一起金黃色葡萄球菌食物中毒的病原學(xué)分析

唐燕

摘 要：目的：對食物中毒中所產(chǎn)生的致病菌進(jìn)行檢測。方法：根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，使用增菌培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、顯色培養(yǎng)基和細(xì)菌生化鑒定系統(tǒng)分離和鑒定致病菌。結(jié)果：3份樣均檢出金黃色葡萄球菌，其中符合鑒定結(jié)果的概率為99%。結(jié)論：引起食物中毒的致病菌為金黃色葡萄球菌。

關(guān)鍵詞：食物中毒;Baird-Parker瓊脂平板;金黃色葡萄球菌

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）屬于革蘭氏陽性菌，是常見的食源性致病菌，在自然界中廣泛分布，通過空氣及接觸等傳播，可對食品造成污染[1]，在條件適宜的情況下，會產(chǎn)生腸毒素，導(dǎo)致多種毒性蛋白的產(chǎn)生，誘發(fā)食物中毒及金黃色葡萄球菌類毒血癥病癥。金黃色葡萄球菌多存在于環(huán)境中以及人與動物的皮膚粘膜上，正常人的帶菌率為30%～50%，人手上有14%～44%的帶菌率。實驗室研究中，開展食物中毒樣本的病原菌檢驗已成為公共衛(wèi)生問題的重要內(nèi)容。本實驗采用Baird-Parker瓊脂平板和VITEK2全自動細(xì)菌生化鑒定儀相結(jié)合，開展病原菌病原學(xué)檢驗，可作為傳染源控制及致病菌控制的依據(jù)

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基與試劑

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC），緩沖蛋白胨水（BPW），7.5%NaCl肉湯，志賀氏菌增菌肉湯，科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、Baird-Parker瓊脂平板、腦心浸出液肉湯、凍干血漿、XLD培養(yǎng)基、血瓊脂平板、HE瓊脂，北京路橋技術(shù)有限公司;GP革蘭氏陽性細(xì)菌鑒定卡，購自美國bioMerieux.Ine;以上所用試劑均在有效期內(nèi)[2]。

1.1.2 檢驗儀器

恒溫隔水式培養(yǎng)箱（型號為HP-9270）;全自動細(xì)菌生化鑒定儀器（型號為VITEK2）;生物安全柜（型號為HFsafe-1200）。

1.2 菌株分離與鑒定

沙門氏菌、志賀氏菌及金黃色葡萄球菌的檢測主要根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗》（GB 4789.4—2016）、《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》（GB 4789.10—2016）及《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 志賀氏菌檢驗》（GB 4789.5—2012），應(yīng)用VITEK2全自動細(xì)菌生化鑒定儀開展細(xì)菌生化鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 流行病學(xué)調(diào)查

迷客夏圓融二店是一家飲品店，2020年3月17日某家單位的10名員工在食用了迷客夏的飲品后相繼出現(xiàn)嘔吐、腹瀉等癥狀。首發(fā)病例于3月17日13：40首次出現(xiàn)惡心、嘔吐（3次）、腹痛、腹瀉（3次）。該病例于17日14：40到九龍醫(yī)院就診。余9名病例的主要臨床表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉和發(fā)熱等。經(jīng)抗菌素和輸液治療，現(xiàn)已轉(zhuǎn)歸良好。在中心接報完成后，開展現(xiàn)場調(diào)研，并進(jìn)行采樣干預(yù)，采集3種口味的朵朵云樣品送檢。

2.2 分離與增菌培養(yǎng)

3份樣品稱量后，分別添加至緩沖蛋白胨水（BPW）[3]，7.5%NaCl及志賀菌增菌肉湯中，均質(zhì)，于36 ℃培養(yǎng)18 h;將完成增菌后的上述樣品，分別接種到科瑪嘉沙門氏菌顯色平板、Baird-Parker瓊脂平板、血瓊脂平板、HE瓊脂平板和XLD瓊脂平板，于36 ℃培養(yǎng)24 h。結(jié)果顯示，血瓊脂平板上可見金黃色、圓形、不透明的可疑金黃色葡萄球菌菌落，Baird-Parker瓊脂平板上可見圓形、光滑、凸起、濕潤、直徑為2 mm的可疑金黃色葡萄球菌菌落。在初分離培養(yǎng)中，由于樣品中存在較少的菌量，會導(dǎo)致遺漏問題的產(chǎn)生，因此需要應(yīng)用增菌培養(yǎng)物開展再分離培養(yǎng)。在血瓊脂平板上，3份樣品均呈現(xiàn)金黃色，形狀為圓形，不透明，表明光滑，周圍部位存在溶血圈的可疑菌落生長。在Baird-Parker瓊脂平板上有圓形，光滑度較高，濕潤度較高，凸起，直徑為2 mm，顏色為灰色，邊緣為淡色，周圍存在渾濁帶，外層部位存在透明帶的可疑菌落生長。其余平板均無可疑菌落生長。

2.3 純培養(yǎng)

在Baird-Parker瓊脂平板上挑取單個菌落分純在血瓊脂平板上，并挑選血瓊脂平板的可疑單菌落，置36 ℃，培養(yǎng)24 h。

2.4 初步鑒定

涂片鏡檢：3份樣品的鏡檢結(jié)果均為革蘭氏陽性球菌，以葡萄球形狀排列，無芽孢，無莢膜。

2.5 血漿凝固酶試驗鑒別

在血瓊脂平板上挑選單個菌落，轉(zhuǎn)接至5 mL腦心浸出液培養(yǎng)基試管中，于36 ℃培養(yǎng)24 h。吸取0.5 mL無菌生理鹽水到凍干血漿西林瓶中，搖勻，再加入腦心浸出液培養(yǎng)物0.3 mL，混合均勻后于36 ℃培養(yǎng)，每隔0.5 h觀察1次，

1 h后出現(xiàn)凝固現(xiàn)象，則為血漿凝固酶陽性。在血瓊脂平板上進(jìn)行純培養(yǎng)物的挑選，用0.45%氯化鈉液制備成 0.68麥?zhǔn)蠞舛鹊木鷳乙?，接種GP革蘭氏陽性細(xì)菌鑒定卡，生化鑒定應(yīng)用VITEK2全自動細(xì)菌生化鑒定儀，鑒定結(jié)果為金黃色葡萄球菌，在3份樣品中，金黃色葡萄球菌均存在一致性的生化結(jié)果。

3 結(jié)語

金黃色葡萄球菌腸毒素可耐受100 ℃煮沸30 min而不被破壞，并能抵抗胃腸道中蛋白酶的水解作用。若人們食用了金黃色葡萄球菌所污染的食物，可引起腹瀉及嘔吐等問題，誘發(fā)急性胃腸炎[4]。據(jù)鄭艷敏等報道，2014—2018年蘇州市217次食源性疾病暴發(fā)事件中，7.37%為金黃色葡萄球菌誘發(fā)可導(dǎo)致以嘔吐和腹瀉為主的急性胃腸炎癥狀[5]。本次食物中毒事件中極有可能存在食品間交叉污染的情況，應(yīng)當(dāng)予以重視，并對本地區(qū)的食品生產(chǎn)經(jīng)營者加以引導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)

[1]劉保光，謝苗，董穎，等.金黃色葡萄球菌研究現(xiàn)狀[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2021，42（4）：128-130.

[2]馬敏.一起金黃色葡萄球菌腸毒素食物中毒調(diào)查分析[J].河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2020，31（12）：931-933.

[3]鄭艷敏，滕臣剛，張夢寒，等.2014—2018年蘇州市食源性疾病暴發(fā)事件流行特征分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2020，47（2）：215-218.

[4]鄭劍，周偉艷，胡丹標(biāo)，等.一起金黃色葡萄球菌食物中毒檢測與分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2016，26（23）：3464-3466.

[5]仇廣翠，孫明忠，金浩.220株金黃色葡萄球菌的臨床分布特點及耐藥性分析[J].中國實驗診斷學(xué)，2016，20（2）：269-271.