小米酒對小鼠血清中相關(guān)抗氧化酶活性的影響

馬吉瑤，鄒曉，鄭程遠(yuǎn)*，郭成宇，2，石俊，魏鸞萱，張曉山，王平

（1.齊齊哈爾大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161000；2.黑龍江省果蔬雜糧飲品工程技術(shù)研究中心，黑龍江 齊齊哈爾 161000；3.黑龍江省北大倉集團(tuán)有限公司，黑龍江 齊齊哈爾 161000）

小米又稱為粟，北方稱谷子，谷子脫殼為小米，其粒小，直徑1 mm左右。小米是世界上最古老的栽培農(nóng)作物之一，起源于中國黃河流域，是中國古代的主要糧食作物，在我國的農(nóng)耕文明中占有舉足輕重的地位[1-2]。小米營養(yǎng)價(jià)值高，營養(yǎng)全面均衡，主要含有碳水化合物、蛋白質(zhì)及氨基酸、脂肪及脂肪酸、維生素、礦物質(zhì)等[3-6]。研究表明，小米具有健脾胃功效，還可以治療口臭，一定程度上緩解腳氣，并兼具有美容功效[7-9]。中國最早的酒就是采用小米進(jìn)行釀造的[10]。

小米酒是以小米為原料，基于傳統(tǒng)釀造方法，采用現(xiàn)代工藝自主研發(fā)的一款黃酒，有文獻(xiàn)表明，小米酒中富含碳水化合物、氨基酸、維生素和礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)，具有獨(dú)特的生理功能[11-12]。本文旨在探究小米酒對小鼠血清中相關(guān)抗氧化物酶活性的影響，以期為小米酒的進(jìn)一步開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

小米：黑龍江省齊齊哈爾市龍江縣；小米原汁、小米酒：齊齊哈爾大學(xué)果蔬飲品研發(fā)中心；無水乙醇：重慶川東化工有限公司；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）測定試劑盒：南京建成科技有限公司。

SPF級健康KM小鼠：重慶恩斯維爾生物科技有限公司，體重（20±2）g，6～8 周齡，36 只。

BS224S電子分析天平：賽多利斯科學(xué)儀器(北京）有限公司；101-1A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：天津市泰斯特儀器有限公司；HH-1數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋：金壇市盛藍(lán)儀器制造有限公司；85-1型恒溫磁力攪拌器：深圳天南海北有限公司；XY-880型酒精密度計(jì)、0-100型100攝氏度的溫度計(jì)：浙江余姚鎮(zhèn)玻璃廠；DHG-9123A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司；OSJ-DI-15L型純水儀：蘇州賽恩斯儀器有限公司；RT-6000酶聯(lián)免疫檢測儀：美國寶特Bio-Tek公司。

1.2 方法

1.2.1 小米酒的釀造

參考文獻(xiàn)[13]的工藝流程進(jìn)行小米酒的釀造。

1.2.2 小米酒酒精濃度測定

采用任凱等[14]酒精密度計(jì)法測定小米酒的酒精濃度。

1.2.3 劑量分組及動物處理

動物房晝夜交替，保持動物自由飲水、進(jìn)食，溫度23℃～25℃，濕度為（60±5）%，光照12 h/d，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。36只小鼠隨機(jī)分成6組進(jìn)行灌胃處理：空白組（0.2 mL生理鹽水）、酒基對照組（0.2 mL 16.2%乙醇生理鹽水）、陽性對照組（0.2 mL小米原汁，水米質(zhì)量比2∶1，水溫20℃～25℃，浸泡24 h得到小米原汁）、低劑量組（0.2 mL小米酒）、中劑量組（0.4 mL小米酒）、高劑量組（0.8 mL小米酒）。每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30 d。

1.2.4 檢測指標(biāo)及方法

灌胃結(jié)束后，小鼠禁食不禁水12 h，10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉，腹主動脈取血，注入空白潔凈試管內(nèi)，4℃3 000 r/min離心15 min，分離血清，-70℃凍存待檢[15]。應(yīng)用全自動生化分析儀測定血清中SOD活力、GSH、MDA含量，檢測時(shí)按試劑盒說明書進(jìn)行具體操作。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用Origin8.0軟件統(tǒng)計(jì)各參數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差并作圖，采用SPSS 18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和單因素方差分析。組間差異性用t檢驗(yàn)法分析。p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 小米酒酒精濃度測定結(jié)果

經(jīng)測定，小米酒酒精濃度為16.2% vol，用于后續(xù)酒基對照組濃度調(diào)控。

2.2 不同處理對小鼠體內(nèi)GSH含量的影響

GSH是一種含γ-酰胺鍵和巰基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成，幾乎存在于身體的每一個(gè)細(xì)胞[16]。GSH分子具有活性巰基（-SH），是最重要的功能基團(tuán)，可參與機(jī)體多種重要的生化反應(yīng)，保護(hù)體內(nèi)重要酶蛋白巰基不被氧化、滅活，保證能量代謝、細(xì)胞利用，因此，GSH含量越高說明機(jī)體抗氧化能力越強(qiáng)[17-18]。不同劑量小米酒對小鼠血清中GSH活性的影響見圖1。

圖1 不同劑量小米酒對小鼠血清中GSH含量的影響Fig.1 Effects of different doses of millet wine on GSH content in serum of mice

由圖1可知，酒精會導(dǎo)致機(jī)體GSH含量下降，機(jī)體的抗氧化水平會減弱。但相較于酒基組，低劑量組顯著升高（p＜0.05），說明飲用同劑量的小米酒其抗氧化水平減弱程度要明顯低于同等酒精濃度的酒基。隨著小米酒灌胃劑量的增加，GSH含量越來越低。

2.3 不同處理對小鼠體內(nèi)SOD活力的影響

SOD是生物體系中抗氧化酶系的重要組成成員，廣泛分布在微生物、植物和動物體內(nèi)[19-20]。SOD是生物體內(nèi)存在的一種抗氧化金屬酶，能夠催化超氧陰離子自由基歧化生成氧和過氧化氫，在機(jī)體氧化與抗氧化平衡中起到至關(guān)重要的作用，與很多疾病的發(fā)生、發(fā)展密不可分。因此，機(jī)體內(nèi)SOD活力越高其抗氧化能力越強(qiáng)[21-23]。不同劑量小米酒對小鼠血清中SOD活力的影響見圖2。

圖2 不同劑量小米酒對小鼠血清中SOD活力的影響Fig.2 Effects of different doses of millet wine on SOD activity in serum of mice

由圖2可知，其變化趨勢與GSH含量變化趨勢相似，酒精的攝入會導(dǎo)致SOD活力下降，進(jìn)而影響機(jī)體的抗氧化水平。但相較于酒基組，低劑量組會顯著升高（p＜0.05），SOD活力同樣會隨著小米酒攝入的量增加而遞減，呈劑量依賴性。

2.4 不同處理對小鼠體內(nèi)MDA含量的影響

生物體內(nèi)自由基與脂質(zhì)會發(fā)生氧化反應(yīng)，生成具有細(xì)胞毒性的氧化終產(chǎn)物MDA，其會影響線粒體呼吸鏈復(fù)合物及線粒體內(nèi)關(guān)鍵酶活性，加劇細(xì)胞膜受到的氧化應(yīng)激損傷，因此，MDA含量越高說明機(jī)體的抗氧化能力越弱[24]。不同劑量小米酒對小鼠血清中MDA含量的影響見圖3。

圖3 不同劑量小米酒對小鼠血清中MDA含量的影響Fig.3 Effects of different doses of millet wine on MDA content in serum of mice

由圖3可知，酒精的攝入會導(dǎo)致MDA含量的升高，機(jī)體的抗氧化能力減弱。但與酒基組相比，低劑量組MDA含量會顯著降低（p＜0.05），說明攝入同劑量的小米酒對機(jī)體造成的抗氧化損傷要顯著低于同濃度的酒精。MDA含量同樣與小米酒的攝入劑量呈依賴性，攝入越多，MDA含量越高，抗氧化能力越弱。

3 結(jié)論

以不同劑量的小米酒灌胃小鼠30 d后發(fā)現(xiàn)，酒精的攝入會降低機(jī)體GSH含量、SOD活力，提高M(jìn)DA含量，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體抗氧化能力的減弱，且呈劑量依賴性。值得注意的是，與空白對照組和小米原汁組相比，無論是酒基組還是不同劑量的小米酒，都會顯著降低機(jī)體的抗氧化能力，即飲酒會造成機(jī)體抗氧化能力損傷，增加疾病的風(fēng)險(xiǎn)。但與酒基組相比，低劑量的小米酒會顯著減弱酒精對機(jī)體造成的抗氧化損傷，說明與同濃度的酒基相比，小米酒對機(jī)體的抗氧化損傷水平小于同濃度的酒精。因此，從機(jī)體抗氧化水平角度考慮，不飲酒好于飲酒，適當(dāng)飲用小米酒好于同劑量濃度的酒精。