Hns對紫貽貝和牡蠣機體酶活性的影響研究

邵躍

（錦州市科學(xué)技術(shù)研究院，遼寧 錦州121000）

自從人類從事海洋活動以來，海水腐蝕和海洋生物的污損就成為限制人們開發(fā)與利用海洋資源的兩個主要問題。近年來，隨著航運、海防、水產(chǎn)養(yǎng)殖以及海濱電廠等發(fā)展，海洋生物污損所帶來的危害越發(fā)嚴重，也越來越受到人們的重視[1]。防止海洋生物污損的研究有著廣闊的發(fā)展前景，開發(fā)環(huán)保、廣譜高效和長壽命的防污技術(shù)是未來的主要研究方向。

Hns是大連大學(xué)從植物中提取到的一種毒性物質(zhì)，但其毒性作用及作用機理尚不清楚，現(xiàn)以紫貽貝（Mytilus edulis）和牡蠣（Ostreagigas）為研究對象，研究Hns對海洋污損生物酶活性的影響，進而確定Hns是否可作為新型低毒高效的防污試劑。

1 研究方法

1.1 慢性毒性試驗

將紫貽貝洗凈，選擇殼長為（6.0±0.5）cm，殼寬為（3.0±0.5）cm和殼高為（2.0±0.5）cm的紫貽貝，放于6個養(yǎng)殖箱，每個養(yǎng)殖箱放入30只，加入20 L海水，并分別加入Hns母液，使每個養(yǎng)殖箱中Hns的質(zhì)量濃度分別為0，10，18，32，56和100 mg/L。曝氣，在暴露2，4，6和8 d時，于Hns質(zhì)量濃度為0和10 mg/L的養(yǎng)殖箱中取樣，每次取3只，第10 d時，于6個養(yǎng)殖箱中分別取3只，并測定紫貽貝組織內(nèi)氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和膽堿酯酶（CHE）的活性和丙二醛（MDA）的含量。試驗期不投喂。

1.2 組織勻漿

將經(jīng)藥物脅迫后的紫貽貝或牡蠣組織塊在0.86%預(yù)冷生理鹽水中漂洗，再在濾紙上吸干水分，取0.2～1.0 g組織塊剪碎并加入其9倍質(zhì)量的預(yù)冷生理鹽水，使用玻璃勻漿管充分研磨10次（6～8 min），制得10%組織勻漿，后將組織勻漿3 000 r/min離心10～15 min，取上清液進行酶活性測定[2]。

1.3 酶活性測定

測定按購自南京建成生物工程研究所的酶試劑盒的說明進行，用721分光光度計在相應(yīng)的波長下測定其吸光值。

2 結(jié)果與分析

2.1 暴露時間對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

不同暴露時間對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響見圖1（a）（b）（c）（d）。

（1）對SOD活性的影響。當紫貽貝在Hns質(zhì)量濃度為1 mg/L的藥物脅迫下，其組織SOD活性測定結(jié)果顯示，隨著藥物脅迫時間的延長，SOD活性表現(xiàn)出先升高后下降再上升的變化規(guī)律，第6 d時到達最大值；空白對照組中，紫貽貝組織內(nèi)的SOD活性則成相反趨勢?？傮w上，受藥物脅迫的紫貽貝試驗組SOD活性均高于無藥物脅迫組[3]。

（2）對CAT活性的影響。紫貽貝在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內(nèi)CAT活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現(xiàn)出波浪起伏的變化規(guī)律，且與空白對照組相比，紫貽貝組織內(nèi)的CAT活性成相反趨勢?？傮w上，藥物脅迫組的CAT活性最終隨時間的延長而升高[3]。

（3）對CHE活性的影響。紫貽貝在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內(nèi)CHE活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現(xiàn)出先上升后下降的變化規(guī)律；空白對照組中，紫貽貝組織內(nèi)的CHE活性則成相反趨勢。

（4）對MDA含量的影響。紫貽貝在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內(nèi)MDA含量隨著藥物脅迫時間的延長，表現(xiàn)出先上升后下降的變化規(guī)律，且與空白對照組相比，紫貽貝組織內(nèi)的MDA含量對Hns藥物反應(yīng)敏感。整體上，受藥物脅迫的紫貽貝MDA含量最終隨時間的延長而下降。

圖1不同暴露時間下Hns對紫貽貝組織內(nèi)SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

2.2 暴露時間對牡蠣SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

（1）對SOD活性的影響。牡蠣在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內(nèi)SOD活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現(xiàn)出先下降后上升再下降的變化規(guī)律，與空白對照組相比，牡蠣組織內(nèi)的SOD活性趨勢相同，且受藥物脅迫組SOD活性均比無藥物脅迫組高，見圖2（a）。

（2）對CAT活性的影響。牡蠣在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內(nèi)CAT活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現(xiàn)出緩慢下降的變化規(guī)律，與空白對照組相比，牡蠣組織內(nèi)的CAT活性成相反趨勢，且受藥物脅迫組CAT活性均比無藥物脅迫組高，見圖2（b）。

（3）對CHE活性的影響。牡蠣在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內(nèi)CHE活性隨著藥物脅迫時間的延長，表現(xiàn)出先上升后下降的變化規(guī)律，與空白對照組相比，牡蠣組織內(nèi)的CHE活性在試驗第6 d時與空白組CHE活性變化有明顯的差異，且受藥物脅迫組的CHE活性隨受藥物脅迫時間的延長，最終呈現(xiàn)下降趨勢，見圖2（c）。

（4）對MDA含量的影響。牡蠣在一定濃度的Hns藥物脅迫下，其組織內(nèi)MDA含量隨著藥物脅迫時間的延長，表現(xiàn)出波浪狀的變化規(guī)律，與空白對照組相比，牡蠣組織內(nèi)的MDA含量在試驗第4 d和第6 d時與空白組MDA含量成相反趨勢，且受藥物脅迫的生物MDA含量隨受藥物脅迫時間的延長，最終呈現(xiàn)下降趨勢，見圖2（d）。

2.3 Hns濃度對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

試驗結(jié)果顯示，Hns濃度對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量有一定的影響。其中SOD活性隨著Hns質(zhì)量濃度的升高，表現(xiàn)出波浪狀變化規(guī)律，在Hns質(zhì)量濃度為5～20 mg/L和50～80 mg/L兩個范圍內(nèi)變化劇烈，當Hns質(zhì)量濃度高于56 mg/L，SOD活性隨濃度的升高呈下降趨勢。CAT活性隨著Hns濃度的升高，表現(xiàn)出先升高后下降再升高的變化規(guī)律，在Hns質(zhì)量濃度為5～30 mg/L范圍內(nèi)變化劇烈，最終隨著Hns質(zhì)量濃度的升高，CAT活性呈升高的趨勢。CHE活性隨著Hns質(zhì)量濃度的升高，表現(xiàn)出先升高后下降的變化規(guī)律，在Hns質(zhì)量濃度為10～30 mg/L范圍內(nèi)反應(yīng)敏感，最終隨著Hns質(zhì)量濃度的升高呈下降趨勢；MDA含量隨著Hns質(zhì)量濃度的升高呈現(xiàn)出波浪狀的變化規(guī)律，在Hns質(zhì)量濃度為10～50 mg/L范圍內(nèi)變化劇烈，最終隨著Hns質(zhì)量濃度的升高呈升高趨勢，見圖3（a）（b）（c）（d）。

圖2不同暴露時間下Hns對牡蠣組織內(nèi)SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

2.4 Hns濃度對牡蠣SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

試驗結(jié)果顯示，Hns濃度對牡蠣SOD、CAT、CHE活性和MDA含量有一定的影響。其中SOD活性隨著Hns質(zhì)量濃度的升高呈上升趨勢，整體上SOD活性對Hns反應(yīng)敏感。CAT活性隨著Hns濃度的升高而呈現(xiàn)波浪狀變化規(guī)律，在Hns質(zhì)量濃度分別為3～8 mg/L和15～25 mg/L的范圍內(nèi)反應(yīng)敏感。CHE活性隨著Hns質(zhì)量濃度的升高，整體表現(xiàn)出先上升后下降的變化規(guī)律，在Hns質(zhì)量濃度為3～8 mg/L范圍內(nèi)出現(xiàn)起伏，最終CHE活性隨著Hns質(zhì)量濃度的升高呈現(xiàn)出下降的趨勢。MDA含量隨著Hns濃度的升高呈現(xiàn)出波浪起伏的變化規(guī)律，在Hns質(zhì)量濃度為3～20 mg/L范圍內(nèi)變化劇烈，最終MDA含量隨著Hns濃度的升高呈升高趨勢，見圖4（a）（b）（c）（d）。

圖3ρ（Hns）對紫貽貝SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

圖4ρ（Hns）對牡蠣SOD、CAT、CHE活性和MDA含量的影響

3 討論

在一定濃度的Hns脅迫下，紫貽貝組織中SOD、MDA和CHE活性趨勢相似，CAT反應(yīng)敏感，變化劇烈；而牡蠣組織中的各種酶反應(yīng)趨勢不相似，均對Hns反應(yīng)敏感?？芍狧ns濃度相同時，在相同時間下，牡蠣機體內(nèi)酶系統(tǒng)受Hns的影響較大，牡蠣更易被Hns毒殺。

低濃度的Hns對兩種生物組織內(nèi)的酶均有誘導(dǎo)作用，而兩種生物受中濃度Hns脅迫時，機體內(nèi)的酶均反應(yīng)劇烈，波動變化大。當受到高濃度的Hns脅迫時，紫貽貝組織中SOD和CHE活性受到抑制，MDA含量和CAT活性受到誘導(dǎo)；牡蠣組織中SOD活性和MDA含量受到誘導(dǎo)，CHE和CAT活性受到抑制。

綜上，可知Hns雖然對污損生物具有一定的抑制作用，但達不到環(huán)保防污涂料的低毒高效的要求。因此，對于Hns的研究還需要持續(xù)深入，對其優(yōu)化、提效并降毒性，進而使之符合環(huán)保防污涂料的要求。