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    人參棗仁顆粒改善睡眠功能的實驗研究

    2021-08-31 12:05:50于德偉
    中國中醫(yī)藥科技 2021年5期
    關鍵詞:棗仁巴比妥鈉心脾

    楊 銘,于德偉,赫 慧,楊 明

    (吉林省中醫(yī)藥科學院·吉林 長春 130012)

    人參棗仁顆粒是根據(jù)中醫(yī)對失眠的治療經(jīng)驗及中藥的特點和組方規(guī)律,選取可用于保健食品的藥食兩用中藥材人參、酸棗仁、天麻等,配伍制成的保健食品。本研究依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》(2003 年版)相關內容[1],觀察其改善睡眠功能,并對相關作用機制進行初步探討,為將人參棗仁顆粒開發(fā)成為改善睡眠功能保健食品提供藥理學依據(jù)。

    1 材料

    1.1 藥物 人參棗仁顆粒:由吉林省中醫(yī)藥科學院新藥研究開發(fā)中心化學室提供,批號:20180401,10 g/袋;臨用時用蒸餾水配制成每1 mL含生藥量為0.68、0.23、0.12 g濃度。

    1.2 動物 健康成年ICR小鼠,SPF級,雌性,體質量19~21 g,購自遼寧長生生物技術有限公司,生產(chǎn)許可證號:SCXK(遼)2015-0001。飼養(yǎng)環(huán)境:屏障環(huán)境動物觀察室,溫度:21~25 ℃,相對濕度:40%~70%。飼料均購自北京科奧協(xié)力飼料有限公司,許可證號:京飼證(2018)06073。

    1.3 試劑 小鼠谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、5-羥色胺(5-HT) ELISA 試劑盒:購自長春晶美生物科技有限公司;戊巴比妥鈉、巴比妥鈉:Sigma公司。

    1.4 儀器 FA2204B型電子天平(d=0.1 mg):上海精密科學儀器有限公司;DT100型電子天平(d=0.1 g):熟雙杰電子天平有限公司;T6 紫外可見分光光度計:北京普利生有限公司;TGL-16B 高速離心機:上海安亭科學儀器廠;HC-3618R高速冷凍離心機:安徽中科中佳科學儀器有限公司;ST-360酶標儀:上海科華實驗系統(tǒng)有限公司;ZZ-6小鼠自主活動測試儀:成都泰盟科技有限公司。

    2 方法

    2.1 動物分組及給藥 實驗分4 批進行。每批48 只小鼠按體質量隨機分4組,每組12只。分別為空白對照組和人參棗仁顆粒高(10 g/kg)、中(3.3 g/kg)、低(1.7 g/kg)(分別相當于成人每日用量的30、10、5 倍)3個劑量組;每日以蒸餾水配置不同濃度樣品,以20 mL/kg灌胃給藥,空白對照組予同體積蒸餾水。每天灌胃1 次,連續(xù)灌胃30 d。

    2.2 觀察指標及測定方法

    2.2.1 對小鼠直接睡眠和自主活動的影響 末次給藥后30 min,將小鼠放入小鼠自主活動儀內適應 5 min,記錄5 min 內小鼠的自主活動次數(shù);并觀察給藥1 h內各組入睡動物數(shù)及睡眠時間。睡眠以翻正反射消失為指標。

    2.2.2 延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗 小鼠末次給藥30 min后,各組動物腹腔注射47.5 mg/kg戊巴比妥鈉,注射體積為10 mL/kg,以翻正反射消失為指標,觀察記錄動物入睡時間和覺醒時間,計算睡眠時間。

    2.2.3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗 小鼠末次給藥30 min后,各組動物腹腔注射27.5 mg/kg戊巴比妥鈉,注射體積為10 mL/kg,動物置24~25 ℃安靜環(huán)境下,觀察動物以翻正反射消失達1 min以上為入睡動物,記錄每組30 min內入睡動物數(shù)。

    2.2.4 巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗 小鼠末次給藥20 min后,各組動物腹腔注射250 mg/kg巴比妥鈉,注射體積為20 mL/kg,觀察注射巴比妥鈉后,以翻正反射消失達1 min以上為入睡指標,記錄動物入睡時間,計算睡眠潛伏期。

    2.2.5 小鼠腦內GABA、5-HT及Glu含量測定 2.2.1 實驗小鼠測試觀察完畢后,脫頸椎處死,冰浴開顱取全腦后,在冰平皿上分離大腦,用冰生理鹽水沖洗血液,濾紙拭干,大腦稱重后,加9倍量的冰生理鹽,4 ℃條件下勻漿,取漿液至 2 mL離心管中離心(3 000 r/min,15 min,4 ℃),取上清液,按照試劑盒相關操作步驟測定樣品中GABA、5-HT、Glu的OD 值,并帶入標準曲線回歸方程式,計算樣品中GABA、5-HT、Glu的含量。

    3 結果

    3.1 人參棗仁顆粒對小鼠直接睡眠和自主活動的影響 給藥后,各劑量組未見睡眠動物,對直接睡眠無影響。高劑量組、中劑量組小鼠自主活動次數(shù)減少,與空白對照組比較有顯著性差異(P<0.01或P<0.05)。結果見表1。

    表1 各組小鼠直接睡眠和自主活動的比較

    3.2 人參棗仁顆粒對延長戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠時間的影響 見表2。由表2可見,高劑量組和中劑量組均能明顯延長戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠時間,與空白對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。低劑量雖能增加小鼠睡眠時間,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    表2 各組小鼠延長戊巴比妥鈉誘導小鼠 睡眠時間的比較

    3.3 人參棗仁顆粒對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的影響 見表3。由表3可見,各劑量組睡眠動物增加,但與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    表3 各組小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量小鼠睡眠發(fā)生率比較

    3.4 人參棗仁顆粒對小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響 見表4。由表4可見,高劑量組和中劑量組均能明顯縮短巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期,與空白對照組比較有顯著性差異(P<0.01或P<0.05)。低劑量雖能減少小鼠睡眠潛伏期,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    表4 各組小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期比較

    3.5 人參棗仁顆粒對小鼠腦GABA、5-HT及Glu含量的影響 見表5。由表5可見,與空白對照組比較,高、中劑量組均能明顯升高小鼠腦內GABA和5-HT含量,有顯著性差異(P<0.01或P<0.05)。各劑量組對Glu含量有一定的降低作用,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    表5 各組小鼠腦組織GABA、5-HT及Glu含量比較

    4 討論

    人參棗仁顆粒,由人參、酸棗仁、天麻、龍眼肉、遠志、茯苓組成。君藥人參,甘溫補益,補力雄厚,補脾養(yǎng)心,滋陰養(yǎng)血,善補一切氣血虧虛;心血足則神自安,心氣強則善思多智,故心脾兩虛、氣血不足之不寐即可除之。臣藥酸棗仁,養(yǎng)心安神,甘補酸收,既能補心養(yǎng)肝而寧心安神,又可收斂營陰而止虛煩,可用于心脾兩虛、神失所養(yǎng)的失眠、驚悸之癥,以助君藥安神之功。佐藥遠志、茯苓、龍眼肉、天麻,遠志辛散苦泄溫通,使心腎互濟而安神定志,肺宣痰化竅開神寧,故可安神益智,拂郁化痰,而痰消寐復;茯苓補益心脾,養(yǎng)心安神,以助君臣安神;龍眼肉甘潤平和,營養(yǎng)心脾,稱為營養(yǎng)之佳品,有補心脾、益氣血之功,對思慮過度,勞傷心脾而致失眠堪有良效;天麻可定驚息風、鎮(zhèn)驚安神。諸藥合用補心脾、益氣血、神安寧、寐可復,共奏補脾養(yǎng)心,補血安神之功?,F(xiàn)代藥理學研究表明,人參對不同類型的神經(jīng)衰弱患者均有一定的治療作用,能消除失眠癥狀[2];天麻能對中樞神經(jīng)有明顯的藥理作用,具有鎮(zhèn)靜、安眠作用[3-4];酸棗仁有鎮(zhèn)靜、催眠藥理作用[5]。研究結果表明,與空白對照組比較,人參棗仁顆粒對動物無直接睡眠作用;能明顯減少小鼠自主活動次數(shù),有鎮(zhèn)靜作用;能延長閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間,縮短巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期;表明人參棗仁顆粒有改善睡眠作用明顯。

    睡眠覺醒與很多神經(jīng)遞質密切相關,如乙酰膽堿、谷氨酸、GABA、食欲素、褪黑素、組胺、腺苷等。不同的神經(jīng)遞質相互聯(lián)系,互相影響,共同維持著睡眠覺醒節(jié)律[6]。5-羥色胺(5-HT)是腦內一種重要的單胺類神經(jīng)遞質,對睡眠的調節(jié)起到關鍵作用,腦內5-HT水平的減少可引起失眠,腦內 5-HT 濃度升高,會產(chǎn)生睡意[7]。GABA 作為一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制性神經(jīng)遞質,其分解代謝產(chǎn)物γ-羥基丁酸(GHB)可通過作用細胞膜上的GHB特異性受體、GABA-B 受體或 5-羥色胺能神經(jīng)系統(tǒng)等途徑,發(fā)揮對中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性神經(jīng)元的抑制作用,進而對機體產(chǎn)生鎮(zhèn)靜催眠等效果[8];或可影響失眠障礙患者晝夜節(jié)律,而改善睡眠[9]。Glu是大腦中主要的興奮性神經(jīng)遞質,在覺醒時的神經(jīng)活動中起著基礎作用。一般認為失眠的發(fā)生與中樞神經(jīng)系統(tǒng)內抑制性氨基酸的興奮性下降和興奮性氨基酸的興奮性升高有關[10]。研究結果表明,人參棗仁顆粒能顯著升高小鼠腦中5-HT 與GABA濃度,對Glu影響不明顯??赡芘c處方中人參、酸棗仁的活性成分調節(jié)5-HT與GABA有關[11-12]。提示人參棗仁顆粒能通過增加腦中主要的抑制性神經(jīng)遞質5-HT和GABA含量,發(fā)揮鎮(zhèn)靜和改善睡眠作用。中藥作用機制具有多成分、多靶點的特點,人參棗仁顆粒改善睡眠作用機制有待于通過神經(jīng)內分泌、細胞因子、基因蛋白等領域進一步深入探究。

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