碧螺春多糖的超聲輔助酶提取工藝優(yōu)化、分離純化及性質(zhì)分析

劉 鑫，陳香玉，郭 銳，李旭嬌，寇宇星，張俊愛，吳 艷,

（1.上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海食品安全工程技術(shù)研究中心，上海 200240；2.北京市農(nóng)林科學(xué)院農(nóng)業(yè)信息與經(jīng)濟研究所，北京 100097）

茶葉起源于中國，是世界上消費量第二的飲料，主要分為綠茶、紅茶、烏龍茶、黑茶和白茶等[1]。碧螺春是綠茶的一種，歷史悠久，主要產(chǎn)于江蘇、浙江等地，按采摘時間可分為明前碧螺春和明后碧螺春。明前碧螺春芽葉幼嫩、清香襲人、口味涼甜，銷往全國可以帶來極好的經(jīng)濟效益，而明后碧螺春受溫度影響茶葉變老、口味苦澀，經(jīng)濟效益不佳且仍需一定人工采摘成本[2],更適合副產(chǎn)品加工和功能成分的研究。

茶多糖因具有降血糖血脂、抗腫瘤、抗氧化、增強免疫、調(diào)節(jié)腸道菌群等生物活性而備受研究者關(guān)注[3?5]。茶多糖的提取方法主要包括熱水提取、超聲提取、微波提取、酶法提取等，而不同提取方法不僅影響多糖得率，也會通過影響多糖的單糖組成、糖醛酸含量及相對分子質(zhì)量大小等影響多糖生物活性的表現(xiàn)[6?8]。已有研究表明清明后綠茶中多糖含量更高[9]，Liao等[10]通過研究比較了熱水提取、超聲提取和酶法提取生姜多糖的結(jié)構(gòu)差異，發(fā)現(xiàn)超聲提取和酶法提取的生姜多糖相對分子質(zhì)量更低，而且在多糖鏈組成中比熱水提取多一種單糖（1，6-β-半乳糖），這些結(jié)構(gòu)差異可能帶來更好抗腫瘤活性等。Wei等[11]發(fā)現(xiàn)酶法提取的茶多糖蛋白質(zhì)或核酸的含量低，吡喃糖含量較高。Chen等[12]比較了熱水提取、酶法提取、超聲提取和超聲-酶法提取的共聚草多糖，發(fā)現(xiàn)超聲-酶法提取共聚草多糖得率最高，且化學(xué)組成中糖醛酸含量最高，相對分子質(zhì)量最小，抗氧化活性最佳。

目前對茶多糖研究報道中，在綠茶中對龍井、毛尖等品種研究較多，而針對碧螺春多糖(BTP)的提取、純化及結(jié)構(gòu)研究等尚缺少系統(tǒng)研究。酶法能有效破除細(xì)胞壁，超聲輔助酶法提取能有效提高茶多糖浸出率，且所得多糖可能具有低相對分子質(zhì)量、高糖醛酸含量等生物活性較高的多糖結(jié)構(gòu)。本文主要研究超聲輔助酶法提取的最優(yōu)工藝參數(shù)和分離純化方法，對碧螺春多糖進行化學(xué)組成、紫外光譜、紅外光譜、相對分子質(zhì)量等分析，為其進一步研究開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

碧螺春 上海滿堂春茶葉市場，產(chǎn)地江蘇蘇州；纖維素酶（50 U/mg）、果膠酶（500 U/mg） 上海源葉生物科技有限公司；DEAE-Sepharose、Sepharose CL-6B GE公司；乙醇、濃硫酸、葡萄糖、苯酚、間羥基聯(lián)苯等 分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

FE20型p H計 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；R206B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海申生科技有限公司；TD5A-WS型臺式低速離心機 湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司；U1810型紫外可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；Nicolet6700型傅里葉紅外光譜儀 蘇州佐藤精密儀器有限公司；THC型數(shù)控超聲波提取機 濟寧天華超聲電子儀器有限公司；VFD-2000型真空冷凍干燥機 上海比朗儀器有限公司；HWS24型電熱恒溫水浴鍋 上海恒科學(xué)儀器有限公司；BSZ-100型自動收集器 上海滬西儀器分析廠；BT100FC型蠕動泵 保定創(chuàng)銳泵業(yè)；TH500型梯度混合儀 上海滬西儀器分析廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 碧螺春茶多糖的提取工藝

1.2.1.1 碧螺春茶葉的預(yù)處理 取碧螺春茶葉，粉碎過篩，加入8～10倍體積（v/v）石油醚，浸泡并攪拌，脫去脂肪類雜質(zhì)，12 h更換石油醚1次，24 h后倒掉石油醚，加入8～10倍體積（v/v）95%乙醇溶液，浸泡并攪拌，充分除去小分子物質(zhì)、色素及低聚糖等物質(zhì)，每6 h更換一次乙醇，浸泡3～4 d，直到乙醇基本無色，抽濾、50℃烘干，得到預(yù)處理的碧螺春茶葉粉末。

1.2.1.2 多糖的制備 酶解處理條件參考酶法提取綠茶多糖的優(yōu)化工藝[13]，稱取5 g預(yù)處理后的碧螺春茶葉粉末，按液料比30 mL/g加入去離子水，0.2 mol/L磷酸緩沖液調(diào)節(jié)p H至4.8，加入2.4%復(fù)合酶（纖維素酶:果膠酶=1:1），45℃酶解2 h，3800 r/min離心10 min，濾渣加入去離子水依照不同的超聲功率、超聲溫度、液料比與超聲時間進行超聲波二次提取，3800 r/min離心10 min，棄去濾渣，合并兩次的上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的1/5，濃縮液加4倍體積（v/v）的95%（v/v）乙醇溶液，4℃靜置12 h，多糖沉淀析出，離心，沉淀分別利用丙酮、無水乙醇沖洗三次，揮干有機試劑后，加水復(fù)溶，9000 r/min離心30 min，取上清液，等電點法除蛋白，14 kDa透析袋透析除去小分子雜質(zhì)，冷凍干燥得到碧螺春多糖粉末，命名為BTP。

1.2.2 單因素實驗 本文研究超聲波功率、超聲溫度、液料比以及超聲時間對酶法聯(lián)合超聲提取BTP得率的影響。固定實驗參數(shù)超聲功率200 W，超聲溫度45℃，液料比40 mL/g,超聲時間35 min，分別考察超聲功率（160、200、240、280、320 W），溫度（35、45、55、65、75℃）,超聲時間（15、25、35、45、55 min），液料比（20:1、30:1、40:1、50:1、60:1 mL/g）對酶法聯(lián)合超聲提取碧螺春茶多糖得率的影響。

1.2.3 碧螺春多糖的響應(yīng)面試驗設(shè)計 基于單因素實驗結(jié)果，設(shè)定自變量為超聲功率（A，W）、超聲溫度（B，℃）、液料比（C，mL/g）與超聲時間（D，min），響應(yīng)值為BTP得率（%，w/w），利用Design expert 8軟件設(shè)定4因素3水平BBD響應(yīng)面組合實驗，以此優(yōu)化BTP的超聲波輔助提取工藝參數(shù)。具體實驗因素水平如表1所示。

表1 響應(yīng)面試驗因素與水平設(shè)計Table 1 Factors and levels in RSM experiment

1.2.4 碧螺春茶多糖得率計算 采用苯酚-硫酸法[14]測定BTP中的總糖含量，即以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再計算BTP提取液中的總糖含量，從而按照以下公式計算BTP得率：

式中：C為多糖濃度（mg/mL）；V為提取液體積（mL）；n為提取液稀釋倍數(shù)；m為稱取的碧螺春茶葉粉末質(zhì)量（g）。

1.2.5 DEAE-Sepharose陰離子交換柱層析 BTP溶液（10 mg/mL,100 mg）經(jīng)DEAE-Sepharose （D2.6 cm×30 cm）陰離子交換柱層析，依次采用去離子水、0～1.4 mol/L NaCl溶液洗脫，洗脫速度為2 mL/min，每管收集6 mL，隔管測定中性糖含量（苯酚-硫酸法A490nm），糖醛酸含量（間羥基聯(lián)苯法A525nm）和蛋白質(zhì)含量（紫外掃描法A280nm）[15]。分別收集獲得組分BTPN、BTPA1和BTPA2，透析3 d，冷凍干燥。

1.2.6 Sepharose CL-6B凝膠柱層析BTPA1溶液（20 mg/mL,100 mg）經(jīng)Sepharose CL-6B(D1.6 cm×100 cm）凝膠柱層析，采用0.15 mol/L NaCl溶液洗脫，洗脫速度為0.2 mL/min，每管收集2 mL，隔管測定中性糖含量（苯酚硫酸法A490nm）蛋白質(zhì)含量（紫外掃描法A280nm）[15]。分別收集獲得組分BTPA11和BTPA12，透析2 d，冷凍干燥。

1.2.7 基本化學(xué)組成測定 以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚-硫酸法[14]測定中性糖含量，以半乳糖醛酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用間羥基聯(lián)苯法[16]測定酸性糖含量，間羥基聯(lián)苯法在測定中受中性糖影響較低[17]；在以牛血清蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品，采用考馬斯亮藍(lán)法[18]測定可溶性蛋白質(zhì)含量。

1.2.8 紫外光譜測定 分別取BTP、BTPA1、BTPA11和BTPA 12，配制濃度為0.2 mg/mL的多糖溶液，進行紫外光譜掃描，波長范圍為：190～400 nm。

1.2.9 紅外光譜測定 分別取BTP、BTPA1、BTPA11及BTPA12粉末各2 mg，進行ATR紅外光譜分析，將樣品直接置于水平ATR儀鍺晶體表面上，蓋住鍺晶體（直徑2 mm），壓平，設(shè)置掃描范圍4000～400 cm?1，掃描時間為1 min。

1.2.10 相對分子質(zhì)量測定 采用高效體積排阻色譜法（HPSEC），分別取5 mg BTP、BTPA1、BTPA11及BTPA 12樣品，加入1 mL流動相（0.15 mol/L NaNO3+0.05 mol/L NaH2PO4·2H2O，pH=7），并充分溶解，用0.45μm水相微孔膜過濾后上樣[19]。

HPSEC測定條件[19]：檢測器采用多角度激光光散射檢測器（光源波長選用623.8 nm）、示差折光檢測器串聯(lián)使用，多糖在溶液中的折光指數(shù)增量（dn/dc）按照0.146 mL/g 計算。色譜柱為TSK PWXL6000和TSK PWXL3000凝膠色譜柱串聯(lián)；流速：0.5 mL/min，柱溫35℃；60 min洗脫時間；數(shù)據(jù)采集及分析軟件為ASTRA 7.1.3。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實驗均重復(fù)三次，響應(yīng)面實驗數(shù)據(jù)由Designexpert8處理，相對分子質(zhì)量、多分散系數(shù)和構(gòu)型斜率由ASTRA 7.1.3計算，其余數(shù)據(jù)均由Origin 2017處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實驗

由圖1-a可知，當(dāng)超聲功率在160～200 W時，碧螺春多糖的得率隨超聲功率增加而增加，功率為200 W時碧螺春多糖得率達(dá)到最大值26.84%。這可能是因為超聲振動產(chǎn)生的能量破壞了細(xì)胞壁并加強了分子間的運動[20]，促進多糖溶于溶劑中，從而提高碧螺春多糖得率。超過200 W時碧螺春多糖得率開始下降，這可能是超聲波的氣穴效應(yīng)和熱效應(yīng)導(dǎo)致多糖結(jié)構(gòu)破壞[21]。由圖1-b可知，當(dāng)超聲功率在35～45℃時，碧螺春多糖得率隨超聲溫度增加而增加，溫度為45℃時得率達(dá)到最大值26.18%，這可能由于溫度升高提高了多糖的溶解度，這將有利于多糖不斷溶出。超過45℃時，碧螺春多糖得率開始下降，這可能是因為溫度升高導(dǎo)致超聲的空化效應(yīng)減弱。隨著溫度升高，溶液的黏度下降，超聲波空化效應(yīng)產(chǎn)生的微射流與溶液之間壓力減小，導(dǎo)致超聲效應(yīng)減弱[22]。由圖1-c可知，超聲時間在15～35 min時，碧螺春多糖得率隨超聲時間增加而明顯提高，這可能是因為超聲能破壞細(xì)胞壁促進多糖溶出，隨著時間的增加細(xì)胞壁逐漸分解，多糖充分溶出，超聲時間為35 min時碧螺春多糖得率達(dá)到最大值24.78%，但超聲時間超過35 min后，碧螺春多糖得率開始下降，這可能是因為長時間萃取導(dǎo)致多糖降解[23]。由圖1-d可知，液料比在20:1～60:1 mL/g時，碧螺春多糖得率隨料液比增加而增加，這可能是因為增加溶劑能夠促進多糖釋放和溶解，液料比超過40:1 mL/g后得率增加緩慢，大部分多糖已溶出，液料比為40:1、50:1、60:1 mL/g時，碧螺春多糖得率分別為27.79%、28.45%和28.67%，但溶劑體積越大，濃縮成本越高。故選擇響應(yīng)面試驗中心點參數(shù)為200 W、45℃、35 min和40:1 mL/g。

圖1 單因素對BTP得率的影響Fig.1 Single factor influence on BTP yield

2.2 響應(yīng)面試驗

根據(jù)響應(yīng)面設(shè)計試驗，得到各因素各水平下BTP得率，如表2所示。整個響應(yīng)面設(shè)計由29個試驗組組成，在設(shè)計的中心進行了5次重復(fù)，以估計純誤差平方和[24]。試驗以隨機的方式進行，使響應(yīng)面設(shè)計中未預(yù)測到的變量對試驗產(chǎn)生的影響最小[25]。

表2 超聲輔助酶提BTP得率的響應(yīng)面設(shè)計與結(jié)果Table 2 Response surface design and results of ultrasound assisted enzyme extraction of BTPyield

通過Design-Expert 8.0數(shù)據(jù)處理，碧螺春多糖得率與4個變量的多元回歸方程如下：Y=27.68+0.86A+3.23B+0.67C+2.56D+1.41AB?0.19AC?0.94AD+0.42BC+2.12BD+1.32CD?3.90A2?4.15B2?2.67C2?5.83D2。由表3可知，模型F值較高（F=108.95），P值極低（P<0.01），表明此模型極為顯著。且A、B、C、D各因素與響應(yīng)值之間有著極為顯著的相關(guān)性（P<0.01）。AB、AD、BD和CD的P值小于0.01，表明此四項交互項對得率有極顯著的影響。根據(jù)F值判斷，4項因素對BTP得率的影響程度從大到小排序為：B（超聲溫度）>D（超聲時間）>A（超聲功率）>C（液料比）。失擬項的P值為0.2444，失擬項不顯著，故回歸模型可用于碧螺春多糖提取工藝的預(yù)測。

表3 響應(yīng)面方差分析Table 3 ANOVA for response surface quadratic model

響應(yīng)面等高線圖可直觀表征各因素對響應(yīng)值的影響，并確定最優(yōu)參數(shù)及各因素之間的相互作用，其中最小橢圓中心點即為響應(yīng)面的最高點。此外，等高線形狀的橢圓化程度與兩因素交互作用的顯著程度呈正相關(guān)[16]。若3D響應(yīng)曲面的坡度越陡、等高線越密且橢圓形程度越高，則說明兩因素交互作用對結(jié)果的影響越顯著；若坡度越緩、等高線越稀疏且圓形程度越高，則說明兩因素交互作用對結(jié)果的影響越小。從圖2中可看出，AB、AD、BD和CD四組3D響應(yīng)曲面圖表現(xiàn)為曲線較陡，即超聲功率與溫度、超聲功率與時間、超聲溫度與時間、液料比與時間的相互作用對碧螺春多糖提取得率的影響最為顯著。

圖2 兩因素交互作用影響B(tài)TP得率的響應(yīng)面及等高線圖Fig.2 Response surfaceand contour map of the interaction between two factorsaffecting BTPyield

2.3 最佳提取工藝參數(shù)確認(rèn)與驗證

根據(jù)多元回歸方程，利用模型預(yù)測酶法聯(lián)合超聲提取BTP最優(yōu)參數(shù)為：超聲功率206.28 W，超聲溫度47.56℃，料液比41.21:1 mL/g，超聲時間38.27 min，由此參數(shù)得到的BTP得率的理論值為28.32%?？紤]到實際可操作性，最終選取的最優(yōu)提取參數(shù)為：超聲功率200 W，超聲溫度45℃，料液比40:1 mL/g，超聲時間35 min，在此優(yōu)化條件下，經(jīng)3次平行實驗得到的BTP得率為26.74%±1.83%。這表明此回歸方程能準(zhǔn)確反映以上4項因素對BTP提取得率的影響，同時經(jīng)響應(yīng)面法優(yōu)化的超聲輔助酶法提取參數(shù)具有實際應(yīng)用價值，可用于碧螺春茶多糖的實際提取。

2.4 DEAE-Sepharose陰離子交換柱層析

由于中性糖和酸性糖所帶電荷基團性質(zhì)的不同，在陰離子交換柱層析中被不同洗脫液分離。如圖3所示，BTP經(jīng)DEAE-Sepharose陰離子柱層析分離獲得由去離子水洗脫的中性糖組分BTPN，得率為3.98%；由0～1.4 mol/L NaCl溶液洗脫收集獲得BTPA 1和BTPA2，得率為61.91%和5.71%，三個組分總得率為71.60%。BTP中的主要成分為酸性多糖BTPA 1，故對BTPA1進行下一步分離純化。Cai等[1]在綠茶多糖的DEAE-Sepharose純化中分離得到4個組分，包括3個酸性多糖成分，Wang等[26]在綠茶茶籽多糖純化中含量最高為中性多糖，表明茶多糖的組分與不同的純化條件以及茶葉部位等有關(guān)。

圖3 BTP的DEAE-Sepharose柱層析洗脫曲線Fig.3 DEAE-Sepharose column chromatography elution curve of BTP

2.5 Sepharose CL-6B凝膠柱層析

多糖根據(jù)相對分子質(zhì)量大小不同經(jīng)Sepharose CL-6B洗脫分離可得到不同組分，如圖4所示，BTPA 1經(jīng)Sepharose CL-6B分離獲得BTPA11和BTPA 12，得率為28.36%和42.29%，表明BTPA1由兩個不同分子質(zhì)量的組分組成，且兩者含量接近，故對BTPA 11和BTPA 12同時進行研究。

圖4 BTPA1的Sepharose CL-6B柱層析洗脫曲線Fig.4 Sepharose CL-6B column chromatography elution curveof BTPA1

2.6 基本化學(xué)組成

如表4所示，BTP、BTPA 1、BTPA 11和BTPA 12中性糖的含量分別為59.39%、66.86%、77.43%和62.61%，與Wang等[26]測得綠茶粗多糖含量為41.08%～41.72%相比，表明純化方法有效提高了BTPA 1、BTPA11及BTPA12純度。另外，BTP、BTPA 1、BTPA 11和BTPA12中糖醛酸含量分別為51.06%、53.53%、54.45%和65.39%，而Chen等[27]測得3種熱水提取酸性綠茶多糖的糖醛酸含量在30%～51.8%，糖醛酸含量的差別可能與提取工藝有關(guān)。與熱水提取相比，超聲輔助酶法提取多糖的酸性多糖含量將會更高[28]。在BTPA 1和BTPA 12中未檢出蛋白質(zhì)，而BTPA11蛋白質(zhì)為3.65%，表明BTPA11組分的多糖結(jié)構(gòu)含有少量結(jié)合蛋白質(zhì)。

表4 BTP、BTPA1、BTPA11和BTPA12的化學(xué)成分Table 4 Chemical composition of BTP、BTPA1、BTPA11 and BTPA12

2.7 紫外光譜分析

由圖5可知，BTP、BTPA 1、BTPA 11和BTPA 12均在190～200 nm左右處有多糖的吸收特征峰[29]，BTPA 12在260 nm處有肩峰，表明BTPA12中含有極少量核酸物質(zhì)，BTP和BTPA 1在280 nm均出現(xiàn)微弱吸收峰，表明BTP和BTPA1中含量少量蛋白質(zhì)，BTPA11中既無核酸也無蛋白質(zhì)。Cai等[1]由0.5 mol/L NaCl溶液在陰離子柱層析中分離的酸性綠茶多糖TPS-4中也含有核酸物質(zhì)，表明綠茶酸性多糖中可能會含有少量聚合核酸或結(jié)合蛋白。

圖5 BTP、BTPA1、BTPA11和BTPA12的紫外吸收光譜Fig.5 UV spectra of BTP、BTPA1、BTPA11 and BTPA12

2.8 紅外光譜分析

根據(jù)圖6紅外光譜分析，BTP、BTPA1、BTPA 11和BTPA 12出峰位置基本一致，鍵的強弱稍有差別。在3360 cm?1處均有較寬的O-H鍵的拉伸振動吸收峰，在2942 cm?1處均有較弱的C-H鍵吸收峰（包括CH、CH2和CH3，主要為飽和碳）[1]，表明BTP、BTPA1、BTPA 11和BTPA12均含有多糖的特征峰。1742 cm?1和1600 cm?1處為C=O鍵的拉伸振動的吸收特征峰[5,30]，這表明四種碧螺春多糖組分均含有糖醛酸的羧基結(jié)構(gòu)，這與化學(xué)成分測定結(jié)果一致。紅外吸收光譜在在1000～1200 cm?1的區(qū)域產(chǎn)生強烈的波段,該區(qū)域通常被認(rèn)為是分子的指紋，因為它可以識別多糖中的主要化學(xué)基團[31]。1097 cm?1和1016 cm?1處代表C-OH側(cè)基和C-O-C糖苷鍵拉伸振動，代表BTP、BTPA 1、BTPA11和BTPA 12中均含有吡喃糖[32]。

圖6 BTP、BTPA1、BTPA11和BTPA12的紅外吸收光譜Fig.6 Infrared absorption spectrum of BTP、BTPA1、BTPA11 and BTPA12

2.9 相對分子質(zhì)量測定

由圖7可得，BTP和BTPA 1包含兩個組分。純化后的BTPA11和BTPA12只有單一對稱峰，表明BTPA 11和BTPA 12為相對分子質(zhì)量分布均一多糖，且相對分子質(zhì)量分布較窄，其重均分子量Mw分別為1604.2和353.7 kDa，PDI分別為1.6和1.8（表5），說明相對分子質(zhì)量分布比較集中，純度較高，這將有利于對碧螺春多糖展開精細(xì)結(jié)構(gòu)研究。

表5 BTP、BTPA1、BTPA11和BTPA12的相對分子質(zhì)量Table 5 Relative molecular mass of BTP、BTPA1、BTPA11 and BTPA12

圖7 BTP、BTPA1、BTPA11和BTPA12的HPSEC譜圖Fig.7 HPSEC spectra of BTP、BTPA1、BTPA11 and BTPA12

構(gòu)型斜率，也叫均方根旋轉(zhuǎn)半徑對摩爾質(zhì)量斜率，是均方根半徑的對數(shù)對摩爾質(zhì)量擬合的直線求斜率所得。當(dāng)斜率為1時，表示高分子在溶液中是棒狀排列，當(dāng)斜率為0.4～0.6時則表示高分子在溶液中呈線性無規(guī)則線團，斜率小于0.33時則表示為球狀形態(tài)。由圖8可知，BTPA11的構(gòu)型斜率為0.12，均方根半徑的對數(shù)對摩爾質(zhì)量曲線呈U型，直線擬合度較差，推測BTPA11可能為高支化的球形構(gòu)象，因為對于相同相對分子質(zhì)量的多糖線形與支化分子，支化分子的旋轉(zhuǎn)半徑要更大，從而造成曲線彎折成U型，這是高支化結(jié)構(gòu)聚合物在高流速洗脫時的典型特征[33?34]。由圖9可知，BTPA 12的構(gòu)型斜率為0.15，直線擬合度較好，BTA 12可能趨向于球形結(jié)構(gòu)。Lin等[35]測定了綠茶酸性多糖是一種具有極緊湊鏈構(gòu)象的超支化多糖，多糖的超支化結(jié)構(gòu)特點可以與淀粉競爭結(jié)合位點，達(dá)到抑制α-淀粉酶作用，BTPA 11、BTPA 12可能具有超支化多糖的功能特性。

圖8 BTPA11旋轉(zhuǎn)半徑分布圖Fig.8 BTPA11 rotation radius distribution map

圖9 BTPA12旋轉(zhuǎn)半徑分布圖Fig.9 BTPA12 rotation radius distribution map

3 結(jié)論

本研究以碧螺春粗老茶葉為研究對象，采取超聲輔助酶法提取粗多糖BTP，在最優(yōu)條件下得率為26.74%。研究發(fā)現(xiàn)，碧螺春茶多糖酸性糖成分含量明顯高于中性糖，并分離到兩種酸性多糖組分BTPA 11和BTPA12。BTPA11和BTPA12相對分子質(zhì)量分布較窄，均一性良好，其相對分子質(zhì)量分別為1604.2和353.7 kDa，可以用于碧螺春多糖的精細(xì)結(jié)構(gòu)研究；構(gòu)型斜率分別為0.12和0.15，二者均可能是緊湊卷曲的高支化球形結(jié)構(gòu)，可能具有支化多糖的功能特性。這為進一步研究碧螺春多糖結(jié)構(gòu)及功能特性提供了重要參考，有利于碧螺春粗老茶的綜合開發(fā)應(yīng)用。