子宮內(nèi)膜異位癥患者體內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)及其與IVF-ET的相關(guān)性研究

高子軒，羅小婉，欒 峰，孫廣范，劉佳杰，尚 雪

(中山市博愛醫(yī)院 1.婦科，2.生殖中心，廣東 中山 528400)

子宮內(nèi)膜異位癥是臨床常見的婦科疾病，是由于各種原因引起的內(nèi)膜細(xì)胞種植在子宮內(nèi)膜外，患者臨床表現(xiàn)包括痛經(jīng)、性交痛、不孕癥等，部分女性甚至要借助輔助生殖技術(shù)(assisted reproductive technology，ART)完成生育問題[1]。然而，此類患者接受ART時(shí)易發(fā)生卵巢低反應(yīng)、胚胎低植入率及低妊娠率等。氧化應(yīng)激(oxidative stress，OS)與衰老、慢性炎癥有關(guān)。活性氧(reactive oxygen species，ROS)在機(jī)體內(nèi)蓄積后會加劇氧化應(yīng)激反應(yīng)，而氧化應(yīng)激在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制和病情進(jìn)展中起重要作用。ROS可促進(jìn)腹腔內(nèi)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的黏附和生長，進(jìn)而導(dǎo)致子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生和發(fā)展[2]。但是目前國內(nèi)外關(guān)于氧化應(yīng)激標(biāo)記物在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的表達(dá)及其與妊娠結(jié)局的關(guān)系報(bào)道較少。因此，本文探討了ROS及其相關(guān)的氧化產(chǎn)物丙二醛(malondialdehyde，MDA)、總抗氧化能力(total antioxidant capacity，TAC)在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的表達(dá)及其與體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)的相關(guān)性，報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1研究對象

選擇2018年7月至2020年6月就診于中山市博愛醫(yī)院婦科的子宮內(nèi)膜異位癥術(shù)后不孕癥患者50例設(shè)為觀察組，患者經(jīng)開腹或腹腔鏡術(shù)后病理診斷確診為內(nèi)異癥?；颊吣挲g22～34歲，平均(30.69±4.34)歲，不孕年限1～6年，平均(3.23±0.51)年，身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)18.5～23.9 kg/m2，平均(21.32±2.95)kg/m2，平均血清抗苗勒氏管激素(anti-Mullerian hormone，AMH)水平(2.29±0.68)ng/mL。選擇同期治療的輸卵管不孕癥20例為對照組，年齡21～33歲，平均(31.11±4.37)歲；不孕年限1～7年，平均(3.29±0.57)年；BMI(18.9～23.6)kg/m2，平均(22.07±2.98)kg/m2；平均血清AMH水平(2.53±0.61)ng/mL。所有入選對象排除甲狀腺疾病異常、腎上腺疾病、免疫系統(tǒng)疾病、卵巢儲備功能降低、男方精液異常、術(shù)前6個(gè)月使用激素類藥物或抗氧化藥物等，兩組患者基本臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法

兩組患者均接受IVF-ET，具體方法如下：取卵操作完畢后于卵泡液中確定卵-冠-丘復(fù)合物，并將其轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)卵母細(xì)胞成熟分型、處理精液并完成共同培養(yǎng)，16～18h受精后完成效果評估。受精24h評估受精卵卵裂情況，在取卵后3～5d進(jìn)行胚胎評級評估，并將1～2枚胚胎移植入宮腔內(nèi)，兩組患者均給予黃體支持治療。于移植術(shù)后第12～14d查血人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，hCG)以確定是否妊娠，妊娠者繼續(xù)黃體支持治療直至移植后7～8周停藥。移植后4周時(shí)采用陰道B超檢查以確定患者是否宮內(nèi)妊娠，移植后12周B超檢查胎兒發(fā)育狀況。

1.3觀察指標(biāo)

①氧化應(yīng)激標(biāo)記物測定，兩組患者均于取卵日空腹抽血并留取卵泡液，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測定ROS、MDA及TAC濃度；②分析子宮內(nèi)膜異位癥患者IVF-ET結(jié)局(包括獲卵數(shù)、成熟卵率、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率、臨床妊娠率)與ROS、MDA、TAC的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究獲得的數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，子宮內(nèi)膜異位癥患者IVF-ET結(jié)局與氧化應(yīng)激標(biāo)記物的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，以P<0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組患者氧化應(yīng)激標(biāo)志物濃度比較

觀察組血清和卵泡液中ROS、MDA濃度均顯著高于對照組(P<0.05)，而TAC濃度均顯著低于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者氧化應(yīng)激標(biāo)志物比較

2.2兩組患者IVF-ET結(jié)局比較

觀察組成熟卵率、受精率均顯著低于對照組(P<0.05)，而兩組平均獲卵數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率、臨床妊娠率比較差異均無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)，見表2。

表2 兩組患者IVF-ET結(jié)局比較

2.3子宮內(nèi)膜異位癥患者IVF-ET結(jié)局與血清氧化應(yīng)激標(biāo)記物的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果表明子宮內(nèi)膜異位癥患者血清ROS、MDA均與成熟卵率、受精率呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，而血清TAC均與成熟卵率、受精率呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，血清氧化應(yīng)激標(biāo)記物與其他IVF-ET指標(biāo)均無顯著相關(guān)性(P>0.05)，見表3。

表3 子宮內(nèi)膜異位癥患者IVF-ET結(jié)局與氧化應(yīng)激標(biāo)記物的相關(guān)性分析

3討論

3.1子宮內(nèi)膜異位癥對女性生育的影響

子宮內(nèi)膜異位癥雖為良性病變，但具有侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)行為，其是一種雌激素依賴的盆腔炎疾病，特征是子宮內(nèi)膜組織(腺體和間質(zhì))在子宮腔外著床和生長[3]。目前國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為該病的病因和發(fā)病機(jī)制主要基于三種理論：月經(jīng)逆行、體腔化生和誘導(dǎo)理論[4]。研究報(bào)道機(jī)體的免疫系統(tǒng)紊亂以及炎性介質(zhì)的增多可能參與了內(nèi)異癥的發(fā)病，而卵巢微環(huán)境和卵泡液中適宜的ROS 濃度對于卵泡發(fā)育起重要作用[5-6]。隨著子宮內(nèi)膜異位癥病情的進(jìn)展，盆腔可出現(xiàn)異位結(jié)節(jié)，臨床表現(xiàn)為慢性盆腔痛和性交痛[7]。此外，內(nèi)異癥還可引起盆腔粘連，甚至波及輸卵管而導(dǎo)致不孕癥。部分女性子宮內(nèi)膜異位于卵巢形成囊腫，或因卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫手術(shù)而影響卵巢功能，導(dǎo)致卵巢儲備功能下降和IVF-ET中卵巢低反應(yīng)。子宮內(nèi)膜異位癥患者的盆腔微環(huán)境發(fā)生改變，卵母細(xì)胞的發(fā)育和成熟障礙，引起受精率下降。因此，子宮內(nèi)膜異位癥對女性生育有很大影響。

3.2氧化應(yīng)激與子宮內(nèi)膜異位癥生育關(guān)系

雖然細(xì)胞已發(fā)展出廣泛的抗氧化系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶等，以限制活性氧的產(chǎn)生，進(jìn)而修復(fù)細(xì)胞損傷。然而，當(dāng)ROS的產(chǎn)生和抗氧化防御之間的平衡被破壞時(shí)，氧化應(yīng)激可能發(fā)生。巨噬細(xì)胞、紅細(xì)胞和凋亡的子宮內(nèi)膜組織通過逆行月經(jīng)移植到腹膜腔是眾所周知的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)物，故腹膜ROS的產(chǎn)生可能與內(nèi)異癥有關(guān)。ROS可以激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn)異位內(nèi)膜細(xì)胞侵襲和生長，引起炎癥反應(yīng)。氧化應(yīng)激時(shí)巨噬細(xì)胞還可以產(chǎn)生過量的脂質(zhì)過氧化物，加重氧化應(yīng)激過程產(chǎn)生更多的ROS，同時(shí)促使炎性因子水平升高，進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)異癥患者的疼痛及不孕癥狀。此外，研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激與多種婦科疾病發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，包括盆腔炎性疾病、多囊卵巢綜合征、卵巢早衰、子宮內(nèi)膜異位癥和婦科腫瘤等[8-10]。ROS屬于氧代謝產(chǎn)物之一，其表達(dá)水平升高將會加劇細(xì)胞損傷。TAC則能削弱生物酶活性，降低脂質(zhì)含量，避免細(xì)胞受到毒害。當(dāng)人體內(nèi)ROS含量過高或TAC明顯下降時(shí)，則會加劇氧化應(yīng)激反應(yīng)，造成糖化氧化、DNA損傷，嚴(yán)重者將會引起蛋白質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成細(xì)胞凋亡。而MDA是膜脂過氧化較為重要的產(chǎn)物，其表達(dá)水平能加劇膜的損傷。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)觀察組血清和卵泡液中氧化應(yīng)激標(biāo)記物ROS、MDA濃度均顯著高于對照組，而TAC濃度均顯著低于對照組，提示子宮內(nèi)膜異位癥患者體內(nèi)氧化應(yīng)激顯著高于對照組，而抗氧化應(yīng)激能力顯著低于對照組。此外，本研究還比較了兩組患者IVF-ET相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果顯示觀察組成熟卵率、受精率均顯著低于對照組，且Pearson相關(guān)性分析結(jié)果表明子宮內(nèi)膜異位癥患者血清ROS、MDA均與成熟卵率、受精率呈顯著負(fù)相關(guān)，而血清TAC均與成熟卵率、受精率呈顯著正相關(guān)，以上研究結(jié)果提示氧化應(yīng)激標(biāo)記物在子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和卵泡液中濃度異常，且與IVF-ET中成熟卵率、受精率具有顯著相關(guān)性，最終影響內(nèi)異癥患者的生育，且主要影響該類患者成熟卵率和受精率。Goud等于2014年研究報(bào)道氧化應(yīng)激可誘發(fā)卵巢損傷，內(nèi)異癥患者的顆粒細(xì)胞比對照組表現(xiàn)出更多的DNA氧化損傷跡象，該病婦女的顆粒細(xì)胞凋亡小體和酪氨酸的發(fā)生率高于對照組，且此類患者的卵巢皮質(zhì)也會受到氧化應(yīng)激的損傷。和儒林等[11]研究報(bào)道子宮內(nèi)膜異位癥患者常伴有氧化應(yīng)激反應(yīng)升高，導(dǎo)致卵巢微環(huán)境發(fā)生改變，進(jìn)而影響卵子的質(zhì)量、胚胎的發(fā)育。韓彥潔等[12]研究報(bào)道內(nèi)異癥患者易發(fā)生氧化應(yīng)激，且合并不孕者ROS異常引起的氧化應(yīng)激紊亂可能與其IVF-ET妊娠結(jié)局不良有關(guān)，以上文獻(xiàn)報(bào)道與本研究結(jié)果相似。

綜上所述，氧化應(yīng)激標(biāo)記物在子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和卵泡液中濃度異常，且與IVF-ET中成熟卵率、受精率具有顯著相關(guān)性，值得臨床關(guān)注。