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    高效液相色譜快速測(cè)定玉米中黃曲霉毒素方法研究

    2021-09-10 07:22:44李瑾李聰
    中國(guó)食品 2021年9期
    關(guān)鍵詞:黃曲霉色譜法毒素

    李瑾 李聰

    黃曲霉毒素是寄生曲霉、模式曲酶以及黃曲霉在一定溫度條件下形成的真菌毒素,其對(duì)人體有較強(qiáng)的致癌性、致病性,同時(shí)也是嚴(yán)重的真菌毒素,B1、B2、G1、G2是污染糧食的重要黃曲霉毒素成分。根據(jù)我國(guó)有關(guān)規(guī)定,玉米、玉米面和玉米制品中,AFB1含量最高為20ug/kg。當(dāng)前,對(duì)于黃曲霉毒素的檢測(cè)方法包括薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、膠體金試紙條法、液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法等,但這些方法都各有優(yōu)缺點(diǎn)。本研究結(jié)合免疫親和凈化,能夠基于高效液相色譜分離技術(shù),構(gòu)建微進(jìn)量小、分離度較高、無(wú)需衍生的快速黃曲霉毒素定量、定性分析法。

    一、材料與方法

    1.儀器與材料。高效液相色譜儀,日本島津生產(chǎn)的NexeraUHPLC L-3a熒光檢測(cè)器;黃曲霉毒素免疫親和柱;玻璃纖維濾紙;0.22um有機(jī)濾膜;6位泵流操作架;電子分析天平;氮吹儀;超純水機(jī);黃曲霉毒素樣品標(biāo)準(zhǔn)品;色譜純級(jí)別的甲醇溶液。

    2.設(shè)置分析條件。本研究采用的色譜柱為C18柱。流動(dòng)相為45:55,甲醇水溶液流速設(shè)置為每分鐘0.2mL,進(jìn)樣量為2uL,柱溫設(shè)置為30℃,激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為360nm和440nm。

    3.樣品制備。首先,配置標(biāo)準(zhǔn)溶液。將黃曲霉毒素混標(biāo)分別配置為B1濃度:2.0、10.0、5.0、20.0、50.0ng/mL,B2和G2的濃度為:0.48、1.20、2.40、4.80、12.00ng/mL,G1的濃度為:1.12、2.80、5.6、11.2、28ng/mL。

    二、研究結(jié)果

    下圖為黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2的保留時(shí)間,其分別為4.003分鐘、3.176分鐘、2.533分鐘、2.052分鐘,所有峰走完后全程需5分鐘。

    按照液相色譜法流動(dòng)相中甲醇和水的比例為45:55、流速為0.8-1mL/min、出峰時(shí)間為15分鐘,檢測(cè)一個(gè)樣品需消耗色譜級(jí)甲醇5.4-6.75mL。而采用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)時(shí),甲醇使用體積為0.45mL,相比國(guó)標(biāo)方法可縮短檢測(cè)時(shí)間,減少有機(jī)溶劑的使用。

    根據(jù)研究可以發(fā)現(xiàn),在高效液相色譜中進(jìn)行4種毒素檢測(cè),其具有良好的線性關(guān)系,并且相關(guān)系數(shù)為0.9997,是符合樣品定量要求的。結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)進(jìn)行儀器靈敏度的計(jì)算,通過(guò)液相色譜工作站進(jìn)行信噪比、儀器檢出限、定量限測(cè)定,如下表所示。

    根據(jù)國(guó)標(biāo)中黃曲霉毒素測(cè)定,采用免疫親和凈化的方式,使用普通HPLC分離柱后,碘溶液衍生熒光檢測(cè)玉米中黃曲霉毒素,其AFB1檢出限為100ug/kg。而本研究采用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)時(shí),無(wú)需衍生,并且靈敏度可提高兩倍,其余黃曲霉毒素靈敏度也顯著提高。按照上述方法進(jìn)行空白樣品加標(biāo),如下圖所示,為玉米樣品的加標(biāo)色譜圖。根據(jù)該結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),加標(biāo)實(shí)驗(yàn)回收率達(dá)93.9%-104%,是符合國(guó)標(biāo)中玉米樣品回收率80%-120%要求的。

    總之,本文構(gòu)建了超高效液相色譜測(cè)定玉米中黃曲霉毒素的方法,通過(guò)研究發(fā)現(xiàn),本研究具有良好的線性,且相關(guān)系數(shù)為0.9997,劑量為UL,樣品加標(biāo)回收率達(dá)93.9%-104.4%,相比普通液相色譜法來(lái)說(shuō),無(wú)需經(jīng)過(guò)衍生處理,能夠節(jié)約檢測(cè)的時(shí)間,減少有機(jī)溶劑的使用量,操作相對(duì)簡(jiǎn)單、靈敏度較高,可用于糧食中黃曲霉毒素的快速測(cè)定。

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