苯I-顯微鏡下觀察結(jié)果。

特殊染色。吉姆薩染色為石蠟切片60 ℃烘烤30 min。石蠟切片常規(guī)脫蠟為二甲苯Ι從二甲苯II到無水乙醇Ι樣品用胰蛋白酶處理；取適量吉姆薩染料溶液和磷酸鹽緩沖液，按一定比例混合，即吉姆薩染料溶液，備用；浸在吉姆薩染色液中，干燥并在顯微鏡下檢查。

1.3.觀察指標(biāo)

分析兩種方法的幽門螺桿菌陽性率、靈敏度和特異性。

1.4.統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 20.0軟件，計數(shù)資料采用[n（%）]表示，進行χ2檢驗，當(dāng)P<0.05為組間數(shù)據(jù)差異顯著。

2？結(jié)果

2.1.分析兩種方法的幽門螺桿菌陽性率

相比特殊染色，免疫組化染色幽門螺桿菌陽性率高（P<0.05），見表1。

2.2.分析兩種方法的靈敏度和特異性

相比特殊染色，免疫組化染色靈敏度和特異性高（P<0.05），見表2。

3？討論

幽門螺桿菌是一種螺旋狀、有鞭毛的微厭氧菌，主要生活在人胃的幽門黏膜中，它是唯一可以在人胃中存活的微生物物種[6]。幽門螺桿菌具有高度傳染性，主要通過口腔口傳播和糞口傳播。在中國，發(fā)病率非常高，大約一半的人曾經(jīng)感染過幽門螺桿菌[7]。幽門螺桿菌感染與胃腸道疾病的發(fā)生密切相關(guān)，如慢性胃炎、胃潰瘍、胃癌等疾病。因此，對于幽門螺桿菌感染陽性的患者，應(yīng)積極治療，根治。幽門螺桿菌檢查的主要方法有C14呼氣試驗、血液檢查、胃鏡活檢等[8]?，F(xiàn)在檢測幽門螺桿菌的方法很多，分為侵入性和非侵入性。侵入性檢查是對標(biāo)本進行活檢，主要包括胃鏡下快速尿素酶試驗。在檢查中，完成胃鏡檢查后，在距幽門 5 cm 范圍內(nèi)取了一個小樣本或黏液，并觀察了胃的各個部位。這種黏液中可能含有幽門螺桿菌分泌的尿素酶，會使試劑尿素分解，使試劑呈玫瑰色。這可以是定性的，即有或沒有，也可以是輕度、中度和重度，但不能是定量的[9]。在胃鏡下，會取一些標(biāo)本進行病理活檢。有時在顯微鏡下，可以看到幽門螺桿菌。這也是一種重要的診斷方法，具有侵入性。無創(chuàng)的方法多是尿素呼氣試驗。尿素呼氣試驗分為C13和C14，即同位素分解，滅活周期不同，所以比較貴、但危害稍小。其次，在糞便中，可以發(fā)現(xiàn)一些與幽門螺桿菌有關(guān)的物質(zhì)作為測試。第三是在血液中。可以提取針對幽門螺桿菌的抗體。

本研究中，相比特殊染色，免疫組化染色幽門螺桿菌陽性率高（P<0.05），靈敏度和特異性高（P<0.05）。究其原因，吉姆薩染色液由天藍色和伊紅組成，嗜酸性顆粒是堿性蛋白質(zhì)和伊紅的結(jié)合物，稱為嗜酸性物質(zhì)；核蛋白和淋巴細胞的細胞質(zhì)呈酸性，與堿性染料亞甲藍或天藍色結(jié)合，染成紫藍色，稱為堿性物質(zhì)[10]。然而，吉姆薩染色顯示細胞和寄生蟲的染色更好，結(jié)構(gòu)更清晰，細胞質(zhì)和中性顆粒的染色差[11]。免疫組化是病理診斷中常用的檢查方法。當(dāng)顯微鏡下無法確定細胞或組織的來源時，可加用免疫組化來確定腫瘤的來源和良惡性的區(qū)分。有時顯微鏡下可判斷為癌細胞，但無法進一步明確病理分類，可通過免疫組化進一步確診，如鱗癌、腺癌、小細胞癌等淋巴結(jié)活檢時做完后，需要做免疫組化，確定原發(fā)部位，才能找到原發(fā)病灶。免疫組化也可作為惡性腫瘤診斷和鑒別診斷的重要依據(jù)，判斷良性腫瘤時也需要檢查免疫組化。免疫組化染色是免疫學(xué)中基于抗原與抗體特異性結(jié)合的反應(yīng)原理，一般采用生物素標(biāo)記抗體的方法來顯示組織中的抗原，研究抗原的定位、定性和相對定量[12]。根據(jù)切片情況，我們選擇是否加免疫組化。典型病例無須檢查即可確診，無須做免疫組化。如不能確診，應(yīng)進一步通過免疫組化確定腫瘤類型，以免影響患者的治療。免疫組化染色是病理科的一種輔助檢查方法。通常，當(dāng)患者的疾病不是特別典型，或者疾病難以病理分類時，會采用免疫組化染色輔助診斷。免疫組化染色是利用已知抗體檢測組織中未知抗原的抗原和抗體染色方法。組織中存在不同的抗原表型，每種疾病的蛋白表達可能不同。不同的抗體用于檢測組織中不同的抗原，以指示組織來源的疾病，或通過蛋白質(zhì)的表達對組織來源進行分類。

綜上所述，相比特殊染色，免疫組化染色顯示幽門螺桿菌的檢驗的效果更佳，陽性率高，漏診率低，靈敏度和特異性高，具有臨床價值。

參考文獻

[1] 張淦梅.腫瘤病理診斷中特殊染色聯(lián)合免疫組化技術(shù)的應(yīng)用效果及檢測陽性率評價[J].臨床檢驗雜志（電子版），2019，8（4）：262-263.

[2] 馬鈺，劉屹，普彥淞，等.P504S，Ki-67對老年胃癌的早期診斷價值及與幽門螺旋桿菌的相關(guān)性研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2020，301（19）：109-113.

[3] 賈坤，蘇建榮.胃癌組織中IFN-γ，IL-4和SOX-2蛋白表達及其與幽門螺桿菌感染的相關(guān)性分析[J].中國臨床醫(yī)學(xué)，2019，26（6）：900-904.

[4] 萬維松，王樂，胡余昌，等.免疫組化染色與-（14）C尿素呼氣試驗在幽門螺桿菌相關(guān)胃炎診斷中的比較[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2019，35（1）：51-54.

[5] 武才琪，王慶林，李盼，等.P53，PCNA，CA724，胃泌素17及幽門螺桿菌抗體聯(lián)合檢測在萎縮性胃炎與早期胃癌鑒別中的應(yīng)用價值[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2020，32（2）：72-76.

[6] 喻斌，曾孟暉，徐寅，等.肝胃百合湯對慢性應(yīng)激與幽門螺桿菌雙重損傷因素模型小鼠胃黏膜組織HSP70、NF-κB蛋白表達的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2019，12（9）：1073-1078.

[7] 徐月娥，李淑湘，高鑫，等.蘇州兩所幼兒園兒童感染幽門螺桿菌的危險因素及口腔清潔措施對降低口腔幽門螺桿菌感染的作用[J].華西口腔醫(yī)學(xué)雜志，2019，37（1）：70-75.

[8] 徐文敏，張海燕，何苗，等.幽門螺旋桿菌感染性胃癌組織中Cyclin D1、MMP-9的表達及意義[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2019，35（2）：213-215.

[9] 毛勇，王軍，陳文燕.CCR3聯(lián)合Cyclin D1在幽門螺旋桿菌感染所致胃癌及癌前病變中的診斷價值[J].甘肅科學(xué)學(xué)報，2020，148（6）：28-34.

[10] 姚莉，湯顯斌，袁玲玲，等.硫酸亞鐵特殊染色與免疫組織化學(xué)雙重染色在黑色素腫瘤診斷中的應(yīng)用[J].中華病理學(xué)雜志，2020，49（5）：482-484.

[11] 張強，侯丹杰，陳廣生，等.Calretinin，S100免疫組化染色及二者聯(lián)合檢測在新生兒先天性巨結(jié)腸診斷中的應(yīng)用價值研究[J].現(xiàn)代消化及介入診療，2020，25（10）：99-102.

[12] 孫林雍，嚴(yán)嘉琦，陳昶，等.熒光定量PCR與抗酸特殊染色對疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核中結(jié)核分枝桿菌的檢測對比[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2020，36（9）：101-103.