柿葉黃酮口服片制備工藝研究

李書啟，石青浩，韓希鳳，姜子濤，2*

（1.天津天獅學(xué)院食品工程學(xué)院，天津 301700；2.天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院，天津 300134）

柿葉為柿樹科柿樹屬植物柿（Diospyros kaki L.f.）的新鮮或干燥葉[1]。我國柿樹有50多種[2]，是世界上最主要的柿樹生產(chǎn)國。柿葉資源豐富，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)療保健作用，因此引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注，國內(nèi)外對柿葉的化學(xué)成分和功效作用做了大量研究。柿葉中含有豐富的維生素C、有機(jī)酸、多種氨基酸和微量元素等營養(yǎng)成分，以及黃酮類化合物、三萜類化合物、香豆素類、植物甾醇類等功效成分[3-7]。研究表明，柿葉具有抗菌消炎、生津止渴、潤肺強(qiáng)心、鎮(zhèn)咳止血等功效[8-10]。隨著提取分離技術(shù)的發(fā)展，在柿葉中，發(fā)現(xiàn)了多種黃酮類化合物[11]。在柿葉多種活性物質(zhì)的開發(fā)中，含量較高、最具研究價(jià)值的是黃酮類物質(zhì)[12]。柿葉黃酮有抗過敏、抗氧化、抗炎、抑菌、抗腫瘤、降血壓、降血脂、保肝和增強(qiáng)免疫力等多種作用[13-16]。目前，以柿葉原葉為原料開發(fā)出柿葉飲料[17]、柿葉晶[18]、柿葉茶[19-20]、柿葉蛋糕[21]等，尚未見以柿葉功效成分提取物為原料制備口服片劑的相關(guān)報(bào)道。

本研究采用超聲微波協(xié)同萃取法提取柿葉中的活性成分，并以柿葉提取物為原料，制成片劑產(chǎn)品，提高產(chǎn)品中活性成分的含量，為消費(fèi)者提供一種方便、快捷的功能性食品，且提高柿葉利用率，減少資源的浪費(fèi)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮柿葉：天津薊州區(qū)；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：中國食品藥品檢定研究院；氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、無水乙醇（均為分析純）：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；β-環(huán)糊精、檸檬酸、甘露醇、淀粉（均為食品級）：上海申光食用化學(xué)品有限公司；交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸鎂、食用酒精（均為食品級）：天津市博迪化工有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

CW-2000微波-超聲協(xié)同萃取儀：上海新拓分析儀器科技有限公司；UV1000紫外可見分光光度計(jì)：上海天美科學(xué)儀器有限公司；RE-1001VH旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；BSA 124S精密電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；DZ-2BE真空干燥箱：天津泰斯特儀器有限公司；FW-4A粉末壓片機(jī)：天津市拓普儀器有限公司；YD-35片劑硬度儀、FT-2000AE脆碎度檢查儀、ZB-1E智能崩解儀：天津市天大天發(fā)科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 柿葉提取物片劑制備工藝

新鮮柿葉→清洗→干燥→粉碎→過篩→柿葉粉→微波-超聲協(xié)同萃取→提取物→濃縮→干燥→粉碎過篩→柿葉黃酮干粉+輔料（填充劑、崩解劑等）→混合均勻→制軟材→造粒→干燥+輔料（潤滑劑）→壓片→成品→滅菌→粗包裝

1.3.2 柿葉黃酮的提取及干粉制備

干燥柿葉粉與70%食用酒精以固液比1∶45(g/mL)混合，置于微波-超聲協(xié)同萃取儀，在功率700 W、溫度45℃的條件下，提取25 min。在60℃下，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液蒸發(fā)濃縮，濃縮液于真空干燥箱中干燥15 h后，粉碎過100目標(biāo)準(zhǔn)篩，即得到柿葉黃酮干粉。

1.3.3 黃酮含量測定

黃酮含量測定采用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線法[22]。

1.3.4 柿葉黃酮口服片制備

1.3.4.1 制軟材與造粒

將主料柿葉黃酮干粉及輔料β-環(huán)糊精、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、甘露醇、檸檬酸、淀粉過100目篩。將輔料依次加入主料中，混合均勻，邊加輔料邊用食用酒精作為潤濕劑，不斷攪拌，使其潤濕均勻，調(diào)整物料濕度，制成手捏成團(tuán)、輕壓則散的軟材。將制好的軟材過20目標(biāo)準(zhǔn)篩，制得濕顆粒。

1.3.4.2 干燥

制好的濕顆粒均勻平鋪于托盤中，顆粒層厚度2 cm～3 cm，55℃干燥1 h，每隔15 min翻動一次，以加快干燥速度并保證干燥均勻，至含水量3%以下即可。

1.3.4.3 壓片、滅菌、包裝

將干燥后顆粒再次過篩、整粒，混入一定量的潤滑劑硬脂酸鎂，放入壓片機(jī)進(jìn)行壓片。將壓好的片劑于紫外燈下照射15 min，包裝得到成品。

1.3.5 感官評價(jià)

由15位感官評審員組成評定小組，根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)（表1），分別對柿葉黃酮口服片的色澤、組織形態(tài)、口感、風(fēng)味進(jìn)行綜合評分，采用輕松感官分析系統(tǒng)5.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。感官評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 感官評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Sensory evaluation criteria

1.3.6 柿葉黃酮口服片配方優(yōu)化

經(jīng)預(yù)試驗(yàn)篩選β-環(huán)糊精、淀粉作為片劑填充劑，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮作為崩解劑，硬脂酸鎂作為潤滑劑。因柿葉黃酮提取物有苦澀味，因此添加甘露醇和檸檬酸作為矯味劑。

為提高口服片的感官品質(zhì)，通過單因素試驗(yàn)，考察主輔料添加量對口服片感官品質(zhì)的影響。固定β-環(huán)糊精、甘露醇、檸檬酸、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸鎂的添加量分別為9%、20%、3%、7%、1.5%，補(bǔ)充淀粉，考察分別添加15%、20%、25%、30%、35%柿葉黃酮干粉對片劑感官品質(zhì)和黃酮含量的影響。固定主料及其它輔料添加量，考察分別添加6%、9%、12%、15%、18%的 β-環(huán)糊精，10%、15%、20%、25%、30%的甘露醇，1%、2%、3%、4%、5%的檸檬酸，0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%的硬脂酸鎂，對片劑感官品質(zhì)的影響。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，優(yōu)化片劑的配方。

1.3.7 柿葉黃酮口服片質(zhì)量分析

參照2020版藥典[23]，分別對提取物片劑進(jìn)行片重差異、硬度、脆碎度、崩解時(shí)限的檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 柿葉提取物中的黃酮含量

采用超聲微波協(xié)同萃取技術(shù)提取柿葉中黃酮類物質(zhì)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到曲線方程為y=16.87x+0.000 4（R2=0.999 7），通過計(jì)算，得到柿葉中黃酮類物質(zhì)的提取率為7.95%。

2.2 柿葉黃酮口服片配方優(yōu)化

2.2.1 主輔料添加量對柿葉黃酮口服片感官品質(zhì)的影響

2.2.1.1 柿葉黃酮干粉添加量的考察

柿葉黃酮干粉添加量對片劑中黃酮含量及感官品質(zhì)的影響見圖1。

圖1 柿葉黃酮干粉添加量對片劑中黃酮含量及感官品質(zhì)的影響Fig.1 Effects of supplemental amount of flavonoids in persimmon leaves on flavonoids content and sensory quality of tablets

由圖1可以看出，隨著柿葉黃酮干粉添加量的增加，片劑中功效成分黃酮類物質(zhì)的含量隨之增加。但由于柿葉黃酮提取物呈苦澀味道，是片劑口感、風(fēng)味的主要影響因素。當(dāng)柿葉黃酮干粉添加量為25%及以上時(shí)，片劑苦澀味加重，風(fēng)味不好；當(dāng)添加量增加到35%，片劑顏色略有加深。結(jié)合感官評分得出，柿葉黃酮干粉的最佳添加量為20%。

2.2.1.2 β-環(huán)糊精添加量的考察

β-環(huán)糊精添加量對片劑感官品質(zhì)的影響見圖2。

圖2 β-環(huán)糊精添加量對片劑感官品質(zhì)的影響Fig.2 Effect of β-cyclodextrin supplemental amount on the sensory quality of tablets

由圖2可以看出，當(dāng)β-環(huán)糊精的添加量大于9%時(shí)，感官評分隨著β-環(huán)糊精的添加量增加而降低。β-環(huán)糊精對片劑的外觀和口感影響很大，因其具有包埋作用，減少了苦澀味，使口感變好。由于β-環(huán)糊精具有很強(qiáng)的黏合性，當(dāng)添加量大于9%時(shí)，片劑表面出現(xiàn)麻點(diǎn)，并影響片劑的崩解與溶出速度，且添加量過多時(shí)，會使片劑有較重的糊口味，粉粒感增強(qiáng)，降低了片劑的感官品質(zhì)。由此得出，β-環(huán)糊精的添加量為9%較適宜。

2.2.1.3 甘露醇添加量的考察

甘露醇添加量對片劑感官品質(zhì)的影響見圖3。

圖3 甘露醇添加量對片劑感官品質(zhì)的影響Fig.3 Effect of mannitol supplemental amount on the sensory quality of tablet

由圖3可以看出，當(dāng)甘露醇添加量為20%時(shí)，感官評分最高，甘露醇具有一定甜味，在口腔中溶解產(chǎn)生涼爽感，削弱苦澀味，并且在口中無砂礫感，口感和風(fēng)味好，但當(dāng)甘露醇的添加量大于20%時(shí)，片劑甜味過重，酸甜不協(xié)調(diào)，使得片劑風(fēng)味不好。由此得出甘露醇的添加量為20%較適宜。

2.2.1.4 檸檬酸添加量的考察

檸檬酸添加量對片劑感官品質(zhì)的影響，結(jié)果見圖4。

圖4 檸檬酸添加量對片劑感官品質(zhì)的影響Fig.4 Effect of citric acid supplemental amount on the sensory quality of tablet

由圖4可以看出，當(dāng)檸檬酸添加量達(dá)到3%時(shí)，感官評分最高，檸檬酸主要對片劑的風(fēng)味有影響，適量添加可以使口服片呈現(xiàn)酸甜味，但添加量過多會使片劑過酸、過澀，從而降低感官品質(zhì)。由此得出檸檬酸的添加量為3%時(shí)較適宜。

2.2.1.5 硬脂酸鎂添加量的考察

硬脂酸鎂添加量對片劑感官品質(zhì)的影響見圖5。

圖5 硬脂酸鎂添加量對片劑感官品質(zhì)的影響Fig.5 Effect of magnesium stearate supplemental amount on the sensory quality of tablet

由圖5可以看出，當(dāng)硬脂酸鎂的添加量為1.5%時(shí)，感官評分最高，硬脂酸鎂可以增加物料的流動性，使顆粒混合均勻，減少物料對壓片機(jī)的黏合，使片劑表面完整光潔。如果其添加量過少，會使顆粒粘在壓片機(jī)上，導(dǎo)致片劑形態(tài)不完整，添加量過多，影響片劑口感。由此得出硬脂酸鎂的添加量為1.5%時(shí)較適宜。

2.2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化配方

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以β-環(huán)糊精添加量、甘露醇添加量、硬脂酸鎂添加量、檸檬酸添加量為考察因素進(jìn)行四因素三水平L9（34）正交試驗(yàn)，優(yōu)化柿葉黃酮口服片的配方，得到更優(yōu)的感官品質(zhì)。因素水平見表2，正交試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表2 正交試驗(yàn)因素水平Table 2 Orthogonal factors and levels

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of orthogonal test

由表3可知，4個(gè)因素對柿葉提取物片劑感官評分影響的主次順序?yàn)椋築＞D＞A＞C，即甘露醇添加量＞檸檬酸添加量＞β-環(huán)糊精添加量＞硬脂酸鎂添加量，其最優(yōu)水平為A1B2C1D2，即β-環(huán)糊精添加量6%、甘露醇添加量20%，硬脂酸鎂添加量1.0%，檸檬酸添加量3%。

對表3中各因素的R值進(jìn)行比較可得，C因素對柿葉提取物片劑感官評分影響較小，因此，以該因素作為方差分析空白列，對正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表4。

表4 正交試驗(yàn)方差分析Table 4 Variance analysis of orthogonal

由方差分析表4可知，B、D因素對柿葉提取物片劑的感官品質(zhì)有顯著的影響，A、C因素對柿葉提取物片劑的感官品質(zhì)無顯著的影響。

2.2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照最優(yōu)工藝方案，添加20%柿葉黃酮干粉、6%β-環(huán)糊精、20%甘露醇、3%檸檬酸、7%交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、1.0%硬脂酸鎂、淀粉填充，制備3批次柿葉黃酮口服片，3次感官評分的平均值為96.5，高于正交試驗(yàn)中的第2組結(jié)果，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.68%。說明該工藝條件制備的片劑感官品質(zhì)好，而且穩(wěn)定性較高。每批次取6片成品，測定黃酮含量，平均黃酮含量為3.13%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差0.92%。

2.3 產(chǎn)品質(zhì)量分析

2.3.1 片重差異分析

取20片成品，測定成品平均片重為0.697 1 g，所測成品的片重差異在±2.73%以內(nèi)，小于藥典規(guī)定的±5%，表明質(zhì)量合格，工藝穩(wěn)定。

2.3.2 硬度分析

取5片成品，測定硬度。平均值為30.3 N，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.98%，成品的硬度較高，差異較小。平均徑向直徑為13.11 mm。

2.3.3 脆碎度分析

取10片成品，測定成品脆碎度，測定前樣品總重6.990 8 g，測定之后樣品總重6.984 3 g，質(zhì)量減少0.65%，小于藥典規(guī)定的1%，無斷裂、龜裂現(xiàn)象，質(zhì)量合格。

2.3.4 崩解時(shí)限分析

取6片成品，測定成品崩解時(shí)限，平均崩解時(shí)限為13.4 min，各片均能在15 min內(nèi)崩解，符合國家藥典規(guī)定。

3 結(jié)論

以柿葉黃酮提取物為主要原料，感官品質(zhì)為評價(jià)指標(biāo)，確定柿葉黃酮口服片的制備工藝和最優(yōu)配方，即20%柿葉黃酮干粉、6%β-環(huán)糊精、20%甘露醇、3%檸檬酸、7%交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、1.0%硬脂酸鎂、淀粉填充。在此配方下制得的成品色澤均勻、表面光滑、組織形態(tài)好、口感佳、酸甜協(xié)調(diào)、感官品質(zhì)高，并且成品中黃酮含量高達(dá)3.13%。

對片劑成品進(jìn)行質(zhì)量分析，成品的平均片重為0.6971g，平均硬度為30.3N，平均徑向直徑為13.11mm，脆碎度良好，均能在15 min內(nèi)崩解。片劑產(chǎn)品具有劑量準(zhǔn)確、體積小、質(zhì)量穩(wěn)定、攜帶、服用方便等優(yōu)勢。

利用薊州區(qū)得天獨(dú)厚的柿葉資源，以柿葉中活性成分黃酮類提取物為原料，對柿葉黃酮片劑制備工藝及配方開展研究，為新型功能食品的研發(fā)、新生產(chǎn)工藝的建立提供一定基礎(chǔ)性依據(jù)。