紫草素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響

劉亞楠 王炳先 路臣桂 楊 君

（1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院三全學(xué)院臨床學(xué)院，河南 新鄉(xiāng)453000； 2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科二病區(qū)，河南新鄉(xiāng)453000）

子宮內(nèi)膜癌是一種常見的女性生殖系統(tǒng)上皮性惡性腫瘤，常發(fā)生于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性，是導(dǎo)致死亡的第三位常見婦科惡性腫瘤［1］。早期患者首選手術(shù)療法，術(shù)后放療是防治其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的有效輔助手段，然而由于化療耐藥的出現(xiàn)，術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率高，預(yù)后較差，嚴(yán)重危害女性生命健康［2］。紫草是我國(guó)傳統(tǒng)藥用植物之一，《本草經(jīng)疏》 等多種中藥典籍對(duì)其藥用價(jià)值均有記載。紫草素是紫草Lithosperraum erythrorhizon Sieb.et Zucc.根的主要活性成分，具有抗癌、抗炎、抗菌等作用。研究顯示，紫草素可能通過(guò)調(diào)控凋亡相關(guān)基因表達(dá)具有抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡的作用［3?4］，但其作用機(jī)制以及對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞順鉑耐藥性的影響尚不清楚。肝細(xì)胞核因子1α 反義鏈1（HNF1A?AS1）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的致癌因子，HNF1A?AS1 在骨肉瘤、非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤中高表達(dá)并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移［5?6］。此外，HNF1A?AS1 高表達(dá)還可增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的順鉑耐藥［7］。生物信息學(xué)分析顯示，miR?20b?5p是HNF1A?AS1 的潛在靶基因，miR?20b?5p在子宮內(nèi)膜癌中低表達(dá)，過(guò)表達(dá)miR?20b?5p可抑制腫瘤生長(zhǎng)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［8］。本研究旨在闡明紫草素在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖、凋亡、順鉑耐藥中的作用，探討其機(jī)制是否與調(diào)控HNF1A?AS1 和miR?20b?5p表達(dá)有關(guān)，以期為紫草素開發(fā)成抗腫瘤藥物提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 細(xì)胞 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC?1B 購(gòu)于杭州亦博生物科技有限公司。

1.2 藥物與試劑 杜爾伯格伊戈?duì)柵囵B(yǎng)基（DMEM）、胎牛血清（SH30070）、青鏈霉素雙抗溶液（P1400）購(gòu)于北京索萊寶生物科技有限公司；紫草素（純度≥98%，批號(hào)110769?200506）購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8（CCK?8）（C0038）、膜聯(lián)蛋白V 異硫氰酸熒光素／碘化丙啶（Annexin V?FITC／PI）雙染法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（C1062S）購(gòu)于上海碧云天生物科技有限公司；SYBR Green qPCR Mix（11202ES）和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（K1622）購(gòu)于上海翊圣生物科技有限公司；兔源細(xì)胞周期素D1（CyclinD1）（＃2922）、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved?caspase?3）（＃9654）、β?actin 抗體以及山羊抗兔二抗購(gòu)于美國(guó)CST 公司；鼠源多藥耐藥相關(guān)蛋白1（MRP1）抗體（sc?18835）、羊抗鼠二抗（sc?2005）購(gòu)自購(gòu)于美國(guó)Santa Cruz 公司；HNF1A?AS1 小干擾RNA（si?HNF1A?AS1）及其對(duì)照（si?NC）、miR?20b?5p模擬物（miR?20b?5p mimics）及其對(duì)照（miR?NC）、HNF1A?AS1 過(guò)表達(dá)載體（pcDNA?HNF1A?AS1）及其對(duì)照（pcDNA?NC）、PCR 引物由廣州復(fù)能基因有限公司提供。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng) HEC?1B細(xì)胞采用含10%胎牛血清、1%青鏈霉素雙抗的DMEM 培養(yǎng)液于37 ℃、含5% CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔1 d 換液1 次，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)進(jìn)行傳代，胰酶消化后，選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 分組和給藥 實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組及紫草素低、中、高劑量組為分別加入為0.4、0.8、1.6 μg／mL 含紫草素培養(yǎng)液培養(yǎng)48 h；si?NC組、si?HNF1A?AS1組、miR?NC組、miR?20b?5p組為分別將si?NC、si?HNF1A?AS1、miR?NC、miR?20b?5p mimics 轉(zhuǎn)染HEC?1B細(xì)胞；pcDNA?NC＋紫草素組、pcDNA?HNF1A?AS1＋紫草素組、pcDNA?HNF1A?AS1＋miR?NC＋紫草素組、pcDNA?HNF1A?AS1＋miR?20b?5p＋紫草素組為分別將pcDNA?NC、pcDNA?HNF1A?AS1、pcDNA?HNF1A?AS1＋miR?NC、pcDNA?HNF1A?AS1＋miR?20b?5p mimics 轉(zhuǎn)染HEC?1B細(xì)胞后進(jìn)行紫草素干預(yù)處理。

2.3 CCK?8 法檢測(cè)細(xì)胞活力 將HEC?1B細(xì)胞接種到96 孔板，按照上述分組進(jìn)行細(xì)胞處理，每孔添加10 μL 的CCK?8 試劑，培養(yǎng)箱孵育2 h，以空白孔調(diào)零，用酶標(biāo)儀測(cè)量450 nm 波長(zhǎng)處各孔OD，計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率＝（OD實(shí)驗(yàn)－OD空白）／（OD對(duì)照－OD空白）×100%。HEC?1B細(xì)胞按照上述分組進(jìn)行處理后，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104／mL，向每孔加入100 μL細(xì)胞懸液，培養(yǎng)24 h 后，加入不同質(zhì)量濃度（0、1.25、2.5、5、10、20、40 μg／mL）的順鉑進(jìn)行處理，培養(yǎng)24 h，采用CCK?8 試劑盒測(cè)定各孔OD。用SPSS分析計(jì)算IC50值。

2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 HEC?1B細(xì)胞按照上述分組處理后，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106／mL。按照Annexin V?FITC／PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書分別加入Annexin V?FITC 和PI 進(jìn)行染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

2.5 RT?PCR 檢測(cè)HNF1A?AS1 和miR?20b?5p的表達(dá) 采用Trizol 試劑提取各組細(xì)胞的總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書獲得cDNA，并利用SYBR Green 試劑盒進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。反應(yīng)體系為SYBR Green Master Mix 10 μL，正向引物0.4 μL，反向引物0.4 μL，cDNA 2 μL，補(bǔ)加超純水至20 μL。引物序列HNF1A?AS1正向5′?TCAAGAAATGGTGGCTAT?3′，反向 5′?GCTCTGAGACTGG CTGAA?3′。miR?20b?5p正向 5′?CAAAGTGCTCATAGTG CAGGTAG?3′，反向?yàn)橥ㄓ靡?。?actin正向 5′?CATGTACGTTGCTATCCAGGC?3′，反向 5′?CTCCTTAATGT CACGCACGAT?3′。U6 正向5′?CTCGCTTCGGCAGCACA?3′，反向5′?ACGCTTCACGAATTTGCGT?3′。

2.6 Western blot 檢測(cè) CyclinD1、Cleaved?caspase?3 和MRP1 蛋白的表達(dá)細(xì)胞按照上述分組進(jìn)行處理后，加入細(xì)胞裂解液，完全裂解后離心獲得上清液即為細(xì)胞總蛋白。二喹啉甲酸法測(cè)定蛋白濃度。將蛋白樣品和等體積上樣緩沖液混合，煮沸3 min 使其變性。取40 μg細(xì)胞蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，并將已分離的細(xì)胞蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。室溫條件下將膜置于5%的脫脂牛奶中孵育1 h，將膜置于稀釋的一抗溶液中孵育2 h，洗膜后，將膜置于稀釋的二抗溶液中孵育1 h，洗膜后，進(jìn)行增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光顯色。Image J 軟件對(duì)各目的條帶灰度值進(jìn)行分析，以各目的條帶與內(nèi)參β?actin 灰度值比值表示目的蛋白表達(dá)水平。

2.7 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn) 含有miR?20b?5p結(jié)合位點(diǎn)的HNF1A?AS1 野生型（wt?HNF1A?AS1）或突變型（mut?HNF1A?AS1）熒光素酶報(bào)告基因載體的構(gòu)建由上海生工公司提供。將miR?NC、miR?20b?5pmimics分別與wt?HNF1A?AS1、mut?HNF1A?AS1 共轉(zhuǎn)染HEC?1B細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48 h，使用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)測(cè)定熒光素酶活性。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18.0 進(jìn)行條件分析，實(shí)驗(yàn)均設(shè)置3個(gè)復(fù)孔或平行實(shí)驗(yàn)，重復(fù)3 次。所有數(shù)據(jù)均采用（）表示。組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步組間兩兩比較采用SNK?q 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響 相較于對(duì)照組，紫草素低、中、高劑量組HEC?1B細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞凋亡率升高，細(xì)胞IC50值降低（P＜0.05，P＜0.01），見表1 和圖1。

表1 紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

表1 紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

注：與對(duì)照組比較，*P ＜0.05，**P＜0.01。

圖1 紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞凋亡的影響

3.2 紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞CyclinD1、Cleaved?caspase?3、MRP1 蛋白的影響 相較于對(duì)照組，紫草素低、中、高劑量組HEC?1B細(xì) 胞CyclinD1、MRP1 蛋白的表達(dá)降低，Cleaved?caspase?3 蛋白的表達(dá)增加（P＜0.01），見表2、圖2。

圖2 紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞中CyclinD1、Cleaved?caspase?3、MRP1 蛋白表達(dá)的影響

表2 紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞中CyclinD1、Cleaved?caspase?3、MRP1 蛋白表達(dá)的影響（， n＝9）

表2 紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞中CyclinD1、Cleaved?caspase?3、MRP1 蛋白表達(dá)的影響（， n＝9）

注：與對(duì)照組比較，**P＜0.01。

3.3 紫草素對(duì)HNF1A?AS1 和miR?20b?5p表達(dá)的影響相較于對(duì)照組，紫草素低、中、高劑量組HEC?1B細(xì)胞HNF1A?AS1 的表達(dá)降 低，miR?20b?5p的表達(dá)升 高（P＜0.01），見表3。

表3 紫草素對(duì)HNF1A?AS1 表達(dá)的影響（， n＝9）

表3 紫草素對(duì)HNF1A?AS1 表達(dá)的影響（， n＝9）

注：與對(duì)照組比較，**P＜0.01。

3.4 干擾HNF1A?AS1 表達(dá)對(duì)細(xì)胞HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響 相較于si?NC組，si?HNF1A?AS1組HEC?1B細(xì)胞HNF1A?AS1 的表達(dá)降低，CyclinD1 和MRP1蛋白的表達(dá)降低，Cleaved?caspase?3 蛋白的表達(dá)升高，細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞凋亡率升高，IC50降低（P＜0.01），見表4、圖3。

圖3 HNF1A?AS1 低表達(dá)對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響

表4 干擾HNF1A?AS1 表達(dá)對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

表4 干擾HNF1A?AS1 表達(dá)對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

注：與si?NC組比較，**P＜0.01。

3.5 過(guò)表達(dá)miR?20b?5p對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響 相較于miR?NC組，miR?20b?5p組HEC?1B細(xì)胞miR?20b?5p的表達(dá)升高，CyclinD1 和MRP1 蛋白的表達(dá)降低，Cleaved?caspase?3 蛋白的表達(dá)升高，細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高，IC50降低（P＜0.01），見表5、圖4。

圖4 miR?20b?5p 高表達(dá)對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響

表5 miR?20b?5p 高表達(dá)對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

表5 miR?20b?5p 高表達(dá)對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

注：與miR?NC組比較，**P＜0.01。

3.6HNF1A?AS1 靶向調(diào)控miR?20b?5p的表達(dá) TargetScan軟件在線預(yù)測(cè)顯示，HNF1A?AS1 和miR?20b?5p之間直接存在相互作用，見圖5。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示，相較于miR?NC 和WT?HNF1A?AS1 共轉(zhuǎn)染組，miR?20b?5p mimics 和WT?HNF1A?AS1 共轉(zhuǎn)染后HEC?1B細(xì)胞熒光素酶活性降低（P＜0.05）；相較于miR?NC 和MUT?HNF1A?AS1共轉(zhuǎn)染組，miR?20b?5p mimics 和MUT?HNF1A?AS1 共轉(zhuǎn)染后HEC?1B細(xì)胞熒光素酶活性無(wú)明顯變化，見表6。RT?qPCR 檢測(cè)顯示，相較于si?NC組，si?HNF1A?AS1組HEC?1B細(xì) 胞miR?20b?5p的表達(dá)升 高（P＜0.01）；相較于pcDNA?NC組，pcDNA?HNF1A?AS1組HEC?1B細(xì) 胞miR?20b?5p的表達(dá)降低（P＜0.01），見表7。提示，HNF1A?AS1靶向負(fù)性調(diào)控miR?20b?5p表達(dá)。

表7 干擾或過(guò)表達(dá)HNF1A?AS1 對(duì)HEC?1B細(xì)胞miR?20b?5p 表達(dá)的影響（， n＝9）

表7 干擾或過(guò)表達(dá)HNF1A?AS1 對(duì)HEC?1B細(xì)胞miR?20b?5p 表達(dá)的影響（， n＝9）

注：與si?NC組比較，** P ＜0.01；與pcDNA?NC組比較，＃＃P＜0.01。

圖5 HNF1A?AS1 和miR?20b?5p 結(jié)合示意圖

表6 miR?NC、miR?20b?5p mimics分別與WT?HNF1A?AS1 或MUT?HNF1A?AS1 共轉(zhuǎn)染后HEC?1B細(xì)胞熒光素酶活性（， n＝9）

表6 miR?NC、miR?20b?5p mimics分別與WT?HNF1A?AS1 或MUT?HNF1A?AS1 共轉(zhuǎn)染后HEC?1B細(xì)胞熒光素酶活性（， n＝9）

注：與miR?NC組比較，**P＜0.01。

3.7 過(guò)表達(dá)HNF1A?AS1 可以逆轉(zhuǎn)紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響 相較于pcDNA?NC＋紫草素組，pcDNA?HNF1A?AS1＋紫草素組HEC?1B細(xì) 胞HNF1A?AS1 的表達(dá)升高，CyclinD1 和MRP1 蛋白的表達(dá)升高，Cleaved?caspase?3 蛋白的表達(dá)降低，細(xì)胞存活率升高，細(xì)胞凋亡率降低，IC50升高（P＜0.01），見表8、圖6。

表8 過(guò)表達(dá)HNF1A?AS1 可以逆轉(zhuǎn)紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

表8 過(guò)表達(dá)HNF1A?AS1 可以逆轉(zhuǎn)紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

注：與pcDNA?NC＋紫草素組比較，**P ＜0.01。

圖6 過(guò)表達(dá)HNF1A?AS1 可以逆轉(zhuǎn)紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響

3.8 過(guò)表達(dá)miR?20b?5p和HNF1A?AS1 對(duì)紫草素處理的HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響 相較于pcDNA?HNF1A?AS1＋miR?NC＋紫草素組，pcDNA?HNF1A?AS1＋miR?20b?5p＋紫草素組HEC?1B細(xì)胞miR?20b?5p的表達(dá)升高，CyclinD1 和MRP1 蛋白的表達(dá)降低，Cleaved?caspase?3 蛋白的表達(dá)升高，細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞凋亡率升高，IC50降低（P＜0.01），見表9、圖7。

圖7 過(guò)表達(dá)miR?20b?5p 和HNF1A?AS1 對(duì)紫草素處理的HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響

表9 過(guò)表達(dá)miR?20b?5p 和HNF1A?AS1 對(duì)紫草素處理的HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

表9 過(guò)表達(dá)miR?20b?5p 和HNF1A?AS1 對(duì)紫草素處理的HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響（， n＝9）

注：與pcDNA?HNF1A?AS1＋miR?NC＋紫草素組比較，**P ＜0.01。

4 討論

紫草素是天然存在的萘醌類衍生物，其通過(guò)抑制多種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而具有抗癌活性［9］。Shilnikova 等［10］研究顯示紫草素可誘導(dǎo)線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，減弱順鉑耐藥卵巢癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。Chen等［11］研究發(fā)現(xiàn)紫草素可抑制胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，增強(qiáng)吉西他濱的抗腫瘤作用。本研究發(fā)現(xiàn)，紫草素以劑量依賴的方式下調(diào)促增殖蛋白CyclinD1 表達(dá)，上調(diào)促凋亡蛋白Cleaved?caspase?3 表達(dá)，抑制HEC?1B細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與Huang 等［12］紫草素的抗子宮內(nèi)膜癌作用相吻合。MRP1 是腫瘤細(xì)胞耐藥的關(guān)鍵蛋白，其通過(guò)將大量藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有保護(hù)作用［13］。本研究發(fā)現(xiàn)紫草素以劑量依賴的方式下調(diào)MRP1 蛋白表達(dá)，并提高HEC?1B細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。以上研究說(shuō)明紫草素具有抗子宮內(nèi)膜癌作用，并可提高其對(duì)順鉑的敏感性。

HNF1A?AS1 已被證實(shí)參與膀胱癌、胃癌等多種腫瘤進(jìn)展，是腫瘤早期診斷的生物標(biāo)記物［14?15］。研究報(bào)道［16］敲除HNF1A?AS1 顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和集落形成，抑制細(xì)胞周期進(jìn)入S 期，進(jìn)而抑制結(jié)腸癌致瘤表型。本研究發(fā)現(xiàn)紫草素干預(yù)后HEC?1B細(xì)胞HNF1A?AS1 表達(dá)顯著降低。干擾HNF1A?AS1 表達(dá)可抑制HEC?1B細(xì)胞存活，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并提高HEC?1B細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，與紫草素的抗子宮內(nèi)膜癌作用相同。進(jìn)一步恢復(fù)實(shí)驗(yàn)顯示，過(guò)表達(dá)HNF1A?AS1 可逆轉(zhuǎn)紫草素對(duì)HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響。以上研究提示下調(diào)HNF1A?AS1 是紫草素發(fā)揮抗子宮內(nèi)膜癌作用的分子機(jī)制。

miR?20b?5p是miR?17 家族的成員之一。B細(xì)胞淋巴瘤和T細(xì)胞白血病中miR?20b?5p表達(dá)失調(diào)，外周血單核細(xì)胞中miR?20b?5p表達(dá)升高是慢性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后良好的分子標(biāo)志物［17］。miR?20b?5p上調(diào)還可抑制腎癌細(xì)胞遷移和增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［18］。此外，上調(diào)miR?20b表達(dá)還可降低5?氟尿嘧啶耐藥結(jié)腸癌細(xì)胞的耐藥性［19］。本研究發(fā)現(xiàn)紫草素干預(yù)后HEC?1B細(xì)胞miR?20b?5p表達(dá)顯著增加，過(guò)表達(dá)miR?20b?5p可抑制HEC?1B細(xì)胞存活，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提高HEC?1B細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，與紫草素、干擾HNF1A?AS1 表達(dá)的抗子宮內(nèi)膜癌作用相同。此外，過(guò)表達(dá)miR?20b?5p還可逆轉(zhuǎn)pcDNA?HNF1A?AS1 對(duì)紫草素處理的子HEC?1B細(xì)胞增殖、凋亡和順鉑耐藥性的影響。由于雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和RT?PCR 證實(shí)HNF1A?AS1 靶向并負(fù)調(diào)控miR?20b?5p表達(dá)，本研究推測(cè)紫草素通過(guò)調(diào)控HNF1A?AS1／miR?20b?5p軸進(jìn)而影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖、凋亡以及順鉑耐藥。

綜上所述，本研究證實(shí)紫草素可抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并提高其順鉑敏感性，其機(jī)制與調(diào)控HNF1A?AS1／miR?20b?5p軸有關(guān)，以期為紫草素開發(fā)成抗子宮內(nèi)膜癌藥物奠定理論基礎(chǔ)。