• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    貴州省部分牛場BVDV、BHV-1、BCoV、MB的感染情況調(diào)查及BVDV分子特征分析

    2021-09-06 05:44:48石柯劉巧玲張森林泠任杰湯德元曾智勇王彬明東東李思南黃濤
    畜牧與獸醫(yī) 2021年9期
    關(guān)鍵詞:亞型感染率貴州省

    石柯,劉巧玲,張森,林泠,任杰,湯德元,曾智勇,王彬,明東東,李思南,黃濤

    (貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院, 貴州 貴陽 550025)

    牛病毒性腹瀉(BVD)是由牛病毒性腹瀉病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的急性、熱性傳染病,可引起免疫抑制,以發(fā)熱、腹瀉、懷孕母牛流產(chǎn)或產(chǎn)出死胎、畸形胎為主要癥狀。懷孕母牛可將病毒垂直傳播給新生小牛,引起持續(xù)感染,牛終生帶毒,這也是該病很難徹底根除的最主要原因[1]。牛冠狀病毒(bovine coronavirus,BCoV)是狀病毒科乙型冠狀病毒屬成員,為線狀單股正鏈RNA病毒,是導(dǎo)致犢牛腹瀉的重要病原[2],該病毒也可引起成年牛的冬痢和呼吸道疾病,且易發(fā)生混合感染[3]。BCoV所引起的犢牛呼吸道疾病通常表現(xiàn)為亞臨床型,多見于12~16周齡犢牛,可出現(xiàn)輕度呼吸道癥狀,如鼻炎、咳嗽和噴嚏,也可侵害下呼吸道[4]。該病毒是在腸道上皮及上呼吸道上皮內(nèi)復(fù)制的一種環(huán)境性病原,飼養(yǎng)管理不當(dāng)、嚴(yán)寒濕潤、應(yīng)激等因素可促使BCoV感染,常呈地方流行性,發(fā)病過的牛場幾年內(nèi)可連續(xù)感染,臨床上難以凈化[5]。牛皰疹病毒1型(bovine herpesvirus type 1,BHV-1)是導(dǎo)致牛傳染性鼻氣管炎(IBR)主要病因,臨床上以急性、高熱、呼吸困難、流鼻液、上呼吸道及其氣管黏膜發(fā)炎為主要癥狀[6]。我國于1980年首次從新西蘭引進(jìn)的牛群中分離到BHV-1[7]。目前該病在我國牛群中的流行呈上升趨勢,給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[8]。牛支原體(Mycoplasmabovis,MB)是牛的一種重要的致病性支原體,其主要引起牛的肺炎和乳腺炎,也可引起關(guān)節(jié)炎和流產(chǎn)[9-10]。本次試驗通過對貴州省7個地區(qū)牛場所采集的樣品進(jìn)行PCR檢測,并對陽性樣品進(jìn)行測序與分析,旨在了解貴州省牛BVDV、BHV-1、BCoV、MB的感染情況。在BVDV基因組中5′-UTR是最保守的基因序列[11],E2基因是BVDV的囊膜糖蛋白,是中和抗體的主要靶點[12],因此5′-UTR和E2基因常用于BVDV的分子特征分析靶標(biāo)[13]。通過對BVDV分子特征分析,了解貴州省流行的BVDV亞型,為貴州省牛BVD進(jìn)一步防控提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 樣品來源

    2018年2月—2020年4月間采集貴州不同地區(qū)牛場的牛鼻拭子共224份,其中:貞豐縣35份、大方縣33份、銅仁市28份、關(guān)嶺縣45份、都勻縣27份、開陽縣18份和凱里市38份。所有樣品均為隨機采樣。

    1.2 主要試劑

    分子量標(biāo)準(zhǔn)物DL2000 DNA Marker、M-MLV酶、dNTP、Oligo Primer、RNA酶抑制劑、TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0、pMD19-T Vector、大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞,均購自大連寶生物工程有限公司;金牌Mix(green)購自武漢擎科創(chuàng)新生物公司;EZNATM Gel Extraction Kit(50)膠回收試劑盒、普通質(zhì)粒小提試劑盒購自O(shè)MEGA公司。

    1.3 樣品檢測

    處理過的樣品采用DNA/RNA提取試劑盒對采集的224份樣品進(jìn)行核酸提取。將提取的核酸產(chǎn)物置于-20 ℃保存?zhèn)溆?。將提取的病毒RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA,按照Magen公司M-MLV H-First Stand Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行。將反轉(zhuǎn)錄的cDNA置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.4 PCR檢測

    參照NCBI中發(fā)表的BVDV 5′-UTR(MK059454)、BCoVgN(NC003045)、MBuvrC(AF003959)、BHV1gB(AJ004801)等基因的序列,運用Primer 5.0設(shè)計引物,用于擴(kuò)增目的基因片段,BVDV E2基因選擇借鑒王夢心等[14]的引物設(shè)計方法,引物序列詳見表1。引物由武漢擎科創(chuàng)新生物公司合成。

    表1 擴(kuò)增目的片段的引物

    PCR反應(yīng)體系為25 μL,金牌Mix(green)21 μL,上、下游引物各1 μL,DNA或cDNA模板各2 μL,PCR反應(yīng)條件為94 ℃ 5 min;94 ℃ 45 s;退火溫度54 ℃ 45 s;72 ℃ 30 s,共進(jìn)行35個循環(huán);72 ℃ 10 min;所有檢測樣品均設(shè)陽性和陰性對照。PCR產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。

    將BVDV的5′-UTR和E2基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物回收純化,純化的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送去武漢擎科創(chuàng)新生物公司克隆測序。從GenBank中獲取 BVDV基因1、2型部分代表株15株(詳見表2),作為序列參考,利用生物分析軟件MEGA7.0及DNAman進(jìn)行對比分析,構(gòu)建進(jìn)化樹。

    表2 參考毒株信息

    2 結(jié)果與分析

    2.1 PCR檢測

    采用PCR方法對各個縣市的樣品進(jìn)行檢測,部分樣品檢出特異性條帶,說明存在病毒感染,結(jié)果如圖1~4。

    由表2可見,各個縣市BVDV陽性率在11.11%~18.19%,平均陽性率15.67%;BHV-1陽性率在0~15.15%,平均陽性率7.37%;BCoV陽性率在0~14.28%,平均陽性率7.46%;MB陽性率5.56%~17.14%,平均陽性率12.50%。其中BVDV和MB的混合感染率為0~6.06%;BVDV和BHV-1的混合感染率為0~3.03%,MB和BHV-1的混合感染率為0~3.57%,MB和BCoV的混合感染率為0~3.70%。未發(fā)現(xiàn)3種及其以上的病毒同時感染的病例。

    M. DL2000 DNA Marker;1. 陽性對照;2~6. 部分樣品;7. 陰性對照

    M.DL2000 DNA Marker;1. 陽性對照;2~6. 部分樣品;7. 陰性對照

    M.DL2000 DNA Marker;1. 陽性對照;2~6. 部分樣品;7. 陰性對照

    M.DL2000 DNA Marker;1. 陽性對照;2~6. 部分樣品;7. 陰性對照

    表2 貴州省部分地區(qū)牛BVDV、MB、BHV-1、BCoV病原學(xué)調(diào)查結(jié)果分析 %

    2.2 BVDV 5′-UTR基因與E2基因序列進(jìn)化樹分析

    系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明(如圖5、圖6所示),4份BVDV陽性樣品均為BVDV-1型,其中有3份為BVDV-1m亞型,1份為BVDV-1b1亞型。樣品GUIZOU-1、GUIZOU-2、GUIZOU-3與BVDV-1m型毒株ZM-95遺傳關(guān)系相近,屬于同一分支,有較近的親緣關(guān)系;GUIZOU-4與BVDV-1B1型毒株VEDEVAC遺傳關(guān)系接近。

    注:▲GUIZOU-1、GUIZOU -2、GUIZOU -3、GUIZOU -4均為本次試驗陽性樣品。下同

    圖6 BVDV E2基因遺傳進(jìn)化樹

    3 討論

    BVDV、BCoV、BHV1和MB是引起牛呼吸道綜合征的主要病因,并且以多重感染或混合感染為主要感染形式[8, 14-15]。BVDV 5′-UTR的核苷酸序列呈現(xiàn)高度保守性,因此常作為核苷酸序列設(shè)計特異性引物,對BVDV進(jìn)行檢測和分離鑒定[16]。童欽等[17]調(diào)查了內(nèi)蒙古部分地區(qū)的509份牛血清樣品,BVDV抗體陽性率為58.35%。姚偉等[18]對遼寧省的739份血清樣品進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,BVDV抗體陽性率為74%。劉澤余等[19]對吉林省的325份血清樣品進(jìn)行了抗體和抗原的檢測,BVDV抗體陽性率為77%,抗原陽性率為12.92%。姚志蘭等[20]對2016—2017年在江浙部分地區(qū)采集了145份臨床腹瀉犢奶牛血清樣品進(jìn)行檢測,BVDV陽性率為13.1%。而西部病原調(diào)查的數(shù)據(jù)不全。本次研究只對貴州部分縣市進(jìn)行BVDV病原檢測,平均陽性率為15.67%。高于吉林省并且與江浙部分地區(qū)相近,說明貴州地區(qū)有較多的BVDV感染牛。何美琳等[21]對四川省阿貝州8個縣市1 070份牛血清樣品進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)BCoV的抗體陽性率為84.11%。權(quán)英存等[22]通過RT-PCR方法,檢測了青海省部分地區(qū)具有明顯腹瀉癥狀牛的腸道、糞便等樣品32份,發(fā)現(xiàn)BCoV陽性率為34.38%。2015—2017年,He等[23]采集西藏、青海藏區(qū)、四川藏區(qū)和云南藏區(qū)3月齡以內(nèi)牦牛腹瀉糞便樣本共 336 份,平均陽性率為69.05%,其中西藏為68.33%,青海為71.67%,四川為69.23%,云南為66.67%。本次研究中發(fā)現(xiàn)貴州部分縣市BCoV的平均陽性率7.46%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其他地區(qū),分析可能原因是本次研究中的樣品均采用的牛鼻拭子而其他研究多采用牛腹瀉糞便樣本。王淑娟等[24]對北京、天津、陜西、山東、山西、河南、河北等地的奶牛場進(jìn)行了調(diào)查,結(jié)果顯示BHV-1的個體陽性率在0~55.00%,群體陽性率為77.8%。本次研究中BHV-1平均陽性率僅為7.37%,處于一個比較低的水平,可能是由于選取的牛多為成年牛并且多為自家養(yǎng)殖,并沒有大規(guī)模與周邊地區(qū)頻繁交易,所以平均陽性率普遍低于其他省市。根據(jù)張信軍[25]對76份臨床樣品檢測,BVDV與BHV-1混合感染率為6.58%,并且該研究并未發(fā)現(xiàn)3種病毒的混合感染。本次研究中BVDV和MB的混合感染率0~6.06%;BVDV和BHV-1的混合感染率0~3.03%,MB和BHV-1的混合感染率0~3.57%,MB和BCoV的混合感染率0~3.70%,并且沒有發(fā)現(xiàn)3種及其以上的感染病例。

    由于中國地域遼闊,物種繁多,疾病的流行及病毒的遺傳演化情況十分復(fù)雜。研究表明,已從中國牛群中分離到BVDV-1和BVDV-2型病毒。中國主要流行的亞型為BVDV-1b和BVDV-1m型,其中青藏高原的主要流行亞型是BVDV-1q和BVDV-1b型,新疆地區(qū)分離到的病毒主要為BVDV-1q和BVDV-1f亞型[26]。為了進(jìn)一步了解貴州地區(qū)牛場BVDV流行株的亞型,本次研究還對其中的4份陽性樣品進(jìn)行測序,使用MEGA7生物學(xué)軟件和GenBank下載的15株毒株進(jìn)行遺傳演化分析,結(jié)果顯示,本次研究的3份陽性樣品GUIZOU-1、GUIZOU-2、GUIZOU-3與參考株ZM-95親緣性比較近,并且處于同一分支,同屬于BVDV-1m型;GUIZOU-4與VEDEVAC親緣關(guān)系比較接近,為BVDV-1b。本次樣品的采集主要集中于貴州地區(qū),但是VEDEAVC是匈牙利的毒株。蔡元慶等[27]在新疆也發(fā)現(xiàn)同源性接近匈牙利毒株的毒株,所以推測可能是新疆地區(qū)牛群傳播到貴州省或從歐洲引種傳播到貴州省。本研究發(fā)現(xiàn)的2種BVDV亞型與我國主要流行的亞型基本吻合,為分析貴州地區(qū)BDVD的流行提供了參考意義。

    本次研究首先從病原學(xué)方面對貴州省部分地區(qū)的牛場進(jìn)行了BVDV、BHV-1、BCoV、MB感染的流行病學(xué)調(diào)查,并且針對BVDV的基因型、基因亞型的感染情況進(jìn)行了進(jìn)一步的研究,證實了貴州地區(qū)牛場存在多種疾病和BVDV多種基因型的感染,為貴州省進(jìn)行牛呼吸道疾病的防控提供了可靠的依據(jù)。

    猜你喜歡
    亞型感染率貴州省
    貴州省種公牛站
    英國:55歲以上更易染疫
    不動產(chǎn)登記地方立法的思考——以貴州省為例
    貴州省黨代會開得最成功
    綜合性護(hù)理干預(yù)在降低新生兒機械通氣感染率的效果分析
    BED-CEIA方法估算2013年河南省高危人群的HIV-1新發(fā)感染率
    Ikaros的3種亞型對人卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的影響
    采取綜合干預(yù)措施可降低口腔癌患者術(shù)后下呼吸道感染率
    貴州省高速公路養(yǎng)護(hù)管理信息系統(tǒng)
    ABO亞型Bel06的分子生物學(xué)鑒定
    在线免费观看不下载黄p国产 | 国产乱人伦免费视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产三级在线视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久久色成人| 国产成人啪精品午夜网站| 99国产精品99久久久久| 国内精品美女久久久久久| 国产真人三级小视频在线观看| 久久香蕉国产精品| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美中文综合在线视频| av天堂中文字幕网| 在线永久观看黄色视频| 免费搜索国产男女视频| 精品久久久久久成人av| 国产亚洲精品一区二区www| 好男人电影高清在线观看| 99热只有精品国产| 久久九九热精品免费| 成人18禁在线播放| 国产毛片a区久久久久| 日韩欧美精品v在线| 九九热线精品视视频播放| 麻豆成人午夜福利视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久精品国产清高在天天线| 嫁个100分男人电影在线观看| svipshipincom国产片| 国产精品乱码一区二三区的特点| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久久久久国产a免费观看| 一本一本综合久久| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲成人免费电影在线观看| 免费高清视频大片| 99riav亚洲国产免费| 在线播放国产精品三级| 午夜两性在线视频| 一二三四社区在线视频社区8| 天天躁日日操中文字幕| 中文在线观看免费www的网站| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美在线黄色| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 男女做爰动态图高潮gif福利片| 午夜亚洲福利在线播放| 色综合欧美亚洲国产小说| 真人做人爱边吃奶动态| 男人舔女人的私密视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 一级黄色大片毛片| 99re在线观看精品视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 欧美中文综合在线视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 日本精品一区二区三区蜜桃| bbb黄色大片| 国产1区2区3区精品| av在线蜜桃| 免费高清视频大片| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲av成人一区二区三| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 91av网站免费观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲18禁久久av| 一本久久中文字幕| 欧美成人免费av一区二区三区| 老司机福利观看| 露出奶头的视频| 国产成人精品久久二区二区91| 18美女黄网站色大片免费观看| 午夜激情欧美在线| 精品久久久久久成人av| 男女那种视频在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| h日本视频在线播放| 男人舔女人的私密视频| 日韩国内少妇激情av| 国产成+人综合+亚洲专区| 熟女电影av网| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲国产看品久久| 久久香蕉国产精品| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产探花在线观看一区二区| 国产av在哪里看| a级毛片a级免费在线| 亚洲欧美激情综合另类| 国产毛片a区久久久久| 美女午夜性视频免费| 狠狠狠狠99中文字幕| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品1区2区在线观看.| 久久这里只有精品中国| 嫩草影院入口| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产高清视频在线播放一区| 欧美日韩乱码在线| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| av福利片在线观看| 哪里可以看免费的av片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 9191精品国产免费久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| 性色avwww在线观看| 观看免费一级毛片| 男人舔女人的私密视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲一区高清亚洲精品| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲av免费在线观看| tocl精华| 国产熟女xx| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲国产中文字幕在线视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 五月玫瑰六月丁香| www国产在线视频色| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产主播在线观看一区二区| 香蕉国产在线看| 99热这里只有是精品50| 国产精品影院久久| 精品久久久久久久毛片微露脸| 两人在一起打扑克的视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 成人三级黄色视频| 美女cb高潮喷水在线观看 | 久久中文字幕一级| 日本三级黄在线观看| 亚洲精品在线美女| 国产精品精品国产色婷婷| 久久草成人影院| 国产精品1区2区在线观看.| 国产成年人精品一区二区| 亚洲人与动物交配视频| 色老头精品视频在线观看| 色吧在线观看| 无人区码免费观看不卡| 国产精品一区二区精品视频观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 91在线观看av| 久久久成人免费电影| 丝袜人妻中文字幕| 久久精品国产综合久久久| 国产精品久久久av美女十八| 久久久久久久精品吃奶| 久久久精品大字幕| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲七黄色美女视频| 色尼玛亚洲综合影院| 一区二区三区激情视频| 国产精品女同一区二区软件 | 色吧在线观看| bbb黄色大片| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲av免费在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 特级一级黄色大片| 波多野结衣高清作品| 两人在一起打扑克的视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产欧美日韩一区二区三| tocl精华| 日韩精品中文字幕看吧| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美黄色淫秽网站| 我的老师免费观看完整版| 99国产综合亚洲精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产精品女同一区二区软件 | 丰满人妻一区二区三区视频av | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲天堂国产精品一区在线| 男人舔女人的私密视频| 国模一区二区三区四区视频 | 一夜夜www| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲国产精品成人综合色| 校园春色视频在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 极品教师在线免费播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产伦在线观看视频一区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲片人在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 精品久久久久久成人av| 免费无遮挡裸体视频| 五月伊人婷婷丁香| 精品免费久久久久久久清纯| 国产成人欧美在线观看| 三级国产精品欧美在线观看 | 日韩欧美国产在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 岛国在线免费视频观看| 日韩欧美在线二视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产伦人伦偷精品视频| 怎么达到女性高潮| 亚洲激情在线av| 很黄的视频免费| 女同久久另类99精品国产91| 51午夜福利影视在线观看| av黄色大香蕉| 午夜福利欧美成人| av片东京热男人的天堂| 亚洲成人久久性| 成人午夜高清在线视频| 人人妻人人看人人澡| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产精品乱码一区二三区的特点| or卡值多少钱| 国内精品久久久久精免费| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲avbb在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 久久精品91无色码中文字幕| 99国产精品一区二区三区| 免费高清视频大片| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产三级中文精品| 久久午夜亚洲精品久久| 日本成人三级电影网站| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国内精品久久久久精免费| 亚洲国产看品久久| 欧美黄色淫秽网站| 又粗又爽又猛毛片免费看| a级毛片在线看网站| 在线国产一区二区在线| 亚洲av免费在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 中文亚洲av片在线观看爽| 丰满人妻一区二区三区视频av | 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 男人舔奶头视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| av片东京热男人的天堂| 欧美三级亚洲精品| 九九热线精品视视频播放| 国产成人欧美在线观看| 91字幕亚洲| 这个男人来自地球电影免费观看| www日本在线高清视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 亚洲国产精品成人综合色| 免费一级毛片在线播放高清视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 免费看a级黄色片| 青草久久国产| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久久久久大精品| 99热精品在线国产| 精品国产美女av久久久久小说| 成年免费大片在线观看| 精品电影一区二区在线| 男插女下体视频免费在线播放| 成人永久免费在线观看视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| xxx96com| 国产精品一及| svipshipincom国产片| 午夜影院日韩av| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲色图av天堂| 精品久久久久久久毛片微露脸| 精品一区二区三区av网在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲专区中文字幕在线| 麻豆成人午夜福利视频| av在线蜜桃| 丝袜人妻中文字幕| 日本成人三级电影网站| 免费搜索国产男女视频| 特级一级黄色大片| 免费观看人在逋| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久99热这里只有精品18| 欧美3d第一页| 国产av在哪里看| tocl精华| av在线蜜桃| 亚洲精品久久国产高清桃花| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产黄色小视频在线观看| 中文字幕高清在线视频| 精品无人区乱码1区二区| 一区二区三区国产精品乱码| 99热只有精品国产| 久久热在线av| 国产私拍福利视频在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 中出人妻视频一区二区| 在线视频色国产色| 亚洲精品456在线播放app | 特大巨黑吊av在线直播| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 18禁观看日本| 99久久国产精品久久久| av天堂中文字幕网| 免费看十八禁软件| 女同久久另类99精品国产91| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲国产欧美人成| 一区二区三区国产精品乱码| 淫秽高清视频在线观看| 久久久久久久久中文| 久久香蕉国产精品| 一级毛片高清免费大全| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产综合懂色| 88av欧美| 一级毛片女人18水好多| 十八禁网站免费在线| 两个人看的免费小视频| 久久中文看片网| 国产单亲对白刺激| 国产一区在线观看成人免费| 精品午夜福利视频在线观看一区| 老汉色∧v一级毛片| 久久九九热精品免费| 一本精品99久久精品77| 美女黄网站色视频| 久久久精品大字幕| 床上黄色一级片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 校园春色视频在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 精品久久久久久久末码| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美黑人巨大hd| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 热99在线观看视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 女人被狂操c到高潮| 国产av在哪里看| 91在线精品国自产拍蜜月 | 午夜福利高清视频| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲无线观看免费| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲午夜理论影院| 香蕉丝袜av| 国产伦在线观看视频一区| 久久中文字幕一级| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产高清有码在线观看视频| 岛国在线观看网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲专区字幕在线| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲色图av天堂| 色播亚洲综合网| h日本视频在线播放| 精品国产乱码久久久久久男人| 男女那种视频在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美大码av| 国产蜜桃级精品一区二区三区| aaaaa片日本免费| 精品国产亚洲在线| 欧美色视频一区免费| 一区二区三区高清视频在线| 久久这里只有精品19| 男人舔女人的私密视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 成人亚洲精品av一区二区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 午夜福利成人在线免费观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产人伦9x9x在线观看| 1024香蕉在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 搞女人的毛片| 国产成人精品无人区| 色综合婷婷激情| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲专区字幕在线| 嫩草影院入口| 999精品在线视频| 国产美女午夜福利| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日本在线视频免费播放| 97超视频在线观看视频| 可以在线观看毛片的网站| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲专区字幕在线| a级毛片在线看网站| 日本成人三级电影网站| 一级作爱视频免费观看| 国产男靠女视频免费网站| 久久草成人影院| 国产高清激情床上av| 国产人伦9x9x在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 岛国在线免费视频观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 日韩有码中文字幕| 老司机午夜福利在线观看视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲男人的天堂狠狠| 午夜a级毛片| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲精品色激情综合| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产伦人伦偷精品视频| 麻豆成人av在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月 | 久久天堂一区二区三区四区| 成人一区二区视频在线观看| 香蕉丝袜av| 激情在线观看视频在线高清| 俺也久久电影网| 国产高清视频在线播放一区| xxxwww97欧美| 日本 av在线| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美乱色亚洲激情| 在线观看午夜福利视频| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲片人在线观看| 免费在线观看日本一区| 免费大片18禁| 一级黄色大片毛片| 操出白浆在线播放| 亚洲成人中文字幕在线播放| 九色国产91popny在线| 日韩三级视频一区二区三区| 无限看片的www在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 国产一区二区三区视频了| 精品一区二区三区四区五区乱码| 午夜a级毛片| 国产高清三级在线| 综合色av麻豆| 日韩精品中文字幕看吧| 一本一本综合久久| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日本 av在线| 成年女人毛片免费观看观看9| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 一级毛片女人18水好多| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产av不卡久久| 欧美乱色亚洲激情| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲真实伦在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品久久视频播放| 久久精品人妻少妇| 国产成人啪精品午夜网站| 久久精品影院6| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 午夜福利视频1000在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| svipshipincom国产片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美激情久久久久久爽电影| 午夜精品在线福利| 亚洲美女黄片视频| 91麻豆av在线| 日韩欧美三级三区| 丁香六月欧美| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产午夜福利久久久久久| 免费在线观看亚洲国产| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产av麻豆久久久久久久| а√天堂www在线а√下载| 久久精品91蜜桃| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲美女视频黄频| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美激情在线99| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲,欧美精品.| 国产亚洲精品av在线| 国产精品 国内视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 18禁国产床啪视频网站| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲av成人av| 美女扒开内裤让男人捅视频| 精品人妻1区二区| 色视频www国产| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 丝袜人妻中文字幕| 精品一区二区三区视频在线观看免费| a级毛片在线看网站| 国产精品亚洲一级av第二区| 一夜夜www| 亚洲欧美日韩东京热| 日韩av在线大香蕉| 亚洲欧美日韩东京热| cao死你这个sao货| 国产黄片美女视频| www.www免费av| 国产99白浆流出| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲精品在线观看二区| 级片在线观看| av在线天堂中文字幕| 亚洲专区字幕在线| 91久久精品国产一区二区成人 | 麻豆一二三区av精品| 黄色视频,在线免费观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 嫩草影视91久久| 性欧美人与动物交配| 国产成年人精品一区二区| 免费看光身美女| 国产淫片久久久久久久久 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 欧美乱妇无乱码| 成人三级黄色视频| 中文字幕久久专区| 两个人视频免费观看高清| 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩欧美在线二视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产成人欧美在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲av五月六月丁香网| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 午夜免费观看网址| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久99热这里只有精品18| 搡老熟女国产l中国老女人| 香蕉国产在线看| 啦啦啦免费观看视频1| 国产1区2区3区精品| 在线观看午夜福利视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 波多野结衣高清无吗| 国产高清三级在线| 欧美zozozo另类| 日韩精品青青久久久久久| 久久国产精品人妻蜜桃| 成人午夜高清在线视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 最新美女视频免费是黄的| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲电影在线观看av| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 淫秽高清视频在线观看| 精品国产亚洲在线| 99热这里只有精品一区 | 国产精品电影一区二区三区| 午夜福利在线观看吧| 国产成人系列免费观看| 一级毛片精品| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲精品一区av在线观看| 免费在线观看日本一区| 午夜福利在线观看吧| 91av网一区二区| 久久久久久久久中文| tocl精华|