高效液相色譜法檢測(cè)醫(yī)療美容產(chǎn)品中9種酰胺類局麻藥

沈心，顧曉風(fēng)，周震宇（蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究中心，江蘇 蘇州 215014）

利多卡因、普魯卡因、阿替卡因等是我國目前廣泛使用的酰胺類局麻藥，具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，且起效快、作用強(qiáng)、持續(xù)時(shí)間長，主要用作臨床醫(yī)療產(chǎn)品[1-3]。然而，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，美容行業(yè)逐漸興起，此類局麻藥可能被添加于曬后修復(fù)、祛斑祛痘等功能性化妝品中，通過皮膚吸收發(fā)揮鎮(zhèn)靜、抗皺抗衰老功效，但化妝品在使用過程中長期直接與人體接觸，若含有此類物質(zhì)會(huì)危害人體健康安全[4-6]。一些不法美容院為了達(dá)到在醫(yī)療美容過程中減輕人體肌膚疼痛或不適的目的，忽視顧客的身體健康，使用一些價(jià)格低廉、無合格證書生產(chǎn)批文的麻醉藥品，此類產(chǎn)品中麻醉成分含量不可控，具有中樞神經(jīng)毒性和心血管毒性，由于人體肌膚毛細(xì)管豐富，易被吸收并迅速進(jìn)入血液循環(huán)，對(duì)人體健康造成嚴(yán)重危害，風(fēng)險(xiǎn)性極大[7-8]。因此，我國《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）[9]、歐盟化妝品法規(guī)及東盟化妝品指令[10]中均明確將普魯卡因等局麻藥列為化妝品中禁用組分。

目前文獻(xiàn)報(bào)道的局麻藥高效液相色譜測(cè)定法多局限于單種或者4 種目標(biāo)組分的檢測(cè)[3，11-12]?；诖?，本文建立同時(shí)定量測(cè)定9 種酰胺類局麻藥（普魯卡因胺、N-去丁基布比卡因、甲哌卡因、阿替卡因、丙胺卡因、利多卡因、羅哌卡因、地布卡因、布比卡因）的高效液相色譜分析方法，檢測(cè)范圍全面、操作簡便、成本低、適用性強(qiáng)、有利于方法的推廣，可用于醫(yī)療美容產(chǎn)品中酰胺類局麻藥的檢測(cè)，以期為市場監(jiān)督管理提供技術(shù)支撐。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent Technologies 1260 Infinity Ⅱ高效液相色譜儀（Agilent Open Lab Acquisition CDS 2.4 工作站）；METTLER TOLEDO XSE205DU 電子天平（梅特勒）。

1.2 試藥

鹽酸普魯卡因（批號(hào)：C10589495，純度：99.0%，麥克林）；N-去丁基布比卡因（批號(hào)：7-ECGW-135-1，純度：98.0%）、鹽酸甲哌卡因（批號(hào)：36SKB-BI，純度：98.0%）、鹽酸丙胺卡因（批號(hào)：3SRKC-HF，純度：98.0%）、鹽酸布比卡因（批號(hào)：ZXXLC-AF，純度：98.0%）對(duì)照品（TCI）；阿替卡因（批號(hào)：L1820009，純度：99.0%）、地布卡因（批號(hào)：G1825214，純度：99.0%）對(duì)照品（阿拉?。?；鹽酸利多卡因?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：1-TGG-11-1，純度：99.0%，TRC）；鹽酸羅哌卡因?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：100866-201302，純度：94.5%，中國食品藥品檢定研究院）。樣品均來源于蘇州市市場監(jiān)督抽查。乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相A 為5 mmol·L－1磷酸二氫鈉溶液-15 mmol·L－1磷酸氫二鈉溶液（pH 7.5），流動(dòng)相B 為乙腈；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長：215 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件Tab 1 Condition of gradient elution

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 稱取鹽酸丙胺卡因、鹽酸布比卡因、鹽酸甲哌卡因、鹽酸羅哌卡因、鹽酸利多卡因、N-去丁基布比卡因、地布卡因、阿替卡因、鹽酸普魯卡因胺對(duì)照品各約100 mg，精密稱定，置100 mL 量瓶中，加入適量甲醇超聲使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得9 種酰胺類局麻藥的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液（1 mg·mL－1）。取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，用甲醇逐級(jí)稀釋成系列濃度的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品約1 g，精密稱定，置100 mL 量瓶中，加入適量甲醇，置40 ℃水浴中加熱5 min 使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取空白基質(zhì)（空白樣品）約1 g，精密稱定，置100 mL 量瓶中，加入適量甲醇，置40 ℃水浴中加熱5 min 使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液（0.05 mg·mL－1）、供試品溶液、陰性樣品溶液以及空白溶劑（甲醇），按 “2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。對(duì)照品溶液中9 種待測(cè)酰胺類局麻藥均達(dá)到基線分離，各理論板數(shù)均不低于5000，空白溶劑以及陰性樣品溶液對(duì)測(cè)定均無干擾，陽性樣品中檢測(cè)出3種酰胺類局麻藥（見圖1）。

圖1 空白溶劑（A）、陰性樣品溶液（B）、對(duì)照品溶液（C）及供試品溶液（D）典型色譜圖Fig 1 Chromatogram of blank solvent（A），negative sample solution（B），reference solution（C）and sample solution（D）

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測(cè)限和定量限

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品儲(chǔ)備液及系列對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰面積響應(yīng)值（A），以對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。另取對(duì)照品溶液（0.004 mg·mL－1），用甲醇逐級(jí)稀釋，同法測(cè)定，分別按3 倍和10 倍信噪比計(jì)算各組分的檢測(cè)限和定量限，結(jié)果見表2。

表2 9 種酰胺類局麻藥的線性關(guān)系Tab 2 Regression equation，LOD and LOQ of 9 amide local anesthetics

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋成濃度為0.04 mg·mL－1的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6 次，測(cè)得峰面積RSD在0.15%～0.32%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取陽性樣品，平行制備6 份供試品溶液，結(jié)果顯示樣品含普魯卡因胺、丙胺卡因、利多卡因3 種酰胺類局麻藥，各組分含量的RSD在1.1%～2.8%，表明該方法具有良好重復(fù)性。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.5”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，分別于室溫下放置0、6、10、12、24 h 后，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果顯示9 種酰胺類局麻藥峰面積的RSD均小于1.1%，說明該溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 回收試驗(yàn)

取約1 g 空白樣品作為空白基質(zhì)，精密稱定，共9 份，分別置100 mL 量瓶中，按低、中、高3個(gè)濃度分別加入“2.2.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液（1.0、5.0、10.0 mL），加入適量甲醇，于40℃水浴上加熱5 min 使其充分溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算回收率，9 種酰胺類局麻藥平均回收率在93.4%～105.7%，RSD≤5.7%，在親水性基質(zhì)中的平均回收率為92.4%～102.1%，RSD≤5.2%，符合測(cè)定要求。

2.9 實(shí)際樣品檢測(cè)

對(duì)10 批醫(yī)療美容產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果顯示，僅1 批樣品中檢出利多卡因、普魯卡因胺和丙胺卡因3 種酰胺類局麻藥，分別為24.81、3.91、6.65 mg·g－1，其余樣品均未檢出。

3 討論

3.1 流動(dòng)相pH 的選擇

考察不同pH 值（7.0、7.5、8.0、8.5、9.0）的流動(dòng)相對(duì)待測(cè)組分色譜峰形和分離效果的影響，結(jié)果顯示，當(dāng)pH 值高于或者低于7.5 時(shí)，均不能獲得滿意的分離效果；當(dāng)pH 值為7.5 時(shí)，各組分在峰形和分離效果上均較為理想。因此，確定流動(dòng)相pH 值為7.5。

3.2 色譜柱的選擇

比較3 種不同填料的色譜柱Phenomenex Gemini C18110A（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Agilent ZORBAX Extend C18（4.6 mm×250 mm，5μm）、Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）對(duì)色譜行為的影響，結(jié)果顯示，使用Phenomenex Gemini C18110A、Agilent ZORBAX Extend C18色譜柱，色譜峰均會(huì)出現(xiàn)不同程度的拖尾，峰形較差，使用Waters XBridge C18色譜柱結(jié)果理想。因此，選擇使用Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱作為試驗(yàn)用色譜柱。

3.3 小結(jié)

本研究以市場抽檢醫(yī)療美容產(chǎn)品為研究對(duì)象，建立了同時(shí)測(cè)定9 種酰胺類局麻藥的高效液相色譜方法。選擇臨床常用酰胺類局麻藥作為待測(cè)物，對(duì)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中規(guī)定的7 種禁用組分作出補(bǔ)充，建議將本研究中目標(biāo)組分（普魯卡因胺、N-去丁基布比卡因、甲哌卡因、阿替卡因、丙胺卡因、利多卡因、羅哌卡因、地布卡因、布比卡因）均列為禁用組分，且相比于已報(bào)道的色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[13-14]，本方法成本低，同時(shí)優(yōu)化樣品前處理過程，操作簡便，更利于方法的普及，可為市場監(jiān)督管理提供有力的技術(shù)支持。