不同疫苗組合對(duì)豬群生產(chǎn)性能影響的研究

杜琛，陸穎，速雪麗，柏家果，張勝斌，吳雨殊，曲雅新，羅期方，張寧，陳櫻，韋祖樟，黃偉堅(jiān)，歐陽(yáng)康*

(1. 廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530005；2. 廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)西江有限公司，廣西 貴港 537104)

豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae, Mhp)是引起豬支原體肺炎(MPS)和相關(guān)豬呼吸系統(tǒng)疾病綜合征(PRDC)的病原體[1]。該病在寒冷季節(jié)多發(fā)，一年四季均可發(fā)生，育肥豬是其主要感染群體，且Mhp能以氣溶膠為載體實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)距離的傳播[2]，這一特點(diǎn)大大增加了對(duì)Mhp進(jìn)行防控的難度。由Mhp引起的疾病多以氣喘為主要癥狀，主要病理變化為肺部對(duì)稱性肉變，尖葉、心葉和膈葉前緣均會(huì)發(fā)生肉樣病變以及蝦肉樣病變[3]，組織學(xué)變化主要以細(xì)支氣管管腔和肺泡腔內(nèi)細(xì)胞浸潤(rùn)為特征[4]。感染Mhp的豬通常表現(xiàn)為生長(zhǎng)受阻、飼料轉(zhuǎn)化率降低，且豬場(chǎng)會(huì)出現(xiàn)連續(xù)不斷發(fā)病的現(xiàn)象。此外，該病原還能造成免疫缺陷，從而誘發(fā)豬群產(chǎn)生多種疾病[5]。

豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus, PCV2)是一種無(wú)囊膜的單股環(huán)狀負(fù)鏈DNA病毒[6]，與PCV1共同屬于豬圓環(huán)病毒[7]。PCV2可使豬產(chǎn)生包括生殖疾病、神經(jīng)系統(tǒng)病變、腸炎、壞死性肺炎等在內(nèi)的多種疾病[8]，同時(shí)還會(huì)對(duì)豬群造成免疫抑制，降低豬群的抵抗力，使豬群更易受到其他病原體的侵害。

Mhp和PCV2在世界各國(guó)廣泛流行，都能引起豬產(chǎn)生嚴(yán)重的免疫抑制現(xiàn)象[9, 10]，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。而疫苗免疫則是防控這兩種病原最有效的方法之一，因此，本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)試A、B兩種Mhp疫苗和C、D、E、F四種PCV2疫苗不同組合對(duì)育肥豬所產(chǎn)生的不同效果，來為豬場(chǎng)篩選疫苗提供理論依據(jù)，為生豬養(yǎng)殖行業(yè)提供指導(dǎo)，同時(shí)為科學(xué)評(píng)判疫苗效果提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料方法

1.1 材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)場(chǎng)地

目前，廣西地區(qū)的生豬養(yǎng)殖模式一般為養(yǎng)殖戶與公司之間合作生產(chǎn)的規(guī)?；B(yǎng)殖，公司對(duì)各個(gè)養(yǎng)殖戶的基礎(chǔ)設(shè)施、飼養(yǎng)管理以及環(huán)境衛(wèi)生等方面進(jìn)行監(jiān)管，各個(gè)養(yǎng)殖戶間的養(yǎng)殖環(huán)境基本保持一致。

本研究對(duì)各個(gè)養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖環(huán)境、養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)以及養(yǎng)殖戶過往經(jīng)歷進(jìn)行了調(diào)查和篩選，選出8個(gè)效益好、成績(jī)穩(wěn)定的養(yǎng)殖戶，且根據(jù)雙盲試驗(yàn)的要求，未對(duì)養(yǎng)殖戶公開其所用疫苗的組合情況，保證除免疫不同疫苗外，其他條件一致。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)用豬來自廣西某公司的兩個(gè)不同豬場(chǎng)，均為杜長(zhǎng)大三元雜交商品肉豬。所選妊娠母豬的窩產(chǎn)活仔數(shù)在8頭以上，母豬胎次為2～6胎。然后篩選出初生重1.5 kg以上、21日齡斷奶體重達(dá)到6 kg以上健康仔豬作為實(shí)驗(yàn)用豬。豬場(chǎng)一選用仔豬2 009頭，豬場(chǎng)二選用仔豬1 470頭。

1.1.3實(shí)驗(yàn)疫苗

選用A、B兩種Mhp疫苗與C、D、E、F四種PCV2疫苗，詳細(xì)信息見表1。

表1 疫苗信息及免疫程序

1.2 方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)豬隨機(jī)分為8組，每組實(shí)驗(yàn)豬280～600頭。挑選養(yǎng)殖成績(jī)較好且較穩(wěn)定的養(yǎng)殖戶，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組對(duì)應(yīng)一個(gè)養(yǎng)殖戶。各組按廠家推薦的免疫程序進(jìn)行免疫，其他疫苗的免疫保持不變，按公司免疫程序統(tǒng)一執(zhí)行。

表2 各組疫苗組合情況及進(jìn)苗頭數(shù)對(duì)應(yīng)表

1.2.2數(shù)據(jù)收集

記錄各組飼料消耗情況，計(jì)算得到料肉比(FCR)；稱取21日齡斷奶和200日齡屠宰時(shí)各實(shí)驗(yàn)組的全群體重，并計(jì)算得出頭均日增重；記錄各組上市后所獲收益，計(jì)算得出頭均毛利；實(shí)驗(yàn)結(jié)束(200日齡)后計(jì)算出每組平均每頭豬所耗藥費(fèi)；每組隨機(jī)抽樣20頭豬，屠宰后進(jìn)行肺部評(píng)分；記錄不同疫苗組合的上市率與上市合格率。實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格做好數(shù)據(jù)記錄。

肺部評(píng)分系統(tǒng)采用Madec方法[11]，見表3。根據(jù)肺葉損傷面積比例劃分為5個(gè)等級(jí)，評(píng)分依次為0～4分。分別對(duì)肺部尖葉、心葉、膈葉和副葉七個(gè)肺葉進(jìn)行評(píng)分，每個(gè)肺葉的得分之和為所檢豬只的肺部評(píng)分，每頭豬的最高評(píng)分為28分。

表3 肺部評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.2.3權(quán)重系數(shù)

根據(jù)行業(yè)專家意見，如表4設(shè)定評(píng)價(jià)參數(shù)并賦予不同參數(shù)特定的權(quán)重系數(shù)。針對(duì)本實(shí)驗(yàn)的8組評(píng)價(jià)對(duì)象，每個(gè)參數(shù)排名第1位到第8位分別得分100、95、90、85、80、75、70、65，乘以各自所占系數(shù)，再相加得到各組評(píng)價(jià)對(duì)象的總分，以此作為最終的排名依據(jù)。

表4 參數(shù)與所占權(quán)重系數(shù)表

2 結(jié)果

2.1 各實(shí)驗(yàn)組料肉比數(shù)據(jù)分析

對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別所消耗的飼料量與各個(gè)實(shí)驗(yàn)組總的增重量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得出各組料肉比數(shù)據(jù)，結(jié)果見表5。由表中數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn)，第1組和第2組料肉比最低，兩組實(shí)驗(yàn)豬平均增重1 kg需要的飼料量分別為2.58 kg與2.57 kg，而第7組的實(shí)驗(yàn)豬平均增重1 kg需要的飼料量為2.85 kg，明顯高于其他實(shí)驗(yàn)組。

表5 各實(shí)驗(yàn)組的料肉比數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

2.2 各實(shí)驗(yàn)組頭均日增重?cái)?shù)據(jù)分析

對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)組21日齡斷奶和200日齡屠宰時(shí)的全群體重進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得出各組頭均日增重?cái)?shù)據(jù)，結(jié)果見表6。由表中數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn)，第5組和第6組平均每天增重0.72kg，略高于其他組。第7組平均每天增重0.65kg，明顯低于其他組。

表6 各實(shí)驗(yàn)組的頭均日增重?cái)?shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

2.3 頭均毛利

對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)組200日齡屠宰時(shí)所獲收益進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得出各組頭均毛利數(shù)據(jù)，結(jié)果見表7。由表中數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn)，第1組頭均毛利最高，為243.78元/頭；第3、5、6組頭均毛利分別為238.12元/頭、228.71元/頭和227.91元/頭，略低于第1組。第7組每頭豬的毛利僅為114.09元，與其他實(shí)驗(yàn)組相比，結(jié)果較差。

表7 各實(shí)驗(yàn)組的頭均毛利數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

2.4 肺部評(píng)分

8個(gè)實(shí)驗(yàn)組200日齡屠宰時(shí)每組隨機(jī)抽樣20頭，屠宰后進(jìn)行肺部評(píng)分，結(jié)果見表8。第1、2、3組肺部評(píng)分平均值分別為2.07分、2.29分和2.56分，處于較低水平；第3、4、5、8組稍高，第7組的肺部評(píng)分為6.35分，在所有實(shí)驗(yàn)組中為最高分。

表8 各實(shí)驗(yàn)組肺部評(píng)分分析結(jié)果

2.5 上市率、上市正品率和頭均藥費(fèi)

實(shí)驗(yàn)對(duì)不同疫苗組合的上市率以及上市正品率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)與分析，結(jié)果見表9。由表中數(shù)據(jù)可以看出，第5組、第6組和第8組上市率較高，分別為97.86%、96.79%和95.83%；第4組的上市率為89.98%，明顯低于其他組。而上市正品率最高的是第1組和第8組，都為100%，最低的是第2組和第7組，為98.05%和98.27。

對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)組200日齡屠宰時(shí)每組平均每頭豬所耗藥費(fèi)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，結(jié)果見表9。由表中數(shù)據(jù)可以看出，第1組和第2組的頭均藥費(fèi)最低，分別為51.42元和51.80元，最高的為第6組和第8組，分別為81.71元和79.84元。

表9 各組上市率、上市正品率和頭均藥費(fèi)統(tǒng)計(jì)表

2.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)排名

第1—4組免疫的是Mhp疫苗A，第5—8組為Mhp疫苗B。本次研究結(jié)果顯示免疫A疫苗的肉豬在料肉比、頭均藥費(fèi)、肺部評(píng)分、頭均毛利等方面分值均優(yōu)于免疫B疫苗的肉豬，免疫A疫苗的肉豬頭均日增重較均衡，但上市率不如免疫B疫苗的肉豬，總體來說，A疫苗的免疫效果優(yōu)于B疫苗。1組與5組，2組與6組，3組與7組，4組與8組分別免疫PCV2疫苗C、D、E和F，前4組中1組成績(jī)最好，后4組中第5組成績(jī)最好，說明PCV2疫苗C的免疫效果優(yōu)于其他PCV2疫苗。

綜上所述，本次實(shí)驗(yàn)不同疫苗組合免疫效果以第1組Mhp疫苗A和PCV2疫苗C組合為最佳，在全部8個(gè)實(shí)驗(yàn)組中，該組頭均日增重排第4位，料肉比排第2位，上市率排第5位，上市正品率、肺部評(píng)分、頭均藥費(fèi)以及頭均毛利均排名第1位，最后的系數(shù)總分也是排名第1(見表10)。

表10 各組最終排名

3 討論

目前，Mhp和PCV2廣泛存在于全球范圍內(nèi)，并給世界各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。國(guó)內(nèi)各地豬場(chǎng)均有Mhp的流行，而感染過Mhp的豬場(chǎng)，也很難對(duì)病原進(jìn)行徹底地清除[12]。另一方面，PCV2近年來在我國(guó)的流行情況也是愈發(fā)嚴(yán)重。兩種病原均能對(duì)豬群造成一定程度上的免疫抑制，而且經(jīng)常會(huì)在同一豬群中發(fā)生交叉感染，臨床癥狀又極為相似，這就大大加重了養(yǎng)豬業(yè)對(duì)其進(jìn)行防控的負(fù)擔(dān)，也對(duì)預(yù)防兩種病原的疫苗提出了市場(chǎng)需求。

市場(chǎng)上針對(duì)Mhp的疫苗多種多樣，包括滅活疫苗、減毒活疫苗。但Fisch Andressa[13]等人研究發(fā)現(xiàn)，這一類常規(guī)疫苗對(duì)刺激豬群產(chǎn)生免疫應(yīng)答的作用不大，接種后豬群對(duì)抗Mhp的免疫應(yīng)答能力并沒有顯著提升。而Moore[14]等人在進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，表達(dá)文庫(kù)免疫(expression library immunization，ELI)具有良好的免疫效果，通過優(yōu)化表達(dá)文庫(kù)的篩選方法，可進(jìn)一步促進(jìn)ELI在豬支原體肺炎中的應(yīng)用，為Mhp疫苗的發(fā)展提供更廣泛的思路。

目前，對(duì)PCV2疫苗的開發(fā)與研究，已取得了顯著的成果。趙曉云[15]等人利用大腸桿菌表達(dá)PCV2 Cap蛋白生產(chǎn)的病毒樣顆粒(virus-like particles，VLP)疫苗，實(shí)現(xiàn)了PCV2 Cap蛋白在大腸桿菌中的高效可溶性表達(dá)，重組的Cap (r Cap)蛋白在體外進(jìn)行自我組裝，形成的VLP具有良好的免疫原性。另外，VLP具有類似于天然病毒的抗原性和免疫原性，能夠進(jìn)行自我組裝[16]，可以作為良好的疫苗候選之一。Xiaochen Guo[17]等人研究發(fā)現(xiàn)復(fù)合生物佐劑可大大增強(qiáng)PCV2疫苗的免疫效果。因此，在疫苗接種時(shí)，為達(dá)到理想的免疫效果，可適當(dāng)添加合適的復(fù)合生物佐劑。

綜合我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀以及Mhp和PCV2經(jīng)常在同一豬場(chǎng)發(fā)生交叉感染的實(shí)際情況，有研究人員利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功構(gòu)建了針對(duì)Mhp與PCV2兩種病原的基因工程疫苗[18]，并在小鼠與仔豬體內(nèi)進(jìn)行免疫效果的評(píng)估，結(jié)果顯示，重組疫苗與混合商業(yè)疫苗的免疫效果相當(dāng)。但同時(shí)針對(duì)兩種病原開發(fā)的基因工程疫苗技術(shù)尚不成熟，尚未惠及到實(shí)踐生產(chǎn)中。因此，本研究選用混合的商業(yè)疫苗進(jìn)行接種，此法在實(shí)踐生產(chǎn)中已有較為穩(wěn)固的平臺(tái)，且在大量接種時(shí)往往能達(dá)到理想的效果。

研究采用上市率與上市正品率作為評(píng)估豬群整體狀況的指標(biāo)之一，其中上市率表示豬群銷售數(shù)量占進(jìn)苗數(shù)量的比例，體現(xiàn)出死亡豬的數(shù)量；上市正品率表示銷售的豬群數(shù)量中，符合上市標(biāo)準(zhǔn)的豬群占總銷售豬群的比例，體現(xiàn)出淘汰豬的數(shù)量。國(guó)內(nèi)市場(chǎng)針對(duì)Mhp以及PCV2兩種病原的商用疫苗種類繁多，這就使得選擇合適的疫苗、建立有效的免疫程序顯得尤為重要。有相關(guān)報(bào)道指出[19]，與未進(jìn)行疫苗接種的豬群相比，接種疫苗后的豬群日增重以及飼料轉(zhuǎn)化率都有顯著提高，且免疫的豬群育肥上市時(shí)間顯著縮短，臨床癥狀、肺部病變減輕，藥物治療費(fèi)用降低，豬場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益也明顯提高[4]。而在本研究中，藥費(fèi)主要包括豬場(chǎng)日常備用藥物，包括阿莫西林、維生素C、雙黃連、氨基比林、氟苯尼考、頭孢噻吩等。采用不同組合的疫苗對(duì)豬群進(jìn)行免疫接種，豬群的日增重與飼料轉(zhuǎn)化率也有明顯不同，提示選用合適的疫苗組合對(duì)豬群進(jìn)行免疫同樣可以提高產(chǎn)業(yè)利潤(rùn)。

相較于進(jìn)行過免疫的豬群，未免疫的豬群因受病毒以及支原體的侵害，健康狀況不佳，豬群體重會(huì)受到影響。有研究[20-22]同時(shí)采用抗體檢測(cè)與觀察豬群重量變化等多個(gè)指標(biāo)對(duì)疫苗的免疫效果進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果顯示，進(jìn)行免疫的動(dòng)物比未免疫動(dòng)物日增重要高。在臨床上兩種病原體對(duì)豬的主要病理變化部位均在肺部，因此，采用肺部評(píng)分系統(tǒng)，同樣可以對(duì)豬群的感染狀況進(jìn)行評(píng)估。綜上所述，通過對(duì)豬群總增重、平均日增重及肺部評(píng)分等指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)，間接地反映出不同疫苗組合之間免疫效果的差異，并結(jié)合頭均藥費(fèi)、頭均毛利等相關(guān)指標(biāo)，直觀地反映出豬群免疫后產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益有所差別，最終得出較為優(yōu)質(zhì)的疫苗組合方案。在臨床生產(chǎn)實(shí)踐中，由于一些限制性條件，如果設(shè)置對(duì)照組，那么對(duì)照組將不能進(jìn)行Mhp和PCV2疫苗的免疫，在兩種病毒流行的大環(huán)境下，會(huì)帶來疫病風(fēng)險(xiǎn)，造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。

總之，本研究通過對(duì)Mhp和PCV2兩種病原不同的疫苗進(jìn)行組合，以廣西本地生豬養(yǎng)殖企業(yè)為基礎(chǔ)，得到了不同疫苗組合在生產(chǎn)過程中作用效果的高低，結(jié)果顯示，第1組Mhp疫苗A和PCV2疫苗C的組合較其他組合有明顯優(yōu)勢(shì)，可指導(dǎo)豬場(chǎng)在制定免疫程序時(shí)有更加具體的方向，同時(shí)也為豬場(chǎng)篩選疫苗提供一定的參考依據(jù)，為生豬產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)實(shí)踐提供了一定的理論數(shù)據(jù)與技術(shù)支持。