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    不同鮮味物質(zhì)對(duì)干腌馬鮫魚(yú)鮮味的貢獻(xiàn)與比較分析

    2021-08-31 02:34:38黃煜燃趙文紅劉巧瑜白衛(wèi)東
    食品科學(xué) 2021年16期

    黃煜燃,汪 薇,趙文紅,楊 娟,劉巧瑜,白衛(wèi)東

    (仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院輕工食品學(xué)院,廣東 廣州 510225)

    馬鮫魚(yú)(Scomberomorus niphonius),類屬于鱸形目(Perciformes),鯖科(Scombridae),馬鮫屬(Scomberomorus),根據(jù)其種類可分為康氏馬鮫魚(yú)、藍(lán)點(diǎn)馬鮫魚(yú)、中華馬鮫魚(yú)、朝鮮馬鮫魚(yú)和斑點(diǎn)馬鮫魚(yú)等。一般分布于北太平洋西部,同時(shí)也廣泛存在于我國(guó)東海、黃海、渤海等海域,以黃海、渤海的產(chǎn)量最高,是我國(guó)重要的海洋經(jīng)濟(jì)魚(yú)類之一[1]。馬鮫魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高,含有豐富的優(yōu)質(zhì)蛋白、必需氨基酸、多不飽和脂肪酸、維生素和礦物質(zhì)等,因而備受消費(fèi)者青睞[2-3]。

    馬鮫魚(yú)的食用方式除了鮮食以外,還可以加工為腌制產(chǎn)品。腌制是水產(chǎn)品加工保藏最常用的方法之一,主要分為濕腌、干腌以及混合腌[4]。在國(guó)內(nèi),馬鮫魚(yú)一般采用干腌制法,但由于傳統(tǒng)的高鹽干腌制食品不利于人體健康,因此,近年來(lái)多采用低鹽干腌制法。低鹽干腌制法主要是用一定比例的鈉鹽(3%~6%)進(jìn)行腌制,隨后經(jīng)過(guò)1~5 d的風(fēng)干干燥工藝制作而成。此外,在干腌過(guò)程中也會(huì)添加其他輔料,如蔗糖和白酒等,以促進(jìn)風(fēng)味的產(chǎn)生。在腌制和風(fēng)干成熟過(guò)程中,原料肉中水分流失、水分活度降低,微生物活動(dòng)和組織內(nèi)蛋白酶活性被抑制,從而可實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品的長(zhǎng)時(shí)間保存[5]。另外,蛋白質(zhì)在微生物、組織蛋白酶、鈣酶和肽酶等的作用下會(huì)降解為大量的小分子肽和游離氨基酸,使腌魚(yú)制品具有特殊的咸鮮味[6-8]。

    由于目前鮮見(jiàn)對(duì)干腌馬鮫魚(yú)滋味的研究,而對(duì)于其他干腌魚(yú)如干腌鮐魚(yú)[9]、帶魚(yú)[10]、草魚(yú)[11]等滋味的研究結(jié)果顯示其鮮味多被認(rèn)為主要由鮮味氨基酸、核苷酸和鮮味有機(jī)酸賦予。因此,本實(shí)驗(yàn)以8 種不同加工工藝的干腌馬鮫魚(yú)為研究對(duì)象,采用高效液相色譜法對(duì)8 種干腌馬鮫魚(yú)常見(jiàn)的鮮味物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定,并結(jié)合滋味強(qiáng)度值(taste activity value,TAV)和味精當(dāng)量(equivalent umami concentration,EUC),分析并比較其鮮味物質(zhì)的貢獻(xiàn)和差異,以期為干腌馬鮫魚(yú)產(chǎn)品的改良和開(kāi)發(fā)提供一定的理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    8 種干腌馬鮫魚(yú)購(gòu)于不同產(chǎn)地廠家,分別編號(hào)為1~8號(hào),其加工工藝條件如表1所示。樣品經(jīng)冷凍密封箱運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后,去皮去骨,絞碎,分裝,于-18 ℃冰箱貯藏待用。

    表1 8 種干腌馬鮫魚(yú)加工工藝條件Table 1 Processing conditions for eight commercially available drycured Spanish mackerel

    5’-腺苷酸(adenosine 5’-monophosphate,5’-AMP)、5’-肌苷酸(inosine 5’-monophosphate,5’-IMP)、5’-鳥(niǎo)苷酸(guamosine 5’-monophosphate,5’-GMP)、肌苷(inosine,HxR)、次黃嘌呤(hypoxanthine,Hx)、乳酸、琥珀酸 美國(guó)Sigma公司;氨基酸混標(biāo)及衍生試劑 美國(guó)安捷倫科技有限公司;細(xì)胞色素C(12 384 Da)、抑酞酶(6 511 Da)、桿菌肽(1 423 Da)、氧化型谷胱甘肽(621 Da)、Gly-Gly-Gly(189 Da) 上海阿拉丁生化科技股份有限公司;其他試劑均購(gòu)于廣州化學(xué)試劑廠。

    1.2 儀器與設(shè)備

    HWS-12電熱恒溫水浴鍋 上海一恒科學(xué)儀器有限公司;1260型高效液相色譜儀 美國(guó)安捷倫科技有限公司;自動(dòng)化切向流過(guò)濾系統(tǒng) 瑞普利金(上海)生物科技有限公司公司;5810型高速冷凍離心機(jī) 艾本德中國(guó)有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 干腌馬鮫魚(yú)的感官評(píng)定

    感官評(píng)定小組由實(shí)驗(yàn)室的11 名專業(yè)評(píng)價(jià)成員(5 名男性和6 名女性)組成。評(píng)定前,對(duì)他們進(jìn)行5 種基本味感(即酸味、甜味、苦味、咸味和鮮味)和濃厚味的感官適應(yīng)性培訓(xùn)。濃厚味是指食品中如濃厚感、豐富度、持續(xù)性、協(xié)調(diào)性和飽滿圓潤(rùn)等一種綜合性的味覺(jué)感受,參考Zhang Ninglong等[12]的方法,以谷胱甘肽的味感作為濃厚味培訓(xùn)標(biāo)準(zhǔn)。感官評(píng)定在溫度為(25±2)℃的感官評(píng)定室進(jìn)行,感官評(píng)分設(shè)定為1~10 分,其中1 分代表無(wú)味,5 分代表味感適中,10 分代表味感強(qiáng)烈。

    1.3.2 乳酸和琥珀酸的測(cè)定

    參照Chen Dewei等[13]的方法并略作修改,準(zhǔn)確稱取10.00 g碎肉,加入40 mL去離子水,于高速分散器10 000 r/min勻質(zhì)1 min,重復(fù)3 次,8 200×g離心15 min,取上清液,過(guò)0.22 μm水系濾膜,待測(cè)。

    色譜柱采用ZORBAX SB-Aq(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動(dòng)相A為甲醇,流動(dòng)相B為0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH 2.8);流動(dòng)相A和B的比例為3∶97,等度洗脫,流速0.8 mL/min,進(jìn)樣量10 μL,柱溫30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm。

    1.3.3 核苷酸及其降解產(chǎn)物的測(cè)定

    參照Ryder[14]的方法并略作修改。準(zhǔn)確稱取10.00 g碎魚(yú)肉,加入已預(yù)冷的30 mL 5% HClO4溶液,用高速分散器勻質(zhì)3 次(10 000 r/min,3×1 min),4 ℃、8 200×g離心15 min,取上清液,沉淀物再用10 mL相同濃度的HClO4重復(fù)以上步驟,合并2 次上清液,用5 mol/L KOH溶液調(diào)pH值至6.5,然后過(guò)0.22 μm水系濾膜,待測(cè)。

    色譜柱采用ZIC?-HILIC(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動(dòng)相A為5 mmol/L磷酸二氫鉀(pH 5.3),流動(dòng)相B為乙腈溶液;洗脫程序?yàn)?0%流動(dòng)相A和80%流動(dòng)相B等度洗脫,流速為1 mL/min,進(jìn)樣量10 μL,柱溫30 ℃,波長(zhǎng)254 nm。

    1.3.4 游離氨基酸的測(cè)定

    準(zhǔn)確稱取5.00 g樣品,添加15 mL 5 g/100 mL三氯乙酸,均質(zhì),定容到25 mL,超聲30 min,放置1 h后,取濾液1 mL于1.5 mL離心管中,12 800×g離心10 min,用0.22 μm水系濾膜過(guò)濾。采用Agilent自動(dòng)在線衍生的方法,用高效液相色譜儀分析。

    1.3.5 肽分子質(zhì)量分布的測(cè)定

    參照莫加利等[15]的方法略作修改。準(zhǔn)確稱取10.00 g碎肉,加入去離子水,于高速分散器10 000 r/min勻質(zhì)1 min,重復(fù)3 次,在魚(yú)肉與水的比例1∶4(g/mL),溫度40 ℃條件下水浴提取120 min,8 200×g離心15 min,取上清液,過(guò)0.22 μm水系濾膜,待測(cè)。

    色譜柱采用TSKGel-G2000-SWXL(7.8 mm×300 mm);流動(dòng)相為乙腈-水-三氟乙酸(40∶60∶0.1,V/V),流速0.5 mL/min,進(jìn)樣量20 μL,柱溫30 ℃,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm。相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)值與洗脫時(shí)間擬合直線方程為y=-0.506 8x+15.757(R2=0.969 7),其中,y為標(biāo)準(zhǔn)肽分子質(zhì)量的對(duì)數(shù);x為保留時(shí)間。

    1.3.6 呈味肽的提取與超濾分級(jí)

    采用溫水法[16]提取呈味肽,取粉碎均勻的魚(yú)肉100.00 g,在魚(yú)肉與水的比例1∶4(g/mL)、溫度40 ℃、時(shí)間120 min條件下提取,2 000×g離心15 min,取上清液,即為其呈味肽提取液。

    用自動(dòng)化切向流過(guò)濾系統(tǒng),用中空纖維過(guò)濾膜柱,將呈味肽提取液按分子質(zhì)量的大小分級(jí)超濾濃縮,得到分子質(zhì)量區(qū)間為5~10、3~5、1~3 kDa和小于1 kDa四個(gè)組分。

    1.3.7 TAV及EUC的計(jì)算

    TAV[17]按式(1)計(jì)算:

    式中:C為滋味物質(zhì)的含量/(mg/100 g);T為滋味物質(zhì)的味道閾值/(mg/100 g)。

    若TAV>1,則可以認(rèn)為該物質(zhì)對(duì)樣品的滋味有重要貢獻(xiàn),若TAV<1,則可以認(rèn)為該物質(zhì)對(duì)樣品貢獻(xiàn)不大。

    EUC[18]按式(2)計(jì)算:

    式中:EUC按每100 g樣品含谷氨酸鈉(monosodium glutamate,MSG)質(zhì)量計(jì)/(g/100 g);1 218為協(xié)同作用系數(shù);ai為鮮味氨基酸(Asp、Glu)的含量/(g/100 g);bi為鮮味氨基酸相對(duì)于MSG的相對(duì)鮮度系數(shù)(Asp為0.077,Glu為1);aj為呈味核苷酸(5’-AMP、5’-IMP、5’-GMP)的含量/(g/100 g);bj為呈味核苷酸相對(duì)于5’-IMP的相對(duì)鮮度系數(shù)(5’-AMP為0.8,5’-IMP為1,5’-GMP為2.3)。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和相關(guān)性分析,采用Origin 8.6軟件作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 干腌馬鮫魚(yú)的基本味感分析

    為了確認(rèn)干腌馬鮫魚(yú)的基本味感特性,將8 種樣品在不添加任何調(diào)味品的條件下進(jìn)行蒸煮,并對(duì)5 種基本味感和濃厚味進(jìn)行感官評(píng)價(jià)。如圖1所示,咸、鮮味和濃厚味是8 種市售干腌馬鮫魚(yú)的主要滋味,而不同樣品間咸味、甜味、苦味和酸味的滋味強(qiáng)度存在顯著差異,且其差異性與工藝條件的差異密切相關(guān)。其中,風(fēng)干時(shí)間為5 d的樣品苦味高于風(fēng)干時(shí)間1 d的樣品;而風(fēng)干時(shí)間1 d的樣品咸、鮮味和濃厚味感則高于風(fēng)干時(shí)間5 d的樣品。這可能是風(fēng)干時(shí)間較長(zhǎng),水分流失,鹽含量逐漸增加,細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞,釋放了體內(nèi)的活性酶,使蛋白的水解程度更高,從而增加了產(chǎn)品的苦味肽含量[19]。此外,調(diào)味品的添加對(duì)其味道有顯著影響,如在加工過(guò)程中添加蔗糖的4號(hào)樣品甜味、鮮味和濃厚味感呈味得分均最高,而在加工過(guò)程中添加白酒的5號(hào)樣品則呈現(xiàn)出輕微的酸味。

    圖1 8 種樣品的感官評(píng)定雷達(dá)圖Fig. 1 Sensory evaluation radar chart of eight samples

    2.2 乳酸和琥珀酸對(duì)干腌馬鮫魚(yú)滋味的影響

    乳酸和琥珀酸除了分別是酸味和鮮味的載體外,還能夠協(xié)同其他物質(zhì)起到增強(qiáng)呈味的作用,是水產(chǎn)品重要的滋味物質(zhì)之一[20-21]。參考文獻(xiàn)[22]中報(bào)道的呈味特征和閾值,對(duì)乳酸和琥珀酸的含量進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果如表2所示。干腌馬鮫魚(yú)樣品中并未檢出琥珀酸,而均檢出乳酸,且乳酸呈味TAV均大于1,說(shuō)明對(duì)干腌馬鮫魚(yú)的酸味和增味效果有直接貢獻(xiàn)。此外,除5號(hào)樣品外,6~8號(hào)樣品的乳酸含量顯著高于1~4號(hào)樣品,說(shuō)明長(zhǎng)時(shí)間的風(fēng)干工藝可能有助于乳酸的積累;4號(hào)樣品中的乳酸含量顯著低于其他樣品,而5號(hào)樣品中的乳酸含量則顯著低于同類型樣品,表示蔗糖和白酒的添加會(huì)抑制乳酸的產(chǎn)生。

    表2 8 種樣品的乳酸和琥珀酸含量Table 2 Lactic acid and succinic acid contents of eight samples

    2.3 核苷酸及其降解產(chǎn)物對(duì)干腌馬鮫魚(yú)滋味的影響

    魚(yú)類死亡后,肌肉中的三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)在內(nèi)源性酶和細(xì)菌肌苷核苷酶的共同作用下,會(huì)降解為相關(guān)的化合物(圖2)。一般認(rèn)為,5’-AMP和5’-IMP是魚(yú)類重要的鮮味成分,能夠顯著提高食品的鮮味[23]。此外,IMP的降解產(chǎn)物也是魚(yú)類風(fēng)味的重要指標(biāo),當(dāng)IMP降解為Hx時(shí),會(huì)產(chǎn)生苦味,對(duì)魚(yú)肉的品質(zhì)有一定的影響[24]。

    圖2 魚(yú)類死亡后體內(nèi)ATP降解途徑Fig. 2 Pathways of ATP degradation in fish after death

    由表3可知,8 種干腌馬鮫魚(yú)樣品均未檢測(cè)到核苷酸,而不同程度上檢測(cè)到了HxR和Hx,說(shuō)明干腌馬鮫魚(yú)中的核苷酸已降解為HxR和Hx,且Hx含量顯著高于HxR。這可能是因?yàn)锳TP降解為IMP的過(guò)程十分迅速,一般在魚(yú)體死亡后的數(shù)小時(shí)內(nèi)達(dá)到最大值,隨后便會(huì)在磷酸水解酶和核苷酶的作用下逐漸脫去磷酸和核糖而降解生成Hx[25]。此外,溫度對(duì)IMP的降解也會(huì)產(chǎn)生一定的影響。Kuda等[26]研究發(fā)現(xiàn),魚(yú)類IMP含量隨著溫度的升高而逐漸下降。本研究中干腌馬鮫魚(yú)的干腌法工藝條件一般需要長(zhǎng)時(shí)間腌制和風(fēng)干,且已經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的貯藏,這些條件均會(huì)導(dǎo)致干腌魚(yú)中的IMP降解為HxR和Hx。除此之外,5、7號(hào)和8號(hào)樣品的Hx含量顯著高于1~4號(hào)樣品,說(shuō)明長(zhǎng)時(shí)間的風(fēng)干可能有助于魚(yú)肉中核苷酸的降解;這也是導(dǎo)致其苦味味感較為明顯的原因之一,與圖1結(jié)果吻合。

    表3 8 種樣品的核苷酸及其降解產(chǎn)物含量Table 3 Contents of nucleotides and their degradation products in eight samples mg/100 g

    2.4 游離氨基酸對(duì)干腌馬鮫魚(yú)滋味的影響

    游離氨基酸是水產(chǎn)品及其加工制品的主要呈味物質(zhì)之一,其種類及含量會(huì)直接影響水產(chǎn)品的滋味特性,其中,谷氨酸和天冬氨酸被認(rèn)為是水產(chǎn)品的主要鮮味物質(zhì)之一。如表4所示,樣品中谷氨酸的TAV大于1(除3、5、7號(hào)),而天冬氨酸的TAV均小于1,說(shuō)明干腌馬鮫魚(yú)中的谷氨酸是影響其鮮味的主要氨基酸,但谷氨酸和天冬氨酸能與NaCl產(chǎn)生協(xié)同增效作用,從而提升鮮味味感[29]。同樣地,其他氨基酸如精氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸等苦味氨基酸在低于其閾值時(shí)也能增加呈味復(fù)雜性,并提高谷氨酸的鮮味強(qiáng)度[30-31]。此外,除添加了蔗糖的4號(hào)樣品中總游離氨基酸和谷氨酸含量均高于其他樣品外,風(fēng)干時(shí)間對(duì)總游離氨基酸的影響不顯著,表明蔗糖的添加對(duì)鮮味氨基酸的生成有促進(jìn)作用。Zhang Jinjie等[11]通過(guò)對(duì)比草魚(yú)干腌制過(guò)程中加入香辛料花椒和蔗糖對(duì)游離氨基酸的影響,同樣發(fā)現(xiàn)了蔗糖的添加有利于鮮味氨基酸的生成。

    2.5 干腌馬鮫魚(yú)的EUC及味感分析

    由表4可知,8 種樣品的EUC介于0.02~0.46 g/100 g之間。結(jié)合味精的閾值(0.03 g/100 g)計(jì)算可得,4號(hào)樣品EUC的TAV遠(yuǎn)大于1,具有明顯的鮮味特性,與圖1結(jié)果一致;其余樣品EUC的TAV均約等于1,說(shuō)明鮮味味感較弱。此結(jié)果與感官評(píng)價(jià)結(jié)果不吻合,其可能的原因是干腌馬鮫魚(yú)樣品中還存在其他鮮味物質(zhì),如鮮味肽等。目前研究認(rèn)為,分子質(zhì)量小于3 000 Da的寡肽具有一定的呈味效果,而小于1 000 Da的小分子肽具有顯著的鮮味特性和增鮮效果[32-33],是多數(shù)水產(chǎn)品的主要滋味貢獻(xiàn)者,如肌肽、鵝肌肽和鯨肌肽等[34-36]。由于目前鮮見(jiàn)對(duì)干腌魚(yú)制品中鮮味肽的研究,因此,為了進(jìn)一步確定干腌馬鮫魚(yú)的主要鮮味貢獻(xiàn)者,本實(shí)驗(yàn)對(duì)干腌魚(yú)樣品中的小分子肽組分進(jìn)行感官評(píng)定和肽分子質(zhì)量分布測(cè)定。

    表4 8 種樣品的游離氨基酸含量Table 4 Free amino acid contents of eight samples

    2.6 超濾組分鮮厚味評(píng)價(jià)與樣品肽分子質(zhì)量分布分析

    通過(guò)超濾對(duì)干腌馬鮫魚(yú)的不同肽段進(jìn)行截留,并進(jìn)行感官評(píng)價(jià),結(jié)果如表5所示,隨著肽分子質(zhì)量的減小,所有樣品的鮮味和濃厚味逐漸突出,小于1 000 Da的肽段具有較高的鮮味和濃厚味得分,表明這部分肽段具有鮮味物質(zhì)如鮮味氨基酸或鮮味肽等。而分子質(zhì)量在1 000~3 000 Da部分肽段具有第2高的鮮味和濃厚味呈味得分,則暗示具有鮮味肽的存在。此外,可以看出5~8號(hào)樣鮮味得分高于1~4號(hào)樣,又結(jié)合肽分子質(zhì)量分布的結(jié)果(圖3)可知,5~8號(hào)中小于1 000 Da的肽段占比顯著高于1~4號(hào)樣,說(shuō)明干腌馬鮫魚(yú)中的蛋白質(zhì)在干腌過(guò)程中存在降解情況,且長(zhǎng)時(shí)間的風(fēng)干可能有助于小分子肽的積累,促使鮮味肽的產(chǎn)生[37]。

    圖3 8 種樣品的肽分子質(zhì)量分布Fig. 3 Peptide molecular mass distribution of eight samples

    表5 超濾組分鮮味和濃厚味感官評(píng)分結(jié)果Table 5 Sensory scores for umami and kokumi taste of ultrafiltration components

    3 結(jié) 論

    不同加工工藝的干腌馬鮫魚(yú)鮮味物質(zhì)的含量和組成存在一定差異性,這會(huì)對(duì)干腌馬鮫魚(yú)的滋味特性產(chǎn)生不同程度的影響。經(jīng)過(guò)感官評(píng)價(jià),8 種干腌馬鮫魚(yú)均呈現(xiàn)出明顯的咸、鮮味和濃厚味感。通過(guò)對(duì)干腌馬鮫魚(yú)中游離氨基酸、有機(jī)酸和核苷酸的檢測(cè),以及呈味肽提取液的肽分子質(zhì)量分布及超濾組分感官分析可知,賦予干腌馬鮫魚(yú)鮮味的主要物質(zhì)是谷氨酸和小于1 000 Da的小分子鮮味肽。長(zhǎng)時(shí)間的風(fēng)干工藝,可能會(huì)增加產(chǎn)品的咸味和苦味味感,并能促使乳酸和Hx等產(chǎn)物的積累;腌制時(shí)添加的蔗糖和白酒等輔料能抑制乳酸的產(chǎn)生,且蔗糖能在一定程度上促進(jìn)谷氨酸等鮮味氨基酸的形成。可見(jiàn),加工工藝及輔料可能會(huì)影響干腌馬鮫魚(yú)滋味的形成。本研究探討了賦予干腌馬鮫魚(yú)鮮味的主要貢獻(xiàn)物質(zhì),為進(jìn)一步研究干腌馬鮫魚(yú)的滋味調(diào)控提供了一定的理論支撐。

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