PCR檢查法與細(xì)菌培養(yǎng)法在陰道細(xì)菌檢查中的臨床檢驗(yàn)效果研究

江水明

【摘 要】目的：研究臨床進(jìn)行陰道細(xì)菌檢查時(shí)，采用PCR檢查法、細(xì)菌培養(yǎng)法的效果。方法：研究將2020年1月至2020年12月到院接受陰道細(xì)菌檢查的陰道炎患者作為分析對(duì)象，共236例，均采集陰道分泌物作為檢驗(yàn)樣本，實(shí)施PCR檢查法、細(xì)菌培養(yǎng)法檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)并對(duì)比檢驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果：PCR檢查中腸球菌、棒狀桿菌、戛納特桿菌分別檢出37例、68例、99例，總陽性率為86.44%，細(xì)菌培養(yǎng)檢查中腸球菌、棒狀桿菌、戛納特桿菌分別檢出30例、39例、81例，總陽性率為63.56%，陽性檢出率比較，PCR檢查法顯著偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：細(xì)菌性陰道炎嚴(yán)重困擾女性的健康與生活，針對(duì)患者細(xì)菌感染情況進(jìn)行準(zhǔn)確的檢驗(yàn)，對(duì)治療工作的展開意義重大，是避免繼發(fā)盆腔感染、不孕不育等嚴(yán)重癥狀的關(guān)鍵，PCR檢查法、細(xì)菌培養(yǎng)法作為兩種常用陰道細(xì)菌檢查手段，對(duì)細(xì)菌和細(xì)菌種類的判斷均有一定幫助，而其中PCR檢查法具有更高的應(yīng)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】陰道細(xì)菌檢查；PCR檢查法；細(xì)菌培養(yǎng)法；腸球菌；棒狀桿菌；戛納特桿菌

陰道炎的發(fā)生往往伴隨著較明顯的外陰灼痛、外陰瘙癢以及異常增多的陰道分泌物等癥狀，這種生理上的不適將嚴(yán)重累及患者心理狀態(tài)、健康生活、夫妻關(guān)系等，危害較大，需要對(duì)相關(guān)防治工作提高重視[1]。根據(jù)報(bào)道指出，女性在健康狀態(tài)下，其陰道組織對(duì)各種病原體的入侵具備一定防御能力，例如陰道中緊貼的前后壁、閉合狀態(tài)的陰道口，以及雌激素作用下出現(xiàn)表層細(xì)胞角化、增生的上皮細(xì)胞，可以使陰道中維持平衡的酸堿度，進(jìn)而對(duì)存在其中的病原體起到抑制作用，但是當(dāng)這種防御功能受創(chuàng)時(shí)，則會(huì)給病原體可乘之機(jī)，最終引起陰道炎癥[2]。一般情況下，女性陰道中寄居有厭氧菌、需氧菌等細(xì)菌，組成陰道菌群，而當(dāng)該菌群在其他因素影響下失衡后，則會(huì)促成條件致病菌，導(dǎo)致多種類型的陰道炎癥，而其中占比最高的為細(xì)菌性陰道炎[3]?？咕幨羌膊≈委煹闹饕侄危鲇趯?duì)合理使用抗菌藥，避免增加細(xì)菌耐藥性等問題的重視，臨床認(rèn)為有必要針對(duì)患者細(xì)菌感染情況進(jìn)行了解和掌握。本文自2020年全年到院接受陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的細(xì)菌性陰道炎患者中抽取若干患者進(jìn)行分析，對(duì)比了PCR檢查法、細(xì)菌培養(yǎng)法這兩種常用檢驗(yàn)方式對(duì)陰道細(xì)菌的檢出情況，內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究將2020年1月至2020年12月到院接受陰道細(xì)菌檢查的陰道炎患者作為分析對(duì)象，共236例，年齡30歲～42歲，平均年齡（36.39±5.17）歲，炎癥病程5個(gè)月～3年，平均病程（1.01±0.11）年，其中147例有生育史，89例無生育史。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者存在陰道分泌物、白帶等異常增多現(xiàn)象，同時(shí)伴有炎癥和外陰瘙癢等癥狀；②經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查、臨床癥狀分析等確診為細(xì)菌性陰道炎患者；③入組患者病案資料記錄完整，患者本人及其家屬對(duì)研究?jī)?nèi)容，所用資料、意義等知情，同意參與。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)期、妊娠期等特殊狀態(tài)患者；②樣本采集半個(gè)月內(nèi)有性生活者；③合并傳染病或者免疫系統(tǒng)類疾病者；④樣本采集半個(gè)月內(nèi)陰道用藥治療者。

1.2 方法

在患者陰道后穹窿位置進(jìn)行樣本采集，樣本為陰道分泌物，采集方式：取一次性無菌棉棒置入標(biāo)本采集處，輕輕旋轉(zhuǎn)，蘸取陰道分泌物適量，并使用無菌生理鹽水對(duì)所采集到的樣本進(jìn)行保存。針對(duì)所采集到的樣本以PCR檢查法、細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行檢驗(yàn)。PCR檢查法：取適量樣本使用生理鹽水1ml與之混合后裝入EP管，進(jìn)行離心處理，時(shí)間15min，轉(zhuǎn)速12000r/min，離心后將上清液去除，剩余樣本中添加細(xì)胞裂解液，放入金屬?。?00℃）進(jìn)行10min加熱處理，同樣12000r/min轉(zhuǎn)速下進(jìn)行10min離心，將上清液取下做DNA模板，使用AB17500熒光定量PCR儀器進(jìn)行檢驗(yàn)，以瓊脂凝膠電泳對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行觀察。細(xì)菌培養(yǎng)法：實(shí)施平板劃線分離法，取血平板，使用采集樣本的無菌拭子畫上第一區(qū)，然后以接種環(huán)分區(qū)劃線，使用二氧化碳敷箱對(duì)其進(jìn)行為期3天的培養(yǎng)，當(dāng)生成菌落之后，將其中呈現(xiàn)光滑滴狀灰色以及半透明狀態(tài)的細(xì)菌用于檢驗(yàn)。

1.3 觀察指標(biāo)

PCR檢查法：陽性標(biāo)準(zhǔn)，即具備整齊的條帶寬度邊緣，并且<1cm，背景無引物二聚體出現(xiàn)。細(xì)菌培養(yǎng)法：陽性標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基中典型菌落是目的菌落。統(tǒng)計(jì)并對(duì)比兩種不同檢驗(yàn)方式下，對(duì)患者陰道細(xì)菌檢出情況，細(xì)菌種類主要包括腸球菌、棒狀桿菌、戛納特桿菌等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

比較兩種檢驗(yàn)方式對(duì)患者陰道細(xì)菌的檢出情況：PCR檢查中腸球菌、棒狀桿菌、戛納特桿菌分別檢出37例、68例、99例，總陽性率為86.44%，細(xì)菌培養(yǎng)檢查中腸球菌、棒狀桿菌、戛納特桿菌分別檢出30例、39例、81例，總陽性率為63.56%，陽性檢出率比較，PCR檢查法顯著偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

在內(nèi)外因等綜合因素影響下，女性陰道常受到炎癥的困擾，其中最常見的為細(xì)菌性陰道炎，這是一種陰道菌群平衡遭到破壞后引發(fā)的混合感染疾病，主要集中發(fā)生在育齡婦女群體中，發(fā)生后最典型的癥狀即陰道分泌物多、稀薄且存在異味[4]。這種疾病往往是多種致病菌共同導(dǎo)致，其中造成陰道菌群失衡的關(guān)鍵因素，臨床中尚未有明確報(bào)道，僅提到與性生活頻繁、性伴侶多、陰道灌洗致pH值偏堿性等因素有一定聯(lián)系[5]。陰道正常狀態(tài)下的菌群中約95%為乳酸桿菌，其產(chǎn)生的乳酸是女性陰道環(huán)境維持酸性的關(guān)鍵，同時(shí)對(duì)其他病原菌可起到抑制生長(zhǎng)的作用，有助于促進(jìn)菌群平衡。因此在乳酸桿菌數(shù)量減少的情況下，陰道pH值會(huì)出現(xiàn)升高現(xiàn)象，進(jìn)而打破陰道正常微環(huán)境，為其他微生物提供更有利的生長(zhǎng)條件，誘發(fā)炎癥[6]。臨床指出，常見細(xì)菌性陰道炎相關(guān)誘因包括：（1）性伴侶數(shù)量>1，或頻繁更換新的性伴侶；（2）洗漱中，長(zhǎng)期使用清潔劑或者清水等對(duì)陰道進(jìn)行沖洗，容易使陰道微環(huán)境受損，促進(jìn)厭氧菌生長(zhǎng)；（3）性生活頻率高，會(huì)直接增加細(xì)菌進(jìn)入體內(nèi)的概率；（4）陰道中乳酸桿菌存在天然缺失現(xiàn)象，因而不足以維持正常酸性環(huán)境，給其他病原菌可乘之機(jī)；（5）有長(zhǎng)期抽煙習(xí)慣等不良生活習(xí)慣的女性，相較其他女性更容易發(fā)生細(xì)菌性陰道炎；（6）經(jīng)期進(jìn)行性生活、精神壓力大長(zhǎng)期處于緊繃狀態(tài)、宮內(nèi)節(jié)育器的使用、妊娠次數(shù)多、婦科手術(shù)史等均屬于細(xì)菌性陰道炎的常見誘因?；颊叱幍婪置谖镉兴黾油猓诩膊“l(fā)作時(shí)往往還伴有外陰燒灼疼痛、外陰瘙癢等不適癥狀，部分忽視病情發(fā)展的患者，在病情嚴(yán)重狀態(tài)下還可能繼發(fā)其他更嚴(yán)重的婦科病，例如盆腔感染、不孕不育等。因此，對(duì)于該疾病的治療，必須予以高度重視?？咕幬镏委熓窃摬∽钪饕氖侄危话闱闆r下，約80%左右患者在經(jīng)由口服用藥或陰道局部用藥后能夠達(dá)到治愈效果，但也有部分患者因重建陰道環(huán)境失敗、病原菌清除失敗等原因而在3個(gè)月內(nèi)發(fā)生復(fù)發(fā)。疾病早發(fā)現(xiàn)、早治療是輔助患者獲得良好預(yù)后的關(guān)鍵措施，而針對(duì)患者細(xì)菌感染情況進(jìn)行檢驗(yàn)，有助于提高治療措施的有效性。

PCR檢查法，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢驗(yàn)法，該檢驗(yàn)方式相關(guān)理論假設(shè)首次被提出在1983年，首次被發(fā)明在2年后，屬于簡(jiǎn)易DNA擴(kuò)增法，于2003年已經(jīng)發(fā)展到第三代，該檢驗(yàn)脊柱應(yīng)用中僅僅需要微量DNA便可實(shí)施PCR對(duì)比，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于法醫(yī)鑒定以及考古工作中，伴隨技術(shù)手段的成熟，醫(yī)學(xué)臨床也逐漸引進(jìn)該技術(shù)。有研究認(rèn)為PCR檢查法在部分疾病檢驗(yàn)中靈敏度有限，因而實(shí)際應(yīng)用價(jià)值受到限制。細(xì)菌培養(yǎng)法，細(xì)菌性疾病的常用檢驗(yàn)手段，但是在對(duì)樣本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，不僅需要耗費(fèi)較多的時(shí)間，而且很可能出現(xiàn)樣本污染的情況，該檢驗(yàn)方式的應(yīng)用對(duì)實(shí)驗(yàn)室配置有更高的要求，在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)中推廣性較差。

本研究中共抽取236例細(xì)菌性陰道炎患者，對(duì)其陰道采集到樣本開展檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，PCR檢查中腸球菌、棒狀桿菌、戛納特桿菌分別檢出37例、68例、99例，總陽性率為86.44%，細(xì)菌培養(yǎng)檢查中腸球菌、棒狀桿菌、戛納特桿菌分別檢出30例、39例、81例，總陽性率為63.56%，陽性檢出率比較，PCR檢查法顯著偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示使用PCR檢查法可以更準(zhǔn)確地檢出陰道細(xì)菌感染情況，為后續(xù)治療方式的選擇提供準(zhǔn)確依據(jù)。有研究總結(jié)PCR檢查法的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)有：（1）檢驗(yàn)相關(guān)操作簡(jiǎn)單，檢驗(yàn)人員容易上手；（2）檢驗(yàn)總耗時(shí)較短，能夠較快速的獲得檢驗(yàn)結(jié)果，有助于疾病早發(fā)現(xiàn)、早治療，避免疾病進(jìn)一步惡化，加重患者生理、心理、經(jīng)濟(jì)等方面的負(fù)擔(dān)；（3）對(duì)腸球菌、棒狀桿菌、戛納特桿菌等有較高的靈敏度。

王太林等[7]針對(duì)若干細(xì)菌性陰道炎患者臨床樣本分別開展了細(xì)菌培養(yǎng)檢驗(yàn)和PCR檢驗(yàn)，細(xì)菌檢出陽性率分別為57.65%、90.59%，提示PCR檢驗(yàn)對(duì)該疾病患者細(xì)菌感染狀況檢出率更高，更有利于醫(yī)生掌握病情。吳斌等[8]研究報(bào)道中針對(duì)陰道疾病患者的臨床樣本分別開展了3項(xiàng)檢驗(yàn)，包括革蘭染色法、PCR法、細(xì)菌培養(yǎng)法，其中革蘭染色法對(duì)樣本中細(xì)菌的檢出率明顯低于另外兩種檢驗(yàn)法，而與本文結(jié)果不同時(shí)，該研究中提出PCR法、細(xì)菌培養(yǎng)法對(duì)樣本中細(xì)菌檢出率差異較小，但基于對(duì)檢驗(yàn)工作時(shí)效性、推廣性等考慮，應(yīng)用PCR法的優(yōu)勢(shì)明顯更大。結(jié)合上述研究結(jié)論與本文研究結(jié)果，我們認(rèn)為，針對(duì)陰道疾病患者的感染問題，通過PCR法可以更準(zhǔn)確地掌握其細(xì)菌感染情況，從而為陰道炎治療方案的制定提供強(qiáng)有力的參考依據(jù)。

總而言之，細(xì)菌性陰道炎嚴(yán)重困擾女性的健康與生活，針對(duì)患者細(xì)菌感染情況進(jìn)行準(zhǔn)確的檢驗(yàn)，對(duì)治療工作的展開意義重大，是避免繼發(fā)盆腔感染、不孕不育等嚴(yán)重癥狀的關(guān)鍵，PCR檢查法、細(xì)菌培養(yǎng)法作為兩種常用陰道細(xì)菌檢查手段，對(duì)細(xì)菌和細(xì)菌種類的判斷均有一定幫助，而其中PCR檢查法具有更高的應(yīng)用價(jià)值，不僅時(shí)效性更佳，而且在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)更容易推廣，優(yōu)勢(shì)明顯。

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