p16INK4a免疫組化染色、DNA倍體在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值

劉運(yùn)麟

貴州省黔南州人民醫(yī)院病理科 貴州都勻 558000

宮頸癌是目前常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，其發(fā)病率、死亡率位居女性惡性腫瘤中前兩位，近年來(lái)宮頸癌發(fā)病趨于年輕化。我國(guó)也為宮頸癌高發(fā)區(qū)，據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，我國(guó)每年姓曾發(fā)病數(shù)占全世界新發(fā)病例數(shù)的28.8%左右，死于宮頸癌者高達(dá)2 萬(wàn)多人，需要引起臨床重視[1]。對(duì)于宮頸癌的診斷在臨床中仍以宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為主，以往的傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢查到液基細(xì)胞薄層技術(shù)雖大大的提高了宮頸癌前病變以及宮頸癌檢出率，但對(duì)檢查結(jié)果的判斷依賴于臨床醫(yī)生經(jīng)驗(yàn)，也導(dǎo)致各研究結(jié)果報(bào)道數(shù)據(jù)差距大的原因之一。p16INK4a 蛋白檢測(cè)在各級(jí)上皮內(nèi)瘤病變中應(yīng)用廣泛，可有效提宮頸癌活檢的組織篩查準(zhǔn)確性。同時(shí)，利用DNA 倍體分析系統(tǒng)掃描，可分析細(xì)胞核內(nèi)DNA 含量改變情況，所得診斷結(jié)果較為客觀。基于此，本文旨在分析p16INK4a 免疫組化染色、DNA 倍體分析在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年4 月～2021 年3 月在本院行宮頸癌篩查者214 例為研究對(duì)象，年齡25～65 歲，平均年齡（38.51±5.47）歲，BIM（22.64±2.55）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）入選人員均知曉并同意本次研究；（2）均進(jìn)行p16INK4a免疫組化染色、DNA倍體分析；排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）為妊娠期或月經(jīng)期女性者；（2）近期有宮頸手術(shù)或子宮切除者；（3）存在有盆腔放射史者。

1.2 方法

1.2.1 p16 免疫組化染色

使用檢查專用的宮頸刷收集患者宮頸及頸管脫落細(xì)胞，使用放有保存液的標(biāo)本瓶中，做成薄層細(xì)胞圖片，進(jìn)行p16INK4a 免疫組化染色。使用深圳森盈生物科技公司全自動(dòng)免疫染色系統(tǒng)及抗體，已知陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照。所得結(jié)果由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)生進(jìn)行判讀，見(jiàn)表1。

表1 p16 免疫組化染色結(jié)果評(píng)估

1.2.2 DNA 倍體分析

收集宮頸及頸管脫落細(xì)胞，使用放有保存液的標(biāo)本瓶中，隨后做成薄層細(xì)胞圖片，利用Feulgen 染色染色，作為DNA 倍體分析用廈門麥克奧迪的試劑及醫(yī)療掃描診斷系統(tǒng)對(duì)經(jīng)處理好的標(biāo)本進(jìn)行掃描，在細(xì)胞片上需要收集上皮細(xì)胞核8000 個(gè)左右，測(cè)量積分光密度值，并以同標(biāo)本中100 個(gè)正常的二倍體細(xì)胞作為分光密度值參考值（異變系數(shù)低于5%），所測(cè)得細(xì)胞的分光密度值與參照細(xì)胞的平均分光密度值比較得到的比值為DNA 指數(shù)。通過(guò)檢測(cè)所得指數(shù)辨別正常與異常病變的細(xì)胞。DNA 指數(shù)在1.25～2.5 為增生或疑似病變細(xì)胞；DNA 指數(shù)超過(guò)2.5 為病變細(xì)胞。系統(tǒng)將自動(dòng)收集和保存每個(gè)掃描視野并形成圖片，每個(gè)視野的圖片、含有數(shù)個(gè)或數(shù)十個(gè)上皮細(xì)胞，每張圖片上只標(biāo)注最大的細(xì)胞DNA 指數(shù)，并按這些DNA 指數(shù)的大小將圖片從大NJJ，根據(jù)順序排列，由具有經(jīng)驗(yàn)的細(xì)胞病理醫(yī)生通過(guò)這些圖片進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷，診斷標(biāo)準(zhǔn)同樣按TBS 分類標(biāo)準(zhǔn)[2]。組織學(xué)病理診斷包括：正常/炎癥；CIN（宮頸上皮肉瘤變）根據(jù)由輕到低為CIN I、CN II、CIN III、原位癌；浸潤(rùn)癌。

1.3 觀察指標(biāo)

收集宮頸癌篩查者臨床診斷結(jié)果，以此為基準(zhǔn)分析p16 免疫組化染色、DNA 倍體分析在宮頸癌篩查中的，分析p16INK4a 免疫組化染色、DNA 倍體分析在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（）表示，兩兩比較使用t 檢驗(yàn)，均以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌篩查者臨床診斷結(jié)果

214 例宮頸癌篩查者經(jīng)臨床檢查、病理學(xué)檢查，診斷結(jié)果為：正常141 例；陽(yáng)性73 例（34.11%），分別為：CIN I 45 例，CNII 15 例，CIN III 7 例，原位癌3 例，浸潤(rùn)癌3 例。

2.2 p16 免疫組化染色檢查情況 見(jiàn)表2

表2 p16INK4a 免疫組化染色檢查情況（n，%）

2.3 DNA 倍體分析檢查情況 見(jiàn)表3

表3 DNA 倍體分析檢查情況（n，%）

2.4 不同檢查對(duì)宮頸病變?cè)\斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度 見(jiàn)表4

表4 不同檢查對(duì)宮頸病變?cè)\斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度[n(%)]

3 討論

宮頸癌是發(fā)生在子宮頸、宮頸管處的惡性腫瘤，早期進(jìn)行診斷治療是提高宮頸癌患者生存率重要手段。在發(fā)達(dá)國(guó)家中對(duì)宮頸癌癌前病變檢出率可達(dá)50%，在癌前篩查開(kāi)展后死亡率明顯降低。而發(fā)展中國(guó)家，癌前檢出率僅為5%，高達(dá)95%的女性篩查不充分或從未接觸過(guò)癌前篩查，在國(guó)內(nèi)有70%左右的女性并未接受過(guò)癌前篩查[3]。且早在2006 年世界衛(wèi)生組織就提議健康卡教育需成為宮頸癌全面防止的重要內(nèi)容。

P16 蛋白屬于基因編碼產(chǎn)物，存在于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)研究中均發(fā)現(xiàn)許多腫瘤患者中存在p16 基因缺失。在趙雪[4]等人研究也發(fā)現(xiàn)，p16、ki67 等因子與宮頸癌前病變以及宮頸癌的進(jìn)發(fā)生、發(fā)展存在密切的聯(lián)系，可為患者臨床分級(jí)、預(yù)后情況評(píng)估提供參考資料。在本研究中p16 免疫組化染色檢出陽(yáng)性率為38.31%與病理檢查結(jié)果相似，且發(fā)現(xiàn)隨著患者宮頸病變程度與p16INK4a 呈正比。

DNA 倍體分析技術(shù)可客觀、準(zhǔn)確的對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行分析，比傳統(tǒng)宮頸癌篩查手段更具有優(yōu)勢(shì)，可明確診斷指標(biāo)，所得結(jié)果更為客觀，在臨床中可與常規(guī)的細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)合，提高篩查準(zhǔn)確性[4]。在本研究中DNA 倍體分析檢查中陽(yáng)性86 例（40.18%），陰性128 例（59.81%），與病理檢查結(jié)果比較并無(wú)差異（χ2=1.691，P=0.193），與李貝[5]文獻(xiàn)研究結(jié)果相仿。有文獻(xiàn)研究指出，將細(xì)胞DNA 倍體技術(shù)與其他篩查手段聯(lián)合使用可提高臨床診斷準(zhǔn)確性以及篩查敏感性。

在本研究中發(fā)現(xiàn)p16INK4a 免疫組化染色以及DNA 倍體分析技術(shù)在宮頸癌篩查中均有較高的使用價(jià)值，p16INK4a 免疫組化染色對(duì)宮頸病變?cè)\斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為84.93%、83.56%、87.67%；DNA 倍體分析分別為80.82%、78.08%、84.93%；但兩者聯(lián)合診斷其靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度95.86%、98.63%、100.00%，明顯高于兩者單獨(dú)診斷（P<0.05），提示在臨床中為進(jìn)一步提高篩查精準(zhǔn)性，可使用兩者結(jié)合診斷。

綜上所述，p16INK4a 免疫組化染色、DNA 倍體分析在宮頸癌篩查中均有較高的應(yīng)用價(jià)值，兩者聯(lián)合對(duì)于不確定性診斷具有一定分流作用，有利于提高診斷準(zhǔn)確性，在宮頸癌早期篩查中應(yīng)用前景較廣。