蚊傳呼腸孤病毒研究進(jìn)展

田 杰，郭曉芳

蟲媒病毒(Arbovirus)是指一些通過吸血節(jié)肢動(dòng)物叮咬傳播引起人或動(dòng)物發(fā)病的病毒，其中有130余種可引起人獸共患疾病，主要分布于披膜病毒科、黃病毒科、布尼亞病毒目和呼腸孤病毒科，感染后表現(xiàn)為發(fā)熱、皮疹、關(guān)節(jié)痛、出血熱和腦炎等癥狀[1-2]。呼腸孤病毒科(Reoviridae)由9～12個(gè)基因組片段的雙鏈RNA病毒組成，其病毒呈等軸二十面體球形結(jié)構(gòu)，有1～3層衣殼包裹，直徑為60～80 nm，目前僅發(fā)現(xiàn)Aedes pseudoscutellaris reovirus(APRV)為9節(jié)段并單衣殼病毒[3-4]。根據(jù)核結(jié)構(gòu)不同可將呼腸孤病毒科分為無刺突呼腸孤病毒亞科(Sedoreovirinae)和刺突呼腸孤病毒亞科(Spinareovirinae，又稱為“炮塔型”呼腸孤病毒[4])。根據(jù)國際病毒分類委員會(International Committee for Taxonomy of Virus, ICTV)2019年分類(https://talk.ictvonline.org/taxonomy/)，現(xiàn)有9屬58種刺突呼腸孤病毒，無刺突呼腸孤病毒亞科包括6屬39種(見表1)，包括未列入分類的共15屬[5-6]150余種[1]。

表1 呼腸孤病毒分類

呼腸孤病毒科病毒分布廣，其宿主小到真菌大到哺乳動(dòng)物[4]，蚊蟲作為其重要的傳播媒介，分布范圍最廣，繁殖和傳播病毒能力最強(qiáng)。自新中國成立以來，我國從庫蚊屬、按蚊屬、阿蚊屬、伊蚊屬等蚊蟲中相繼分離到10多種以往未分離到的病毒，其中呼腸孤病毒科包括版納病毒(Bannavirus, BAV)、遼寧病毒(Liaoning virus, LNV)、Kadipirovirus(KDV)、云南環(huán)狀病毒(Yunnan orbivrus, YUOV)、西藏環(huán)狀病毒(Tibet orivirus, TIBOV)和芒市病毒(Mangshi virus)[7]。BAV作為我國于世界首次發(fā)現(xiàn)的呼腸孤病毒科新屬代表株，在國際上引起了極大的關(guān)注，但自首次分離后鮮有報(bào)道。目前已知蚊傳呼腸孤病毒中確認(rèn)對人致病的有YUOV[8]和BAV[9]，其余則對哺乳動(dòng)物、禽和魚類致病，人感染后可表現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、呼吸道及肺部感染以及胃腸疾病[10]。本文對蚊傳呼腸孤病毒科的研究現(xiàn)況進(jìn)行綜述，旨在了解其分布情況，及對人和動(dòng)物致病情況，為我國蚊傳呼腸孤病毒病防治措施的制定提供依據(jù)。本文中列出的蚊傳呼腸孤病毒及分布地區(qū)和媒介蚊類見表2。

表2 蚊傳呼腸孤病毒種類及媒介蚊類

1 無刺突呼腸孤病毒亞科(Sedoreovirinae)

1.1 Orbivirus(環(huán)狀病毒屬) 環(huán)狀病毒屬是1971年由Borden等命名的以吸血節(jié)肢動(dòng)物作為傳播媒介，在脊椎動(dòng)物與節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)繁殖，引起人獸共患病的蟲媒病毒屬[11-12]。環(huán)狀病毒屬的病毒均為10節(jié)段dsRNA病毒，雙層衣殼呈20面體對稱結(jié)構(gòu)，核心含32個(gè)環(huán)狀粒子，編碼7種結(jié)構(gòu)多肽(VP1-7)和4種非結(jié)構(gòu)多肽(NS1-4)[5,11]，NS4在VP6段中編碼[6]。VP1(Pol)、T2和VP7(T13)是環(huán)狀病毒最保守的序列，常用于環(huán)狀病毒屬病毒的鑒定[13-14]，OC1(VP2/3)和OC2(VP5)高度可變，常用于環(huán)狀病毒屬內(nèi)部血清型鑒定[15]。通常VP2編碼T2蛋白的病毒由蚊和蜱傳播，VP3編碼T2蛋白由蠓傳播[15-16]，但是新發(fā)現(xiàn)的一些VP3編碼T2蛋白的病毒多數(shù)從蚊中分離。

據(jù)ICTV記錄現(xiàn)有22種環(huán)狀病毒，另有15種未記錄[17]。近年來全球通過雙鏈RNA病毒的全長cDNA擴(kuò)增技術(shù)與高通量測序鑒定出了多種新型蚊傳環(huán)狀病毒：尤馬蒂拉病毒(Umatilla virus，UMAV)、科里帕塔病毒(Corriparta virus, CORV)及其新亞型California mosquito pool virus(CMPV)、Sathuvachari virus(SVIV)、Kammavanpet virus(KVPTV)[6, 16]、秘魯馬病病毒(Peruvian horse sickness virus，PHSV)、Mobuck virus、云南環(huán)狀病毒(Yunnan orbivirus，YUOV)及其新亞型西藏環(huán)狀病毒(Xizang orbivirus，TIBOV)和廣西環(huán)狀病毒(Guangxi orbivirus，GXOV)[18]。各蚊傳環(huán)狀病毒的基因組特征見表3。

表3 環(huán)狀病毒屬各病毒分子結(jié)構(gòu)及編碼蛋白

環(huán)狀病毒屬的病毒主要流行于歐洲、亞洲和非洲[17]的30多個(gè)國家，以熱帶分布最廣，亞熱帶高于溫帶。1988年徐普庭首次在云南省中華按蚊和棕頭庫蚊中分離到環(huán)狀病毒[19]，國內(nèi)分布以云南、西藏、福建等地為主。1995年對西藏亞東和錯(cuò)那地區(qū)人群抗體調(diào)查發(fā)現(xiàn)，藏族人群感染率高于其他地區(qū)人群[12]。易感動(dòng)物以 牛、羊和野生反芻動(dòng)物為主，傳播媒介可分為蚊、庫蠓、蜱類[18,20]，以庫蠓傳播為主，有記載秘魯馬病病毒可由蚊傳播[21]，Lebombo virus和Orungo virus、Changuinola virus最初從蚊中分離[22]。環(huán)狀病毒以侵害神經(jīng)系統(tǒng)為主，表現(xiàn)為3F(Fever、Face和Foot)癥狀：高熱、面部充血、口鼻粘膜水腫、內(nèi)臟充血、出血、跛行等。以弱毒疫苗和滅活疫苗預(yù)防為主，以支持療法和對癥療法為輔，預(yù)后良好[11]。

1.1.1 尤馬蒂拉病毒(Umatilla virus, UMAV) UMAV是1969年7月在美國俄勒岡州尤馬蒂拉市的尖音庫蚊(Culex pipiens)中分離到并第一個(gè)被完全測序的禽源環(huán)狀病毒，基因組呈1-1-1-2-1-1-2-1的獨(dú)特條帶型，其節(jié)段4編碼NS1(Tup)，節(jié)段5編碼VP4(Cap)。目前已發(fā)現(xiàn)4個(gè)亞種：Umatilla(UMAV)，Minnal(MINV)，Netivot(NETV)和Llano Seco virus(LLSV)，MINV和NETV的基因組序列尚未報(bào)道[13]。2002年西澳大利亞金伯利地區(qū)環(huán)紋庫蚊(Culex annulirostris)中分離到Stretch Lagoon orbivirus(SLOV)，經(jīng)VP2(T2)序列測定為UMAV新亞型，可感染馬、驢和山羊，接種于BHK-21細(xì)胞后，48～72 h后出現(xiàn)細(xì)胞病變(cytopathic effect, CPE)[5]。2014年在日本東京端叉庫蚊(Culex sasai)中分離到的Koyama Hill virus(KHV)病毒，是全球首次在東亞地區(qū)分離到的UMAV病毒，該病毒只能在C6/36細(xì)胞系增殖，48～72 h出現(xiàn)嚴(yán)重CPE，72～96 h可收集病毒[13]。

1.1.2 科里帕塔病毒(Corriparta virus, CORV) CORV是1960年從澳大利亞環(huán)紋庫蚊中分離的一種環(huán)狀病毒，電泳條帶呈2-4-4(2-4-3-1)模式遷移與蠓傳環(huán)狀病毒3-3-4(3-3-3-1)條帶型不同。目前已發(fā)現(xiàn)6種不同的CORV，其原型為CORV-MRM1，隨后CS109、V654和V730病毒也在澳大利亞分離到，Acado virus和Jacareacanga virus分別于1963年埃塞俄比亞和1975年巴西的庫蚊分離到[23]。該病毒主要流行于澳大利亞、非洲和南美洲，并在野生及家養(yǎng)禽類、牛、有袋動(dòng)物、馬和人體中發(fā)現(xiàn)中和抗體。1974年在加州環(huán)跗庫蚊(Culex tarsalis)中分離到的California mosquito pool virus(CMPV)，由于缺乏所有環(huán)狀病毒的代表序列進(jìn)行比對，當(dāng)時(shí)認(rèn)為是環(huán)狀病毒的一個(gè)新種[23]。2013年Manjunatha.N等報(bào)道CORV-MRM1的全基因組測序后，經(jīng)對比分析，認(rèn)為CMPV屬于CORV。CORV接種于BHK-21細(xì)胞后，48～72 h后出現(xiàn)嚴(yán)重CPE[23]。2016年Harrison等報(bào)道了澳大利亞北部環(huán)紋庫蚊、Cx.Pullus、常型曼蚊(Mansonia uniformis)和諾曼伊蚊(Ae.Normanensis)中發(fā)現(xiàn)的Parry’s Lagoon virus(PLV)已在多種哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)中和抗體，但病毒分離只能在C6/36細(xì)胞中進(jìn)行，5 d出現(xiàn)空泡、聚集等細(xì)胞病變[24]。

1.1.3 Sathuvachari virus(SVIV)/Kammavanpet virus(KVPTV) SVIV是1963年自印度南部黑冠椋鳥(Brahminy myna)中分離到一種新環(huán)狀病毒，其片段2編碼VP3(T2)，片段3編碼VP2(OCP1)，但經(jīng)VP1(Pol)、VP3(T2)、VP7(T13)序列分析鑒定為一種新型蚊傳環(huán)狀病毒的原型[25]。1980年自印度尼西亞雜鱗庫蚊(Culex vishnui)中分離到Tagtag virus(TGV)，經(jīng)鑒定與SVIV同屬一種病毒，2008年Yadav等對與SVIV同時(shí)分離的KVPTV的VP1、VP5(OC2)和VP7序列進(jìn)行分析，確定與TGV歸于一類，與UMAV的親緣性最近[6,16]。近年來，1株自50年前越南蚊中分離的CGLT392被鑒定為SVIV，2005年在日本西南地區(qū)健康牛血清中分離到5株SVIV，研究表明SVIV目前已擴(kuò)散至南亞熱帶以外的地區(qū)，對人和哺乳動(dòng)物的致病性至今未知[26]。SVIV只能接種于C6/36[25]；TGV接種于C6/36細(xì)胞后4 d出現(xiàn)CPE，接種于BHK和Vero細(xì)胞后5 d出現(xiàn)CPE[25]；KVPTV不能在任何已知的細(xì)胞系中復(fù)制，可感染小鼠，對人和其他動(dòng)物致病性未知[6, 16]。

1.1.4 秘魯馬病病毒(Peruvian horse sickness virus, PHSV) PHSV于1997年從死于神經(jīng)系統(tǒng)綜合癥的秘魯馬血液、大腦和脾臟樣本中分離出，經(jīng)VP3(OC1)和VP7(T13)序列分析認(rèn)為與YOUV最相近，是一種蚊傳環(huán)狀病毒。主要流行于南美洲熱帶地區(qū)，在馬、牛、羊特別是家養(yǎng)馬中傳播，對馬致病，表現(xiàn)為高燒(>39 ℃)、運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)障礙、下頜下垂或口瘡，通常8～11 d后死亡，最初主要在馬等哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)，后來在圣馬丁地區(qū)的蚊蟲中也分離到該病毒。1997年圣馬丁馬匹病死率高達(dá)78%，至今未發(fā)現(xiàn)對其他動(dòng)物或人類致病，1999年4—5月之間，在北澳大利亞出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)疾病癥的兩匹馬中，分離出了埃爾西病毒(Elsey virus, ELSV)，經(jīng)VP2(T2)和VP3(OC1)序列鑒定為與PHSV同一血清型，2002年又于健康馬匹血液中分離出了4株P(guān)HSV。將PHSV接種于C6/36細(xì)胞后7 d可收集該病毒[27]。

1.1.5 Mobuck virus Mobuck virus是2012年8月在對美國密蘇里州一只患腸出血熱的雄性白尾鹿脾臟組織中進(jìn)行流行性出血熱病毒(epizootic haemorrhagic disease virus，EHDV)分離時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種新環(huán)狀病毒原型[28-29]。對Mobuck病毒VP2(T2)和VP7(T13)進(jìn)行序列分析發(fā)現(xiàn)，與PHSV、YUOV和Middle Point orbivirus(MPOV)的親緣性最近，屬于蚊傳環(huán)狀病毒，該病毒接種于C6/36細(xì)胞中，通過剔除EHDV而得到[28]，目前已報(bào)道全基因組序列，但對人獸致病性未知。

1.1.6 云南環(huán)狀病毒(Yunan obivirus, YUOV) YUOV是1999年在中國云南省采集的三帶喙庫蚊(Cx.Tritaeniorhynchus)中首次分離的一種新型環(huán)狀病毒[30-31]。隨后在云南省中華按蚊(An.Sinensis)、棕頭庫蚊(Cx.Fuscocephalus)、菲律賓按蚊(An.Philippinensis)中也分離到Y(jié)UOV。2005-2006年于西雙版納勐海縣三帶喙庫蚊中分離到6株YUOV，并對中-老邊境地區(qū)135例發(fā)熱病人急性期血清標(biāo)本進(jìn)行YUOV抗體檢測，發(fā)現(xiàn)1例IgM抗體陽性，8例IgG抗體陽性[8]。2007-2009年在西雙版納勐臘縣三帶喙庫蚊中分離到5株YUOV[7]。YUOV基因組呈3-2-5條帶型，建立于VP2(T2)和VP3序列分析，1997年分離自圣馬丁PHSV感染馬匹中的Rioja virus(RIOV)于2005年確定為YOUV血清1型，1998年分離自澳大利亞健康牛中的MPOV于2007年確認(rèn)為YOUV血清2型，RIOV可引起羊和狗的腦炎癥，MPOV不引起臨床癥狀[27]。YOUV在C6/36細(xì)胞中CPE表現(xiàn)為細(xì)胞圓縮、脫落，也可在AP61和AA23細(xì)胞中復(fù)制[8,31]，盲傳三代可見CPE[7]。

1.1.7 西藏環(huán)狀病毒(Tibet orbivirus, TIBOV) TIBOV是繼YOUV后在我國首次發(fā)現(xiàn)的另一種新型環(huán)狀病毒，主要由庫蚊和蠓傳播。2009年西藏林芝墨脫縣圓斑按蚊(An.maculatus)中分離到的首株TIBOV(XZ0906)，其基因組呈3-3-3-1條帶型，VP3編碼T2蛋白，與蠓傳藍(lán)舌病毒等更親近，但其傳播媒介以庫蚊屬居多[21, 32-33]。2008年在廣東省的致倦庫蚊(Cx.Fatigan)中發(fā)現(xiàn)的Fengkai virus也屬于西藏環(huán)狀病毒[17]。近年來，還在云南省采集的蠓蟲和致倦庫蚊標(biāo)本中分離到TIBOV，2017年又確定了捕自2007年西雙版納的三帶喙庫蚊中的1株病毒為版納環(huán)狀病毒(Banna orbivirus, BAOV)，經(jīng)過系統(tǒng)發(fā)育分析表明BAOV為XZ0906和Fengkai的重組病毒，是中國首次報(bào)道的基因重組TIBOV[17]。2011年在湖北省首次從三帶喙庫蚊中分離到1株(HN11121)，三帶喙庫蚊廣泛分布于我國南部，中部及東部沿海地區(qū)[32]，為TIBOV的傳播提供了條件。2013年8月在云南省芒市庫蠓中分離到DH13C120，經(jīng)序列測定屬于TIBOV，而與XZ0906代表不同的血清型，并首次證明了西藏環(huán)狀病毒是家畜的潛在病原[21]。蚊中分離的TIBOV接種于BHK-21細(xì)胞48 h可見圓縮、少量破碎，72 h可見圓縮、脫落、破碎嚴(yán)重，不能引起C6/36的細(xì)胞病變；而庫蠓中分離的DH13C120可引起Vero、C6/36細(xì)胞病變[21, 32-33]。

1.1.8 廣西環(huán)狀病毒(Guangxi Oribivirus, GXOV) 2015年在廣西壯族自治區(qū)牛血樣中分離到V172/GX/2015，基因組呈3-4-3條帶型，經(jīng)測序，其VP1(Pol)和VP7(T13)序列與YUOV、PHSV和Mobuck virus相似，VP2(T2)序列與蚊傳環(huán)狀病毒接近及其基因組核酸電泳條帶與PHSV相似，都說明該病毒是一種新的蚊傳環(huán)狀病毒。目前只在牛身上分離出該病毒，但對其他哺乳動(dòng)物及人類致病性未知。接種于C6/36細(xì)胞盲傳4代，第5 d出現(xiàn)細(xì)胞皺縮、脫落、溶解與漂浮[18]。

1.2 東南亞十二節(jié)段dsRNA病毒屬(Seadornavirus) Seadornavirus是呼腸孤病毒科的一個(gè)新屬，由12節(jié)段雙鏈RNA病毒構(gòu)成，包含：BAV、KDV、LNV，主要在東南亞、印度尼西亞和中國流行。BAV是一種新型病原體，到目前為止，已從多種蚊子、蜱、腦炎患者、豬和牛中分離出，另外2種只從蚊子中分離出來[34]。這3種病毒都可從伊蚊、按蚊、庫蚊中分離，僅BAV確認(rèn)對人類致病[35]。ICTV第六次分類報(bào)告曾將KDV、BAV、LNY和科羅拉多蜱熱病毒(Colorado tick fever virus, CTFV)歸于Colti病毒屬[36-38]，隨全基因組測序的完成，在2005年ICTV第8次分類報(bào)告中被確定為呼腸孤病毒科新屬——Seadornavirus，該屬病毒 VP1(RdRp)和VP3最保守，用于病毒種類的鑒定[9, 35, 38]，各編碼序列見表4。該病毒屬最初在中國發(fā)現(xiàn)，并從我國云南省西雙版納地區(qū)發(fā)熱病人的血液標(biāo)本中分離到，隨后在北京、甘肅、海南、新疆等地的人、家畜和蚊中分離到，我國目前已分離到170多株以BAV為主的東南亞十二節(jié)段dsRNA病毒[39]。近年來，又發(fā)現(xiàn)了兩種新病毒：Balaton virus和芒市病毒，Balaton virus是從匈牙利淡水鯉魚腸道中分離到的十二節(jié)段病毒，芒市病毒與Balaton virus和BAV最接近[35]。

表4 東南亞十二節(jié)段病毒屬各病毒分子結(jié)構(gòu)、序列長度及編碼蛋白

1.2.1 版納病毒(Banna virus，BAV) BAV是引起腦炎和無名熱的重要病原之一，最早于1987年由徐普庭等在云南省西雙版納的腦炎患者中分離得到，故命名為版納病毒[9]。其基因組呈6-6條帶型，VP12序列只有690 bp常用作基因分型鑒定，基因型分為A(中國、越南)和B(印度尼西亞)兩型，A型又分為A1(北方)和A2(南方)兩亞型，北方分離株多于南方[40]。分布于赤道至北緯42°之間的東南亞熱帶至中國北部的溫帶地區(qū)[9, 40]。媒介包括3屬10種蚊蟲。庫蚊：三帶喙庫蚊、淡色庫蚊(Cx.Pipienspallens)(淡色庫蚊是在我國新發(fā)現(xiàn)的一種蚊蟲媒介，并在中國境內(nèi)廣泛分布[41])、環(huán)帶庫蚊(Cx.Modestus)、偽雜鱗庫蚊(Culex.Pseudovishnui)、兇小庫蚊(Cx.Annulus)；按蚊：迷走按蚊(An.Vagus)、中華按蚊；伊蚊：白紋伊蚊(Ae.Albopictus)、騷擾伊蚊(Ae.Vexans)和背點(diǎn)伊蚊(Ae.Dorsalis)，近幾年來發(fā)現(xiàn)BAV亦可由庫蠓傳播[9]。該病毒具有豐富的遺傳多樣性和巨大的分化潛能，且未出現(xiàn)物種屏障[42]，不僅從患者體內(nèi)分離，還從中國、印度尼西亞、南韓、匈牙利和越南的蚊子、豬、牛和蜱中分離103株[8]，并在人群中發(fā)現(xiàn)BAV IgM/IgG，感染BAV者呈流感癥，嚴(yán)重會出現(xiàn)昏迷、腦炎，豬、牛等則表現(xiàn)為消瘦甚至失明[35, 40-41]。BAV接種于C6/36細(xì)胞中48 h可見細(xì)胞聚集，72 h后聚集和脫落[9, 35]。

1.2.2 Kadipiro virus KDV于1981年在印度尼西亞爪哇島褐頭庫蚊(Culexfuscocephalus)中分離出來，于1998年由法國學(xué)者Attoui H完成全基因組測序后歸于Seadornavirus[39, 42]。該病毒基因組呈6-5-1條帶型，是區(qū)別于BAV的重要特征。流行于印度尼西亞和中國，傳播媒介為庫蚊、按蚊、阿蚊和伊蚊，而在中國只從庫蚊、按蚊和阿蚊中分離到該病毒[42]，到目前為止，GenBank也只記錄了兩個(gè)完整的KDV基因組序列。2005-2006年首次在中國于云南省西北部收集到的三帶喙庫蚊、中華按蚊和騷擾阿蚊(Armigeressubalbatus)中分離到5株KDV[39]。2016年9月從山東省墾利市收集的中華按蚊中新分離出的SDKL1625，是北溫帶首例KDV，2018年我國首次報(bào)道該株病毒全基因組序列，目前KDV在我國南方和北方均有發(fā)現(xiàn)[42]。最近，在肯尼亞沿海地區(qū)進(jìn)行的一項(xiàng)關(guān)于急性人類免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染的研究中，證實(shí)了KDV可能對人類致病[42]，但目前尚無對人致病的報(bào)告[39]。KDV接種于C6/36細(xì)胞后4 d可見圓縮、細(xì)胞間隙加大，5～7 d逐漸脫落，而接種于BHK-21不出現(xiàn)CPE[39, 42]。

1.2.3 遼寧病毒(Liaoning virus，LNV) LNV是1997年在中國東北吉林白城采集的背點(diǎn)伊蚊中首次分離到的東南亞十二節(jié)段dsRNA病毒[43]，電泳條帶與KDV相同，其中 VP12最為保守，對VP10和VP12進(jìn)行序列分析，可將LNV分為兩個(gè)基因型，1997年遼寧株(NE91-31)為LNV-2。LNV嚴(yán)格分布于我國北緯36°-47°的西北-東北地區(qū)(新疆、山西、青海、甘肅及遼寧等地區(qū)[43])，表明遼寧病毒可能受氣候限制[44]，有學(xué)者認(rèn)為LNV可能是近期引入北方的BAV新亞型[43, 45]。主要分布于新疆地區(qū)，2005年分離自新疆多地庫蚊和背點(diǎn)伊蚊的27株均為LNV-1，此后新疆分離株均為LNV-1[43, 45]。其傳播媒介主要是背點(diǎn)伊蚊，2005之后發(fā)現(xiàn)以兇小庫蚊為主的庫蚊攜帶該病毒，2012年8月在遼寧省從中華按蚊和背點(diǎn)伊蚊中分離到2株，這是第2次在東北地區(qū)分離到LNV-2，其余分離株均為LNV-1[43, 46]。該病毒能對小鼠致病，表現(xiàn)為病毒血癥甚至死亡，目前尚無對人致病的報(bào)道，但可能對人和其他動(dòng)物致病[44-45]。LNV接種于C6/36上表現(xiàn)為圓縮融合、脫落，于BHK-21上只表現(xiàn)為圓縮、脫落，接種后3 d出現(xiàn)CPE。LNJZ08024、LNJZ08045、LNJZ08033株只引起C6/36細(xì)胞病變，4 d可出現(xiàn)CPE[46]。

1.2.4 芒市病毒(Mangshi virus) 芒市病毒(DH13M041)是2013年在我國云南省德宏市的三帶喙庫蚊中首次發(fā)現(xiàn)的一種新東南亞十二節(jié)段dsRNA病毒，Balaton virus只在匈牙利鯉魚中被鑒定但沒有分離出來，而且只發(fā)現(xiàn)11個(gè)完整的基因序列(VP1-11)，芒市病毒基因組呈6-4-2條帶型，其VP8序列與BAV(VP7)和Balaton virus(VP8)編碼的蛋白激酶序列最接近[35]。2005年在中國、老撾和緬甸庫蚊中分離的MX6，通過基因組測序確定為我國西南邊境首次報(bào)道的十二節(jié)段病毒，其VP9與芒市病毒的同源性僅81%，可能是同種病毒的不同基因型。芒市病毒接種于C6/36細(xì)胞中72 h后出現(xiàn)圓縮、脫落、融合，接種于BHK-21和Vero細(xì)胞后盲傳三代仍未見CPE[35]。

2 刺突呼腸孤病毒亞科(Spinareovirinae)

根據(jù)ICTV分類，Spinareovirinae包含9個(gè)病毒屬(見表1)：對淡水魚和甲殼動(dòng)物類致病的水生呼腸孤病毒屬(Aquareovirus，AQRV)[47]，對人致病但經(jīng)蜱傳播的科羅拉多蜱傳病毒屬(Colitiviruses)[48]，對昆蟲致病的質(zhì)型多角體病毒屬(Cytoplasmicpolyhedrosisvirus,CPV)[49]和昆蟲非包涵體呼腸孤病毒屬(Idnoreovirus)，對植物致病的斐濟(jì)病毒屬(Fijivirus)[50]和水稻病毒屬(Oryzavirus)[51]，對真菌致病的真菌病毒屬(Mycoviruses)[52]，對禽類致病的禽正呼腸孤病毒屬(orthoreovirus)[53]，僅一個(gè)從蚊中檢測到的迪諾維納病毒屬(Dinovernavirus)[4, 54]。

Dinovernavirus只包含一種病毒——偽盾伊蚊呼腸孤病毒(Aedes pseudoscutellaris reovirus, APRV)，是已知唯一具有9節(jié)段dsRNA基因組的病毒，其序列結(jié)構(gòu)見圖1，也是除了質(zhì)型多角體病毒屬(cypoviruses，CPVs)以外唯一的單衣殼呼腸孤病毒[4]，1974年分離自斐濟(jì)偽盾伊蚊的幼蟲AP61細(xì)胞系。該病毒第7節(jié)段是唯一可以檢測同源序列的片段，經(jīng)Clamp序列分析表明，APRV代表了家族中一個(gè)獨(dú)特的屬，與質(zhì)型多角體病毒屬、斐濟(jì)病毒屬和禽正呼腸孤病毒屬關(guān)系最密切，其主要傳播媒介為白紋伊蚊、偽盾伊蚊、漿足蚊屬(Eretmapodites dracaenae)[54]。2010年在喀麥隆的Fako地區(qū)進(jìn)行的一項(xiàng)監(jiān)測研究中第一次于自然界中發(fā)現(xiàn)迪諾維納病毒，并初步確定為Fako virus(FAKV)[4]。相關(guān)研究證明，F(xiàn)AKV在白紋伊蚊中垂直傳播和水平傳播，水平傳播以食源性傳播為主，是否對哺乳動(dòng)物和人致病還未可知。APRV不能在vero等哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中復(fù)制，接種于C6/36或C7/10細(xì)胞系后4 d便可見明顯的細(xì)胞融合和聚集，而FAKV不引起任何細(xì)胞系病變，也不能在連續(xù)傳代后產(chǎn)生RT-PCR產(chǎn)物[4]。

9個(gè)片段依次編碼：非結(jié)構(gòu)蛋白、RNA依賴RNA聚合酶、主要衣殼蛋白、非結(jié)構(gòu)蛋白、炮塔蛋白、結(jié)構(gòu)蛋白、夾道蛋白、非結(jié)構(gòu)蛋白、非結(jié)構(gòu)蛋白

3 結(jié) 語

目前全球已發(fā)現(xiàn)586種可傳播蟲媒病毒的媒介，其中蚊蟲媒介有300多種[2]，以伊蚊和庫蚊為主要傳播媒介[55]，經(jīng)蚊蟲傳播的呼腸孤病毒有3屬13種，而在我國發(fā)現(xiàn)的全球首例就有2屬6種(YUOV、TIBOV、GXOV、BAV、LNV、Mangshi病毒)。我國幅員遼闊，地理氣候環(huán)境復(fù)雜，全球已證實(shí)的數(shù)千種蚊蟲在我國就發(fā)現(xiàn)近500種，僅庫蚊就達(dá)57種[56]，主要分布于熱帶、亞熱帶地區(qū)，且同種蚊媒又能傳播不同病毒，病毒輸入后受氣候等因素影響又發(fā)生變異，如新發(fā)現(xiàn)的BAOV是XZ0906和Fengkai virus的基因重組型，為我國首次報(bào)道基因重組型環(huán)狀病毒。云南省作為我國西南邊陲，地處熱帶及亞熱帶，國內(nèi)多數(shù)蟲媒病毒病首先在云南發(fā)現(xiàn)，據(jù)2012年查冰的調(diào)查報(bào)告顯示，自1975年以來于云南省共采集到11屬74種50余萬只蚊蟲標(biāo)本，共分離361株病毒，其中321株經(jīng)鑒定為5科5屬11種病毒，呼腸孤病毒科包含YUOV、Colti病毒、KDV、BAV[57]，還有近年來發(fā)現(xiàn)的Mangshi病毒等，這些病毒有的對動(dòng)物致病，有的對人致病，有的在人群中發(fā)現(xiàn)抗體陽性，如YUOV和BAV自首次發(fā)現(xiàn)后，便很少再有發(fā)現(xiàn)及相關(guān)的研究報(bào)道。蚊傳呼腸孤病毒的相關(guān)研究比較少，多數(shù)對人的致病情況還未知，而我國自然環(huán)境復(fù)雜，蚊蟲種類多，分布廣，有可能還存在其他蚊傳病毒，有必要加強(qiáng)對其的病例監(jiān)測和調(diào)查研究工作。因此全面掌握蚊傳呼腸孤病毒的病原生物學(xué)特性、流行趨勢，對其媒介蚊蟲種類、分布及習(xí)性全面監(jiān)控和研究，才能有效應(yīng)對可能由該類病毒引發(fā)的疾病流行。

利益沖突：無