臨淄地區(qū)孕期女性耳聾基因篩查及耳聾基因出生缺陷干預(yù)

王紅玲 宋麗 王雪超 崔玉晗 趙秀美 王盛

摘要：目的對(duì)臨淄地區(qū)孕期女性進(jìn)行遺傳性耳聾基因篩查，分析耳聾基因突變類型、突變率，為耳聾基因攜帶孕期女性提供遺傳咨詢以避免聽力患兒的出生。方法采集302例孕期女性外周血血斑，提取基因組DNA，使用高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)18個(gè)耳聾基因的100個(gè)位點(diǎn)。結(jié)果本次篩查共發(fā)現(xiàn)24例耳聾基因突變，突變攜帶率為7.95%。其中單基因雜合突變?yōu)?3例，GJB2基因突變攜帶者12例，攜帶率3.97%;SLC26A4基因突變攜帶者11例，攜帶率3.64%;另有SLC26A4：IVS7-2A>G純合突變1例。結(jié)論臨淄地區(qū)孕期女性耳聾基因突變率較高，應(yīng)積極開展檢測(cè)以降低聽障兒童的出生率。

關(guān)鍵詞：孕期女性;耳聾基因;產(chǎn)前;高通量測(cè)序

遺傳性耳聾是指由于基因和染色體異常所致的耳聾，該疾病是由父母的遺傳物質(zhì)（包括染色體及位于其中的基因）發(fā)生了改變并傳給后代引起的，是人類最常見的感覺神經(jīng)系統(tǒng)缺陷，不論父母方的單方或者雙方是耳聾患者還是健康攜帶者，耳聾基因都會(huì)通過父母向子女遺傳。聽力表現(xiàn)正常的夫婦如果攜帶耳聾突變基因，也面臨生育聾兒的風(fēng)險(xiǎn)，尤其是夫妻雙方攜帶同一突變基因風(fēng)險(xiǎn)更大。我院產(chǎn)前遺傳性耳聾基因篩查，在知情同意原則下，對(duì)孕期或者有生育意愿的女性采用高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)孕期女性的中國(guó)人群遺傳性耳聾緊密相關(guān)的18個(gè)基因的100個(gè)位點(diǎn)（見表1），全面、快速分析耳聾基因突變情況，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果對(duì)其進(jìn)行優(yōu)生遺傳咨詢及生育指導(dǎo)，必要時(shí)進(jìn)行產(chǎn)前診斷，避免這些家庭生育耳聾后代。

1.對(duì)象與方法

1.1對(duì)象

選擇2018年4月～2019年8月在臨淄區(qū)人民醫(yī)院就診并自愿接受耳聾基因檢測(cè)的302例孕期女性為研究對(duì)象，回顧性分析耳聾基因突變情況。該研究通過了醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并獲得孕期女性或家屬的知情同意。

1.2方法

采集孕期女性外周血，制成≥8mm 的干血斑，于4℃保存。采用MagPure Blood DNA LQ Kit （Magen）提取血片中的模板基因組DNA并利用Qubit熒光計(jì)（Invitrogen）進(jìn)行定量。采用引物-特異性標(biāo)簽序列（博奧木華基因科技有限公司）進(jìn)行多重PCR技術(shù)構(gòu)建文庫(kù)并定量，利用One Touch2 自動(dòng)化乳液PCR儀（Life Technology）擴(kuò)增測(cè)序模板并使用ES磁珠純化儀進(jìn)行富集，采用Ion PI Hi-Q Sequencing 200 Kit（Life Technology）上機(jī)測(cè)序，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析[1]。BioelectronSeq 4000高通量測(cè)序儀購(gòu)于北京博奧生物有限公司。對(duì)于陽性位點(diǎn)再使用Sanger測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證，分析數(shù)據(jù)打印報(bào)告。另外，對(duì)于雜合或純合突變的孕期女性，再采集其對(duì)象的血斑進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)，檢測(cè)是否同一位點(diǎn)是否也有突變。

2.結(jié)果

2.1孕期女性耳聾基因篩查結(jié)果分析

302例受檢孕期女性中，共檢出耳聾基因異常者24例，突變攜帶率為7.95%。其中單基因雜合突變?yōu)?3例，GJB2基因突變攜帶者12例，攜帶率3.97%;SLC26A4基因突變攜帶者11例，攜帶率3.64%;另有SLC26A4：IVS7-2A>G純合突變1例。見表2。

2.2 兩個(gè)特殊病例結(jié)果分析

本次篩查出SLC26A4：IVS7-2A>G純合突變1例，該孕期女性有聽力障礙，否認(rèn)家族遺傳史，采集其對(duì)象的血斑進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)，SLC26A4基因不存在突變，故不需要做產(chǎn)前診斷，該孕婦孩子出生后后經(jīng)耳聾基因檢測(cè)SLC26A4：IVS7-2A>G為雜合突變。另外篩查出SLC26A4：c.1174A>T雜合突變一例，采集其對(duì)象的血斑進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)出SLC26A4：c.2168A>G雜合突變，經(jīng)遺傳咨詢指導(dǎo)，此夫婦堅(jiān)持不做產(chǎn)前診斷，孩子出生后經(jīng)耳聾基因檢測(cè)，SLC26A4：c.1174A>T、c.2168A>G兩位點(diǎn)均為雜合突變。耳聾突變位點(diǎn)測(cè)序結(jié)果見圖1。

3.討論

研究發(fā)現(xiàn)，引起耳聾的主要原因有遺傳因素（約占60%）和環(huán)境因素，在所有遺傳性耳聾中，約70%為非綜合征型耳聾，其余30%為綜合征型耳聾，即除耳聾外還伴有其他相關(guān)器官或系統(tǒng)疾病。2017年7月份臨淄地區(qū)開展遺傳性耳聾基因檢測(cè)，從受檢者血液、血斑等樣本提取DNA，采用高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)遺傳性耳聾相關(guān)的18個(gè)基因100個(gè)位點(diǎn)。檢測(cè)內(nèi)容包括先天性耳聾、遲發(fā)型耳聾、藥物性耳聾等類型，是第一時(shí)間防聾控聾的最佳選擇。

為了更有效的發(fā)揮遺傳性耳聾基因篩查臨床作用，完善遺傳性耳聾的一級(jí)預(yù)防與二級(jí)預(yù)防體系，全面覆蓋遺傳性耳聾發(fā)生的可能性，最大限度的減少臨淄地區(qū)的新生兒缺陷發(fā)生率，讓聽力障礙告別每一個(gè)家庭，我們于2018年4月份開展了孕期女性遺傳性耳聾基因篩查。

綜上，利用高通量測(cè)序技術(shù)篩查臨淄地區(qū)孕期女性耳聾基因突變，檢測(cè)位點(diǎn)多，檢出比率較高，應(yīng)積極開展產(chǎn)前耳聾基因篩查，對(duì)有效降低聽力缺陷患兒的出生率。另外，高通量測(cè)序技術(shù)以其全面、快速、準(zhǔn)確、高通量的特點(diǎn)，在耳聾基因檢測(cè)方面會(huì)具有更廣闊的前景，該地區(qū)數(shù)據(jù)將會(huì)為全國(guó)其他地區(qū)產(chǎn)前耳聾基因篩查提供參考依據(jù)。

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