UPLC-MS／MS法測(cè)定化妝品中丙烯酰胺的不確定度評(píng)定

曹海榮，薛曉康，李曉宇

（1.上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué) 化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，上海 201418；2.上?；ぱ芯吭河邢薰?，上海 200062）

1 引言

丙烯酰胺是一種長(zhǎng)期接觸會(huì)導(dǎo)致人和動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)損傷并具有潛在的遺傳和生殖毒性的物質(zhì)［1～3］，國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）1994年對(duì)丙烯酰胺的致癌性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，將丙烯酰胺列為2A類(lèi)致癌物，即人類(lèi)可能致癌物［4］。丙烯酰胺合成的聚合物即聚丙烯酰胺在化妝品中具有多種用途，可用作穩(wěn)定劑、發(fā)泡劑、結(jié)合劑、增稠劑、成膜劑、抗靜電劑和頭發(fā)定型劑等［5］。聚合反應(yīng)不完全時(shí)，化妝品中就可能殘留有丙烯酰胺。此外，面膜產(chǎn)品中丙烯酰胺還可能來(lái)源于面膜紙［6］。我國(guó)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）將丙烯酰胺列為化妝品禁用組分，并公布了檢測(cè)方法［7］。

測(cè)量不確定度是對(duì)測(cè)量結(jié)果質(zhì)量的定量表征，其測(cè)量結(jié)果的可用性很大程度上取決于其不確定度的大?。?～12］。鄭麗敏［3］采用溴化衍生-氣相色譜法測(cè)定丙烯酰胺含量并進(jìn)行不確定度評(píng)定；林金美［4］采用高效色譜法測(cè)定紡織品中丙烯酰胺含量并進(jìn)行不確定度評(píng)定；陳東洋等［1］采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飲用水中丙烯酰胺含量并進(jìn)行不確定度評(píng)定；Basfar A A［13］采用核磁共振技術(shù)評(píng)價(jià)N-（異丁氧基甲基）丙烯酰胺凝膠劑量測(cè)量的不確定性。

為了保證化妝品中丙烯酰胺殘留量檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性，本文依據(jù)JJF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》［14］并參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定丙烯酰胺殘留量的相關(guān)內(nèi)容，建立數(shù)學(xué)模型，并對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)估，為評(píng)定測(cè)量方法和結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性提供了科學(xué)依據(jù)。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)采用的儀器為Acquity UPLC? H-CLASS超高效液相色譜-Xevo TQD MS三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（色譜柱為Waters Acquity UPLC? BEH C18色譜柱，1.7μm×2.1 mm×50 mm，美國(guó)Waters公司）；AL204-IC分析天平（d＝0.1 mg，瑞士梅特勒公司）；AB135-S／FACT分析天平（d＝0.01 mg，瑞士梅特勒公司）；KUDOS科導(dǎo)超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器公司）；Simplicity超純水純化系統(tǒng)（美國(guó)Millipore公司）。

實(shí)驗(yàn)采用的試劑為甲醇，乙腈，乙酸銨（色譜純，德國(guó)CNW Technologies公司）；丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度為99.34%）、氘代丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度為99.1%），其余試劑均為市售分析純或以上規(guī)格，均來(lái)自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 色譜條件

（1）色譜柱：Waters Acquity UPLC? BEH C18色譜柱（1.7μm×2.1 mm×50 mm）。

（2）流動(dòng)相：甲醇（A）和0.1%體積比的甲酸水溶液（B）梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?～1.5 min，A為30%；1.5～2.5 min，A由30%升至90%；2.5～3.0 min，A由90%降至30%，保持2 min。

（3）流速：0.3 mL／min。

（4）進(jìn)樣量：5μL。

（5）柱溫：25℃。

2.2.2 質(zhì)譜條件

（1）離子源：電噴霧離子源（ESI）；

（2）檢測(cè)模式：多反應(yīng)檢測(cè)模式；

（3）干燥氣流速：900 L·h－1；

（4）干燥氣溫度：600℃；

（5）毛細(xì)管電壓：0.30 kV；

（6）錐孔流速：50 L·h－1；

（7）丙烯酰胺、氘代丙烯酰胺的質(zhì)譜采集參數(shù)，見(jiàn)表1。

表1 丙烯酰胺、氘代丙烯酰胺的質(zhì)譜采集參數(shù)Tab.1 The acquisition parameters of mass spectrometry of acrylamide and acrylamide-d3

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制

取丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品25.00 mg（精確到0.000 1 g），置于50 mL容量瓶中，加乙腈溶液（1∶9）使溶解并定容至刻度，搖勻，得到質(zhì)量濃度為500 mg／L的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制

用乙腈溶液（1∶9）稀釋配制的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，制備濃度為100.0μg／L的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取100.0μg／L的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液50.0μL、200.0μL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、8.0 mL至6個(gè)10 mL容量瓶中，每個(gè)容量瓶再加入氘代丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1.0 mL，用乙腈溶液（1∶9）定容、搖勻，得到外標(biāo)為0.5μg／L、2.0μg／L、10.0μg／L、20.0μg／L、50.0μg／L、80.0μg／L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS／MS）法分析。

2.2.5 樣品處理

取0.2 g（精確到0.000 1 g）溶液置于10 mL玻璃試管中，加濃度為100.0 mg／L的內(nèi)標(biāo)溶液200μL，超聲提取30 s；然后加0.02 mol／L的醋酸銨水溶液0.15 mL，超聲提取30 s；再加2.0 mL乙腈（1∶9），超聲提取11 min；取上清液，氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)? mL色譜流動(dòng)相（甲醇）溶解，超聲提取6 min；經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后，濾液作為待測(cè)溶液，備用。

2.2.6 樣品檢測(cè)

用UPLC-MS／MS法分析標(biāo)準(zhǔn)溶液，以丙烯酰胺峰面積與氘代丙烯酰胺峰面積之比對(duì)丙烯酰胺濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測(cè)樣品用同樣的方法分析后，將樣品的峰面積比值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到待測(cè)溶液的濃度，最后計(jì)算得到樣品中丙烯酰胺的濃度。

2.3 儀器校準(zhǔn)證書(shū)

本實(shí)驗(yàn)中涉及的所有儀器均經(jīng)過(guò)蘇州市計(jì)量研究所計(jì)量并頒發(fā)校準(zhǔn)證書(shū)。所有的計(jì)量允許誤差均從此計(jì)量證書(shū)中獲得。

2.4 數(shù)學(xué)模型

根據(jù)樣品測(cè)試方法的過(guò)程，建立樣品中丙烯酰胺殘留量測(cè)定的不確定度評(píng)估數(shù)學(xué)模型為：

式中：X為樣品中丙烯酰胺的含量，mg／kg；C為待測(cè)樣品液中丙烯酰胺的濃度，μg／L；V為樣品液定容體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g。

2.5 測(cè)量不確定度的來(lái)源

結(jié)合數(shù)學(xué)模型和測(cè)試方法，對(duì)樣品中丙烯酰胺測(cè)定結(jié)果有影響的各種不確定度分量的來(lái)源進(jìn)行分析，由圖1可知具體引入的不確定度來(lái)源。由于本文采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)量樣品中丙烯酰胺含量，儀器波動(dòng)、內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液的配制不會(huì)引入不確定度。

圖1 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定化妝品中丙烯酰胺含量的不確定度來(lái)源Fig.1 Determination of uncertainty of acrylamide content in cosmetics by UPLC-MS／MS.

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 測(cè)量重復(fù)性引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（X）

在空白化妝品中添加丙烯酰胺、氘代丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到含丙烯酰胺為49.28μg／L的化妝品試樣，即陽(yáng)性樣品。在相同的條件下采用相同的方法平行測(cè)定6次，測(cè)試結(jié)果如表2所示。

表2 樣品中丙烯酰胺含量X的結(jié)果表Tab.2 The content of acrylamide in the sample

測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（X）由式（2）計(jì)算得到。

式中：n為測(cè)量次數(shù)；Xi為每次測(cè)量得到的丙烯酰胺含量；為n次測(cè)量的丙烯酰胺含量的平均值。

測(cè)量重復(fù)性引入的相對(duì)不確定度urel（X）由式（3）計(jì)算得到。

將表2中數(shù)據(jù)代入式（2）計(jì)算可得：

將u（X）計(jì)算值代入式（3）計(jì)算可得：

3.2 樣品稱(chēng)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（m）

儀器校準(zhǔn)證書(shū)表明天平最大允許誤差為0.000 1 g，按均勻分布，取0.200 5 g化妝品樣品引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（m）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（m）分別為：

3.3 樣品溶液定容引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（V）

用1 000μL移液槍取甲醇將試樣定容至2 mL，僅考慮體積引入的不確定度，由溫度引入的不確定度可以忽略。

校準(zhǔn)證書(shū)表明1 000μL移液槍的最大誤差為±1%，即0.01 mL，按均勻分布，樣品溶液定容過(guò)程中使用1次移液槍引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1（V）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1rel（V）分別為：

定容過(guò)程需使用2次移液槍?zhuān)瑒t樣品溶液定容引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

3.4 樣品溶液濃度測(cè)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C）

3.4.1 外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（CSTD）

（1）丙烯酰胺儲(chǔ)備液配制產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C1）

（a）標(biāo)樣丙烯酰胺純度引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（pSTD）

由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)可知，丙烯酰胺純度引入的擴(kuò)展不確定度uexp（pSTD）為0.32%，取包含因子k＝2，丙烯酰胺純度pSTD為99.34%，則由丙烯酰胺純度引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（pSTD）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（pSTD）分別為：

（b）標(biāo)樣丙烯酰胺稱(chēng)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（mSTD）

儀器校準(zhǔn)證書(shū)表明天平最大允許誤差為0.000 01 g，按均勻分布，稱(chēng)取0.024 84 g丙烯酰胺標(biāo)樣mSTD引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（mSTD）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（mSTD）分別為：

（c）標(biāo)準(zhǔn)丙烯酰胺儲(chǔ)備液定容體積引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（VSTD1）

用50 mL容量瓶將丙烯酰胺試液定容至50 mL，引入的不確定度包括體積、溫度變化以及估讀誤差。

儀器校準(zhǔn)證書(shū)表明50 mL容量瓶的最大允許誤差為0.05 mL，按均勻分布，標(biāo)準(zhǔn)丙烯酰胺儲(chǔ)備液定容過(guò)程中體積變化引入的不確定度u（VV，STD1）為：

校準(zhǔn)溫度為20℃，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為（20±5）℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.08×10－4℃－1，按均勻分布，標(biāo)準(zhǔn)丙烯酰胺儲(chǔ)備液定容過(guò)程中溫度變化引入的不確定度u（VT，STD1）為：

人眼觀測(cè)容量瓶刻度線引入的不確定度：人員讀數(shù)允許有0.01 ml誤差，假定其為三角分布［15～17］，則標(biāo)準(zhǔn)丙烯酰胺儲(chǔ)備液定容過(guò)程中估讀誤差引入的不確定度u（VR，STD1）為：

定容過(guò)程只需使用一次容量瓶，則標(biāo)準(zhǔn)丙烯酰胺儲(chǔ)備液定容引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（VSTD，1）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（VSTD，1）分別為：

則丙烯酰胺儲(chǔ)備液配制產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C1）為：

（2）丙烯酰胺儲(chǔ)備液稀釋產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C2）

用200μL的可調(diào)移液槍取20μL儲(chǔ)備液置于100 mL容量瓶中，用乙腈水溶液（1∶9）定容至刻度，搖勻，得到質(zhì)量濃度為98.565 1μg／L的稀釋后的丙烯酰胺儲(chǔ)備液標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。該過(guò)程產(chǎn)生的不確定度主要來(lái)源于移液槍和容量瓶。

（a）由移液槍引入的不確定度

按照均勻分布處理，由移液槍引入的不確定度僅考慮體積變化。校準(zhǔn)證書(shū)表明200μL的移液槍取20μL溶液允許的最大誤差為±4%，即8×10－4mL，按均勻分布，則丙烯酰胺儲(chǔ)備液稀釋過(guò)程中使用1次移液槍引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（V0.02，STD2）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（V0.02，STD2）分別為：

（b）由容量瓶引入的不確定度

由容量瓶引入的不確定度包括體積、溫度變化及估讀誤差。校準(zhǔn)證書(shū)表明100 mL容量瓶的最大允許誤差為0.1 mL，按均勻分布，則丙烯酰胺儲(chǔ)備液稀釋過(guò)程中體積變化引入的不確定度u（V100，STD2）為：

校準(zhǔn)溫度為20℃，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為（20±5）℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.08×10－4℃－1，按均勻分布，則標(biāo)準(zhǔn)丙烯酰胺儲(chǔ)備液稀釋過(guò)程中溫度變化引入的不確定度u（VT，STD2）為：

人員讀數(shù)允許有0.01ml誤差，假定其為三角分布［15］，則人眼觀測(cè)容量瓶刻度線引入的不確定度u（VE，STD2）為：

定容過(guò)程只需使用1次容量瓶，則標(biāo)準(zhǔn)丙烯酰胺儲(chǔ)備液稀釋引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（V′100，STD2）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（V100，STD2）分別為：

則由丙烯酰胺儲(chǔ)備液稀釋產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C2）為：

（3）丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制過(guò)程引入的不確定度urel（C3）

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程，取50μL、200μL、1 mL、2 mL、5 mL、8 mL各1次，10 mL容量瓶定容6次。按照前述的方法計(jì)算，由丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制過(guò)程引入的不確定度分量詳見(jiàn)表3。

表3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制過(guò)程中引入的不確定度Tab.3 The uncertainty introduced by the preparation of standard series solution

校準(zhǔn)證書(shū)表明10 mL的容量瓶的最大允許誤差為0.02 mL，按均勻分布，標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制過(guò)程中體積變化引入的不確定度u（V10，STD3）為：

校準(zhǔn)溫度為20℃，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為（20±5）℃，水的體積膨脹系數(shù)2.08×10－4℃－1，按均勻分布，則標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制過(guò)程中溫度變化引入的不確定度u（VT，STD3）為：

人員讀數(shù)允許有0.01 mL誤差，假定為三角分布［15］，則人眼觀測(cè)容量瓶刻度線引入的不確定度u（VR，STD3）為：

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制過(guò)程中需要使用6次10 mL的容量瓶，則由丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制過(guò)程引入的不確定度urel（C3）為：

則外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液丙烯酰胺配制引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（CSTD）為：

3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度urel（C4）

制備6個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度測(cè)定3次，以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度Ci為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液外標(biāo)峰面積（A1）與內(nèi)標(biāo)峰面積（A2）的比值A(chǔ)1／A2為縱坐標(biāo)，用最小二乘法擬合，獲得線性回歸方程y＝a×C＋b和線性相關(guān)系數(shù)r，列于表4中。方程中a＝1.09×10－4，b＝1.43×10－4，a為擬合曲線的斜率，b為擬合曲線的截距。

表4 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)表Tab.4 The data of Standard curve

線性回歸方程和線性相關(guān)系數(shù)分別為：

取1份陽(yáng)性樣品，進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)定，得到平均濃度為50.3μg／L，則擬合引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（C4）為：

式中：S為標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積殘差的標(biāo)準(zhǔn)差，按式（5）計(jì)算；a為擬合曲線的斜率；p為樣品測(cè)定總次數(shù)，p＝6；n為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液測(cè)定總次數(shù)，n＝18為n次標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的平均值，μg／L，按式（6）計(jì)算；C0，sample為陽(yáng)性樣品溶液中丙烯酰胺的平均濃度，μg／L，按式（7）計(jì)算；Ci，STD為標(biāo)準(zhǔn)溶液中丙烯酰胺的測(cè)定值，μg／L。

式中：b為擬合曲線的截距；yi，STD為標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積比A1／A2。

將參數(shù)代入式（5）～式（7）可分別求得：

從而得

標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C4）為：

3.4.3 內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（CIS）

由于內(nèi)標(biāo)溶液濃度不參與定量計(jì)算，所以?xún)?nèi)標(biāo)溶液配制不引入不確定度。僅考慮氘代丙烯酰胺溶液加入體積產(chǎn)生的不確定度。氘代丙烯酰胺溶液加入體積產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel（CIS）。用1 000μL移液槍加入內(nèi)標(biāo)，僅考慮體積引入的不確定度，由溫度引入的不確定度可以忽略。

校準(zhǔn)證書(shū)表明1 000μL移液槍的最大誤差為±1%，即0.01 mL，按均勻分布，則氘代丙烯酰胺溶液使用一次移液槍引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（VIS）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（VIS）分別為：

用1 000μL移液槍加入內(nèi)標(biāo)，需使用6次移液槍?zhuān)瑒t氘代丙烯酰胺溶液加入體積產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（CIS）為：

則樣品溶液濃度測(cè)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C）為：

3.5 回收率引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（R）

取0.2 g化妝品樣品，加入1 mL濃度為100.0μg／L的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)液，200μL濃度為100.0 mg／L氘代丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)液，定容至2mL，得到丙烯酰胺濃度為50.0μg／L的待測(cè)液，進(jìn)行回收試驗(yàn)。根據(jù)表5中6次添加回收率的測(cè)定結(jié)果，計(jì)算平均加標(biāo)回收率與標(biāo)準(zhǔn)偏差，從而計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（R）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（R），計(jì)算式分別為式（8）和式（9）。

式中：n為測(cè)量次數(shù)；Ri為每次測(cè)量的丙烯酰胺回收率為n次測(cè)量的丙烯酰胺回收率的平均值。

將表5中各參數(shù)代入式（8）可求得u（R）＝1.71%，從而：

表5 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.5 The result of recovery experiment

3.6 相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（w）及合成不確定度uc（w）

UPLC-MS／MS法測(cè)定化妝品中丙烯酰胺的相對(duì)不確定度分量見(jiàn)表6。

表6 各分量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Tab.6 The relative standard uncertainty of each component

相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（w）按式（10）計(jì)算。

將表6中參數(shù)代入式（10）可得：

合成不確定度u（w）按式（11）計(jì)算。

將已知參數(shù)代入式（11）可得：

3.7 擴(kuò)展不確定度U（w）及結(jié)果表示

根據(jù)JJF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》取95%的置信概率，包含因子k＝2，則丙烯酰胺含量的擴(kuò)展不確定度U（w）為：

UPLC-MS／MS法測(cè)定化妝品中丙烯酰胺含量的不確定結(jié)果，見(jiàn)表7。用UPLC-MS／MS法測(cè)定化妝品中丙烯酰胺的含量為X＝0.502±0.066 mg／kg（k＝2，置信區(qū)間p＝95%）。

表7 丙烯酰胺不確定度測(cè)定結(jié)果報(bào)告Tab.7 The result of uncertainty determination of acrylamide

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)化妝品中丙烯酰胺含量的不確定度評(píng)定，得出樣品中丙烯酰胺的含量為（0.502±0.066）mg／kg，k＝2，置信概率P＝95%。較全面地分析了UPLC-MS／MS法測(cè)定丙烯酰胺含量全過(guò)程不確定度的來(lái)源，并計(jì)算了各不確定度分量。分析表明，樣品溶液濃度測(cè)量和回收率是合成不確定度的主要來(lái)源；在樣品溶液濃度測(cè)量過(guò)程中由標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度所占比例較大。因此，在日常檢測(cè)中可優(yōu)化溶液配制的方法、處理全過(guò)程所使用的儀器、試劑、環(huán)境都必須達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求，不斷提高操作人員的熟練程度；以減小測(cè)量結(jié)果的不確定度，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。