HPLC法測(cè)定尿素維E乳膏中的尿素含量

廖志剛 柴將紅 余良鐘 潘燕婷

摘要 目的：利用HPLC法測(cè)定尿素維E乳膏中的尿素含量。方法：色譜柱為Sepax HP-Silica（4.6×250mm， 5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水（97.5：2.5），采用等度洗脫，流速為1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為195nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣體積為10μl。結(jié)果：尿素在0.099064mg/ml～0.792512mg/ml濃度范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系（R2 =0.9999）。尿素回收率為100.03%～100.97%。結(jié)論：該方法專屬性好，靈敏度高，定量準(zhǔn)確，可用于尿素維E乳膏中尿素含量測(cè)定。

【中圖分類號(hào)】R453 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2026-5328（2021）05-105-02

Abstract Objective： To determine the urea content of Urea vitamin E Cream? by HPLC. Methods：The determination was performed on Sepax HP-Silica column （4.6×250mm， 5μm） with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% formic acid water （97.5：2.5）. The flow rate was 1 mL /min. The detection wavelength was set at 195nm. Results： Urea showed a good linear relationship in the concentration range of 0.099064mg/ mL ～0.792512mg/ mL （R2 =0.9999）. The urea recovery was 100.03%-100.97%.Conclusions：The method has good specificity， high sensitivity and accurate quantification， and can be used for the determination of urea content in Urea Vitamin E Cream.

尿素維E乳膏是皮膚外用制劑，臨床用于手、足皸裂，對(duì)角化型手足癬引起的皸裂也有效[1]。在八十年代初進(jìn)入市場(chǎng)以來(lái)，尿素維E乳膏因具有起效迅速、療效確切等優(yōu)點(diǎn)，長(zhǎng)期使用無(wú)毒副作用，安全可靠，深受廣大患者的青睞，已成為廣泛使用的皮膚科藥品之一。尿素維E乳膏是一種復(fù)方制劑，其有效成分為尿素（15%）和維生素E（1%）。在《中國(guó)藥典》2020年版二部[2]方法測(cè)定中有關(guān)尿素含量的測(cè)定方法有薄層色譜法和紫外分光光度法，文獻(xiàn)中也多是紫外分光光度法的測(cè)定尿素含量[3-5]，但紫外分光光度法準(zhǔn)確度不高，測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性差，因此本方法參照USP42尿素、膠囊、口服液等標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合產(chǎn)品本身特點(diǎn)而建立專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便的高效液相色譜（HPLC）法。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Ultimate U3000型高效液相色譜儀，包括自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外分光廣度檢測(cè)器、Chromeleon6.8軟件（美國(guó)Thermo Fisher公司）;KQ3200型超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試藥

尿素維E乳膏（廣東華潤(rùn)順?lè)逅帢I(yè)有限公司，批號(hào)：20190002、20190003、20190004，規(guī)格：25克：尿素3.75克與維生素E 0.25克）;尿素對(duì)照品（批號(hào)：100288-201302，純度：100.0%），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱是Sepax HP-Silica柱（4.6×250mm， 5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水（97.5：2.5），以乙腈-水（9：1）為溶劑，采用等度洗脫，流速為1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為195nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣體積為10μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液

取尿素對(duì)照品25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加溶劑適量超聲使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 供試品溶液

取本品適量（約相當(dāng)于尿素25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加溶劑適量，置60-70℃水浴中加熱振搖，使尿素溶解，放冷至室溫，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻30min以上，取出迅速濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液放至室溫即得。

2.2.3陰性樣品溶液

稱取尿素維E乳膏不含尿素的陰性樣品0.25g，精密稱定，置50ml量瓶中，加溶劑適量，置60-70℃水浴中加熱振搖，使尿素溶解，放冷至室溫，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻30min以上，取出迅速濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液放至室溫即得。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，主峰峰面積的RSD為0.18%，拖尾因子約為0.91，理論板數(shù)按尿素峰計(jì)算大于4000，系統(tǒng)適應(yīng)性良好。

2.4 線性關(guān)系考察

取尿素對(duì)照品約500mg，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液各1ml、2ml、3ml、5ml、6ml、8ml，置50ml容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，分別作為待測(cè)溶液。取待測(cè)溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為X軸，峰面積為Y軸，作線性回歸。尿素的線性方程為：y = 52.233x + 0.1558，r=0.9999，線性考察范圍為：99.064～792.512μg/ml。

2.5 精密度試驗(yàn)

2.5.1 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品適量（約相當(dāng)于尿素25mg），平行稱取6份，按尿素含量測(cè)定方法操作，測(cè)得含量為100.8%，RSD為0.31%，說(shuō)明方法重復(fù)性良好。

2.5.2 中間精密度

與重復(fù)性試驗(yàn)同法操作，在不同時(shí)間，用不同儀器測(cè)定，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)人員測(cè)定的含量平均值為101.1%，RSD為0.56%，說(shuō)明方法中間精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液和對(duì)照品溶液于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20h后，各精密量取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖。供試品溶液和對(duì)照品溶液峰面積的RSD分別為0.45%和0.72%，溶液穩(wěn)定性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

按照處方稱取陰性樣品9份，置50ml容量瓶中，分別精密量取尿素對(duì)照品儲(chǔ)備液（約5mg/ml）各4ml、5ml、6ml，加溶劑適量，在60-70℃水浴加熱使尿素溶解，放冷，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻30min以上，取出迅速濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液放至室溫即得高、中、低三個(gè)濃度各三份溶液，分別按樣品含量測(cè)定方法操作，計(jì)算回收率，結(jié)果尿素的平均回收率為100.6%（RSD為0.26%）。

2.8樣品含量測(cè)定

對(duì)3批工藝驗(yàn)證批樣品進(jìn)行尿素含量檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論（主要講下方法摸索點(diǎn)）

以往常用的尿素檢測(cè)方法或操作步驟煩瑣，或?qū)傩圆?，結(jié)果往往不夠理想。隨著液相色譜技術(shù)的發(fā)展和先進(jìn)儀器設(shè)備的引入，以及近年來(lái)先進(jìn)色譜理論指導(dǎo)，本實(shí)驗(yàn)嘗試采用色譜柱為Sepax HP-Silica（4.6×250mm， 5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水（97.5：2.5），采用等度洗脫，對(duì)尿素進(jìn)行檢測(cè)分析。經(jīng)驗(yàn)證，本方法靈敏度高、定量準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可用于尿素維e乳膏中尿素含量的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

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[2]國(guó)家藥典委員會(huì)，中華人民共和國(guó)藥典（ 二部） [M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2020： 652.

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