黃芪甲苷抗實(shí)驗(yàn)性非酒精性脂肪肝病的研究進(jìn)展

丁棋柯 戴 瑋 吳媛媛 王 東

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，浙江杭州310053； 2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，浙江杭州310053； 3.浙江綠城心血管病醫(yī)院內(nèi)分泌科，浙江 杭州310012）

非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是目前中國(guó)乃至全世界都較為常見的慢性肝損傷性疾病，缺少相關(guān)干預(yù)措施的患者可以從一開始不易被自身察覺的非酒精性脂肪肝進(jìn)行性發(fā)展為情況較為復(fù)雜的非酒精性脂肪肝炎（NASH），NASH 可以造成隨后的肝臟纖維化，嚴(yán)重的可能會(huì)導(dǎo)致肝癌，有著相當(dāng)大的臨床和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［1?2］。NAFLD 的發(fā)病機(jī)制目前仍不是非常明確，促進(jìn)NAFLD 發(fā)生和發(fā)展的因素包括肝組織當(dāng)中與脂質(zhì)合成有關(guān)基因的異常表達(dá)、過(guò)度堆積的活性氧所致的線粒體功能損傷、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生應(yīng)激相關(guān)反應(yīng)、機(jī)體有關(guān)組織發(fā)生胰島素抵抗（IR）、肝臟發(fā)生炎癥反應(yīng)、肝細(xì)胞發(fā)生凋亡等［1］。然而，目前除了控制熱量的攝入和保持一定量的運(yùn)動(dòng)，并沒有治療NAFLD 的特效藥物。

黃芪是目前最常用的中藥之一，被廣泛應(yīng)用于咖啡、茶替代品以及食品當(dāng)中，中國(guó)的黃芪大棗枸杞茶作為著名的抗癌茶，飲用后能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫力［3］。黃芪甲苷作為中國(guó)傳統(tǒng)中藥黃芪的主要有效活性物質(zhì)，其分子式已被證實(shí)為C41H68O14，具有抑制脂質(zhì)合成相關(guān)基因的異常表達(dá)、提高抗氧化應(yīng)激能力、減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度、緩解IR、減輕炎癥反應(yīng)和抑制細(xì)胞凋亡等方面的作用［4?7］。非酒精性脂肪肝病是代謝綜合征的慢性肝臟表現(xiàn)，主要特征是肝臟發(fā)生脂肪沉積，經(jīng)HE 染色后在光學(xué)顯微鏡下可表現(xiàn)為巨大的脂肪空泡［1］。許多研究表明黃芪甲苷可以改善脂質(zhì)代謝紊亂，減少肝臟脂質(zhì)的過(guò)度積累，具有保護(hù)肝臟的作用［8］，但是，黃芪甲苷治療NAFLD 的具體機(jī)制仍然存在相關(guān)的空缺。課題組就近年來(lái)黃芪甲苷通過(guò)抗脂質(zhì)合成相關(guān)基因異常表達(dá)、抗氧化應(yīng)激、減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的程度、緩解IR、抑制炎癥相關(guān)因子的表達(dá)、防止細(xì)胞發(fā)生凋亡等方面的機(jī)制研究進(jìn)行整理歸納，以期為黃芪甲苷治療NAFLD的實(shí)際應(yīng)用提供科學(xué)且可靠的依據(jù)。

1 黃芪甲苷能夠減少肝臟脂肪合成，防止發(fā)生脂肪變性

1.1 黃芪甲苷激活A(yù)MPK 從而抑制SREBP?1c 及其靶基因的表達(dá) 固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c（SREBP?1c）被認(rèn)為是與脂質(zhì)相關(guān)分子表達(dá)有關(guān)的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在肝臟脂質(zhì)相關(guān)分子的合成代謝中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，有研究表明SREBP?1c 在細(xì)胞內(nèi)的含量增加能夠促進(jìn)脂質(zhì)有關(guān)分子的合成［9］。腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）是一種目前較為常見的蛋白激酶，可以使下游相關(guān)分子的絲氨酸或蘇氨酸發(fā)生磷酸化改變，從而改變其活性，當(dāng)AMPK 被激活時(shí)，細(xì)胞內(nèi)分解代謝往往會(huì)顯著增強(qiáng)，因此被認(rèn)為是細(xì)胞中的“能量感受器”［10］。AMPK 已被證明是SREBP?1c 的上游激酶，當(dāng)AMPK 被激活時(shí)，SREBP?1c 在細(xì)胞內(nèi)的含量顯著減少，從而降低其發(fā)生脂肪變性的可能［11］。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷能夠通過(guò)激活A(yù)MPK 通路來(lái)抑制SREBP?1c 及其下游靶基因硬脂酰輔酶A 去飽和酶、乙酰輔酶A 羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）的表達(dá)，從而能夠顯著緩解肝細(xì)胞由于脂肪變性造成細(xì)胞不斷膨脹甚至破裂的危險(xiǎn)情況［6］。此外，黃芪甲苷通過(guò)激活A(yù)MPK 使SREBP?1c 在Ser372 上發(fā)生磷酸化，抑制SREBP?1c 的蛋白水解和核異位，從而下調(diào)細(xì)胞核當(dāng)中SREBP?1c 的含量，有效減少了原本過(guò)度積累在肝組織細(xì)胞中的脂肪［12?13］。這些研究結(jié)果表明，黃芪甲苷通過(guò)激活A(yù)MPK 抑制SREBP?1c 及其靶基因的表達(dá)，從而改善肝臟脂肪變性的情況。

1.2 黃芪甲苷激活A(yù)MPK 從而抑制FoxO1 及其靶基因的表達(dá) 叉頭框蛋白O1（FoxO1）參與脂質(zhì)代謝，當(dāng)其表達(dá)增強(qiáng)時(shí)可以促進(jìn)肝臟脂肪的積累，在NAFLD 的病情進(jìn)展中起到關(guān)鍵的作用［14］。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，在FoxO1 表達(dá)增強(qiáng)的肝組織細(xì)胞當(dāng)中，SREBP?1c、ACC、FAS 等與脂質(zhì)合成相關(guān)的分子水平有著明顯的升高［15］。此外，激活A(yù)MPK 可抑制FoxO1 的表達(dá)，緩解肝臟脂肪變性［16?17］。黃芪甲苷通過(guò)調(diào)控AMPK／FoxO1 信號(hào)通路，減少SREBP?1c、FAS、ACC 等與脂肪合成有關(guān)因子的表達(dá)，緩解肝臟脂肪變性的程度［6，16］。這些研究結(jié)果表明，黃芪甲苷可能通過(guò)激活A(yù)MPK 抑制FoxO1 及其靶基因的表達(dá)，減少肝臟脂肪積累。

2 黃芪甲苷可以提高肝臟抗氧化應(yīng)激能力

在長(zhǎng)期的高糖高脂飲食習(xí)慣下，肝臟會(huì)增加攝取過(guò)多存在于循環(huán)血液中的可發(fā)生異位沉積的游離脂肪酸（FFA），從而導(dǎo)致肝臟氧化與抗氧化作用失衡，線粒體活性氧（ROS）大量堆積，因此引起肝臟劇烈的氧化應(yīng)激反應(yīng)，過(guò)量的ROS 可以使肝臟的線粒體功能發(fā)生障礙，使其遭受嚴(yán)重?fù)p傷，肝臟脂質(zhì)相關(guān)分子沉積的情況進(jìn)一步加劇［18］。

核因子E2 相關(guān)因子?2（Nrf2）是一種能夠體現(xiàn)機(jī)體應(yīng)對(duì)氧化損傷能力的標(biāo)志性物質(zhì)，在正常情況下，Nrf2 與胞質(zhì)蛋白伴侶分子（Keap1）結(jié)合，以復(fù)合物的狀態(tài)存在于細(xì)胞核外，處于一種相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)；當(dāng)細(xì)胞感受到來(lái)自外界的有害危險(xiǎn)信號(hào)時(shí)，原本存在于細(xì)胞質(zhì)當(dāng)中的Nrf2 即與Keap1 發(fā)生解離，進(jìn)而轉(zhuǎn)移進(jìn)入細(xì)胞核，促進(jìn)其調(diào)控的抗氧化相關(guān)蛋白酶的表達(dá)，而其中就包括超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫酶（CAT）等重要的抗氧化物質(zhì)，從而提高細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽（GSH）的水平［19］。

AMPK 作為一種內(nèi)源性的中樞代謝傳感器，起著調(diào)控細(xì)胞能量代謝的作用，能夠降低代謝性相關(guān)疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，并且在抗氧化應(yīng)激方面也意義重大［20?21］。相關(guān)研究表明，激活A(yù)MPK 通路可以促進(jìn)Nrf2 及其調(diào)控的靶基因的表達(dá)，從而能夠提高細(xì)胞當(dāng)中GSH 的水平，增強(qiáng)機(jī)體抵抗氧化損傷的能力［22］。此外，發(fā)生氧化應(yīng)激的細(xì)胞中會(huì)積累過(guò)量的ROS，然而過(guò)量的ROS 會(huì)抑制AMPK 的活性，GSH 可以清除過(guò)量的ROS，也可以使AMPK 發(fā)生S?谷胱甘肽化從而進(jìn)一步增強(qiáng)AMPK 的活性，緩解氧化應(yīng)激［23］。

研究表明，黃芪甲苷通過(guò)激活A(yù)MPK／Nrf2 信號(hào)通路，使得肝臟GSH、SOD 增多，緩解了肝臟氧化應(yīng)激的程度，改善脂質(zhì)有關(guān)分子過(guò)度沉積的情況［6，24］。這些研究結(jié)果證明，黃芪甲苷可以通過(guò)激活A(yù)MPK／Nrf2 相關(guān)分子途徑，抑制ROS 在細(xì)胞內(nèi)過(guò)量堆積的情況，減輕氧化應(yīng)激帶來(lái)的不可逆損害和增強(qiáng)機(jī)體抵御氧化損傷的能力，從而緩解肝臟脂肪變性的程度。上述相關(guān)機(jī)制見圖1。

圖1 黃芪甲苷提高肝臟抗氧化應(yīng)激能力的作用機(jī)制

3 黃芪甲苷可以減輕肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的程度

當(dāng)肝臟中脂質(zhì)相關(guān)分子發(fā)生過(guò)度積累時(shí)，其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)原本穩(wěn)定的狀態(tài)遭到損害，從而發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）相關(guān)代償反應(yīng)，造成葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、C／EBP同源蛋白（CHOP）和磷酸化的促肽激酶樣ER 激酶（p?PERK）等與ERS 相關(guān)的特征性蛋白表達(dá)增強(qiáng)，使得肝臟脂質(zhì)相關(guān)分子過(guò)度積累的不良情況又進(jìn)一步地加?。?5?26］。ERS 和肝臟脂肪變性兩者之間相互影響，二者在某種意義上來(lái)說(shuō)形成了一種惡性循環(huán)的關(guān)系，加快了疾病的發(fā)展［27］。有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)GRP78 過(guò)表達(dá)以后，SREBP?1c 的活性增強(qiáng)，其下游相關(guān)分子ACC、FAS、硬脂酰輔酶A 去飽和酶的基因表達(dá)也顯著增強(qiáng)，促使肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性［28］。此外，黃芪甲苷通過(guò)激活A(yù)MPK 通路抑制ERS特征性蛋白分子GRP78、CHOP 和p?PERK 的基因表達(dá)，從而減輕肝臟ERS 的程度，防止肝臟脂質(zhì)有關(guān)分子進(jìn)一步的異常積累［6］。這些研究結(jié)果表明，黃芪甲苷通過(guò)激活A(yù)MPK 信號(hào)通路來(lái)減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的程度，進(jìn)而緩解肝臟脂肪變性的情況。

4 黃芪甲苷可以改善胰島素抵抗

4.1 黃芪甲苷減輕脂肪組織的IR，減少FFA 的釋放 目前，IR 被普遍認(rèn)為是NAFLD 的“首次打擊”，幾乎貫穿NAFLD 的整個(gè)過(guò)程，其可以誘發(fā)血脂代謝紊亂，促使NAFLD 的發(fā)生和發(fā)展［18］。NAFLD 患者通常伴有肥胖，肥胖人群又常伴有IR，最重要的是，胰島素抵抗往往先發(fā)生于脂肪組織，此時(shí)的脂肪組織由于持續(xù)的增生、肥大，其代謝活性降低并且傾向于促炎狀態(tài)，減少相關(guān)有益脂肪因子的釋放［29?30］。因此，脂肪組織的IR 在一定程度上可以說(shuō)是NAFLD 發(fā)病的根本原因。

胰島素作為人體中最主要的抗脂解作用因子，能夠通過(guò)激活磷脂酰肌醇3?激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）信號(hào)途徑的有關(guān)分子，進(jìn)而激活位于細(xì)胞質(zhì)中的磷酸二酯酶3B（PDE3B），處于活性狀態(tài)下的PDE3B 可以促使環(huán)腺苷酸（cAMP）轉(zhuǎn)化為AMP，使cAMP／cAMP 依賴的蛋白激酶（PKA）信號(hào)通路受到抑制［31］。然而，cAMP／PKA 信號(hào)通路對(duì)脂肪組織的脂解作用起著至關(guān)重要的作用，該通路的激活可以促使激素敏感脂肪酶（HSL）磷酸化，p?HSL能夠從胞質(zhì)中轉(zhuǎn)移到胞內(nèi)脂滴的周圍，使脂質(zhì)發(fā)生分解［32］。脂肪組織發(fā)生IR 時(shí)，胰島素對(duì)HSL 的抑制作用減弱，脂解作用增強(qiáng)，當(dāng)其釋放的大量游離脂肪酸在肝臟發(fā)生異位沉積時(shí)，肝臟即發(fā)生脂肪變性［33］。

黃芪甲苷通過(guò)激活A(yù)kt／PDE3B 途徑相關(guān)分子，從而減少脂肪組織當(dāng)中cAMP 的積累，抑制cAMP／PKA 途徑的激活，進(jìn)而能夠有效減輕胞質(zhì)內(nèi)脂滴分解的情況［34］。因此，黃芪甲苷可能通過(guò)激活A(yù)kt／PDE3B 信號(hào)途徑有關(guān)分子來(lái)緩解脂肪組織的IR，降低因脂解活動(dòng)加劇而產(chǎn)生的大量FFA異位沉積于肝臟的可能。上述相關(guān)機(jī)制見圖2。

圖2 黃芪甲苷減少游離脂肪酸異位沉積的作用機(jī)制

4.2 黃芪甲苷減輕肝臟的IR，減少糖輸出 當(dāng)人體發(fā)生血脂代謝紊亂時(shí)，血液中的FFA 會(huì)異位沉積于肝臟，容易引起肝臟發(fā)生IR［35］。此時(shí)，肝臟糖異生相關(guān)基因表達(dá)增強(qiáng)，引起肝臟對(duì)外輸出過(guò)多的糖，血糖水平升高，對(duì)人的身體健康尤為不利。

胰島素受體底物2（IRS?2）／PI3K／Akt／FoxO1 是一條已經(jīng)被廣泛認(rèn)同的經(jīng)典胰島素作用途徑，當(dāng)該信號(hào)途徑的相關(guān)分子被激活時(shí)可減輕IR 的情況。IRS?2 作為PI3K 的上游信號(hào)分子，被認(rèn)為能夠通過(guò)磷酸化的方式激活PI3K，處于活性狀態(tài)下的p?PI3K 則以同樣的方式激活A(yù)kt；p?Akt 可以使FoxO1 發(fā)生磷酸化，p?FoxO1 會(huì)從核內(nèi)轉(zhuǎn)移至胞質(zhì)，此時(shí)FoxO1 處于非活性狀態(tài)，減少了受其調(diào)控的糖異生相關(guān)酶的表達(dá)［36?37］。

SREBP?1c 在肝臟中含量較為豐富，是調(diào)控脂質(zhì)相關(guān)蛋白合成的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子，被證明能夠抑制肝臟中IRS?2 的表達(dá)情況，而且在肝組織細(xì)胞當(dāng)中，胰島素信號(hào)主要由IRS?2 傳遞而不是通過(guò)IRS?1［38］。AMPK 可以通過(guò)抑制SREBP?1c 從而使IRS?2 的表達(dá)增加，改善肝臟的IR［12］。此外，炎癥反應(yīng)可以激活非受體型蛋白酪氨酸激酶2（JAK2）／信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）信號(hào)通路，使下游分子細(xì)胞因子信號(hào)抑制因子（SOCS）的活性增加；SOCS 在肝細(xì)胞中抑制IRS?2 的活性，而且可以通過(guò)激活SREBP?1c 達(dá)到間接抑制IRS?2 的活性，造成肝臟發(fā)生胰島素抵抗［1］。

研究發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷可以通過(guò)調(diào)控肝臟中AMPK、SREBP?1c／IRS?2 和JAK2／STAT3 等分子的表達(dá)，從而緩解了肝組織IR 的情況［6，39?40］。此 外，黃芪甲苷 通過(guò)恢復(fù)PI3K／Akt 經(jīng)典胰島素作用途徑相關(guān)分子的水平來(lái)緩解IR的程度，并且抑制受Akt 負(fù)調(diào)控的FoxO1 的表達(dá)，從而降低細(xì)胞內(nèi)糖異生相關(guān)酶的分子含量，減少肝臟對(duì)外糖輸出，防止血液中葡糖糖水平的非正常抬高［16］。這些研究結(jié)果表明，黃芪甲苷可能通過(guò)調(diào)控AMPK?SREBP?1c?IRS?2／PI3K／Akt／FoxO1 和JAK2／STAT3 信號(hào)通路來(lái)改善肝臟IR，從而減少肝臟對(duì)外糖輸出，防止NAFLD 患者血液中葡萄糖水平的非正常升高。上述相關(guān)機(jī)制見圖3。

圖3 黃芪甲苷減輕肝臟胰島素抵抗， 減少糖輸出的作用機(jī)制

5 黃芪甲苷可以防止肝臟炎癥的發(fā)生和發(fā)展

目前，人們認(rèn)為炎癥因子在肝臟發(fā)生纖維化這方面有一定的作用，并且炎癥因子已經(jīng)被證明可以激活肝臟中的肝星狀細(xì)胞，使其分泌細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致肝臟纖維化的發(fā)生，嚴(yán)重且不加干預(yù)措施控制的患者甚至?xí)l(fā)展成對(duì)人體有高度危害作用的肝硬化［41］。因此，緩解肝臟炎癥反應(yīng)在治療NAFLD 中特別重要。

長(zhǎng)期高糖高脂飲食容易使肝臟發(fā)生脂肪變性，此時(shí)會(huì)引發(fā)應(yīng)對(duì)脂肪過(guò)度沉積的代償機(jī)制，線粒體脂肪酸氧化增強(qiáng)，但是脂肪酸氧化增強(qiáng)而產(chǎn)生的大量活性氧ROS 可以促進(jìn)白細(xì)胞介素?1β（IL?1β）、腫瘤壞死因子?α（TNF?α）、白細(xì)胞介素?6（IL?6）等有害炎癥因子的基因表達(dá)，繼而導(dǎo)致肝臟發(fā)生炎癥反應(yīng)［42］。糖原合成酶激酶3β（GSK?3β）被認(rèn)為與IL?6、IL?1β、TNF?α 等促炎因子在機(jī)體組織中表達(dá)的含量有關(guān)，但是GSK?3β 的活性受到p?Akt 的抑制，p?Akt 通過(guò)磷酸化GSK?3β 上的Ser9 來(lái)抑制其活性［43］。研究發(fā)現(xiàn)，在AMPK 信號(hào)通路被激活后，p?Akt 的含量增加，使GSK?3β 活性受到抑制，IL?1β、IL?6、TNF?α 等促炎因子的表達(dá)受到抑制［44］。黃芪甲苷可以調(diào)控AMPK／Akt／GSK?3β 信號(hào)通路［6，16，45］，從而減少TNF?α、IL?1β、IL?6 等有害促炎相關(guān)物質(zhì)在肝臟組織中的表達(dá)，減輕肝臟炎癥反應(yīng)的程度［24，46］。

Toll 樣受體?4（TLR4）／髓樣分化因子（MyD88）／核因子κB（NF?κB）作為介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的經(jīng)典通路，當(dāng)NAFLD 患者發(fā)展為NASH 時(shí)，該通路被發(fā)現(xiàn)在肝組織中顯著激活［47］。TLR4 在所有肝組織細(xì)胞中均有表達(dá)，尤其是對(duì)于單核?巨噬細(xì)胞系統(tǒng)來(lái)源的肝庫(kù)普弗細(xì)胞來(lái)說(shuō)，TLR4是其識(shí)別危險(xiǎn)信號(hào)的主要管道［48］。當(dāng)機(jī)體處在非炎癥反應(yīng)狀態(tài)的情況下，NF?κB 與核轉(zhuǎn)錄因子κB 抑制因子（IκB）結(jié)合形成復(fù)合物，以非活性穩(wěn)定狀態(tài)位于細(xì)胞質(zhì)中［49］。當(dāng)機(jī)體由于不健康的飲食造成腸道菌群的紊亂，循環(huán)系統(tǒng)血液中的腸源性內(nèi)毒素脂多糖和游離脂肪酸可以激活TLR4，并與MyD88 結(jié)合形成相關(guān)的復(fù)合物，然后激活下游分子IκB 激酶，從而使NF?κB 能夠轉(zhuǎn)移進(jìn)入核內(nèi)，促進(jìn)其下游炎癥相關(guān)因子TNF?α、IL?6 的基因表達(dá)，誘導(dǎo)肝臟發(fā)生炎癥反應(yīng)［49?50］。相關(guān)研究表明，黃芪甲苷能夠通過(guò)抑制TLR4／MyD88／NF?κB 信號(hào)途徑相關(guān)分子的基因表達(dá)，從而降低血液中TNF?α、IL?6 等有害炎性物質(zhì)的含量，緩解機(jī)體的炎癥反應(yīng)狀態(tài)［51］。

這些研究結(jié)果表明，黃芪甲苷能夠通過(guò)調(diào)控AMPK／Akt／GSK?3β 和TLR4／MyD88／NF?κB 信號(hào)途徑中相關(guān)分子的水平來(lái)抑制炎癥因子的基因表達(dá)，從而抑制肝臟炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。

6 黃芪甲苷可以防止肝細(xì)胞發(fā)生凋亡

NAFLD 患者通常伴有粒體穩(wěn)態(tài)失衡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的情況，而這兩方面原因常常是導(dǎo)致肝臟細(xì)胞發(fā)生凋亡的重要因素。

脂肪變性的肝細(xì)胞內(nèi)存在大量未能及時(shí)清除的ROS，ROS 通過(guò)攻擊線粒體DNA（mtDNA）來(lái)抑制呼吸鏈相關(guān)蛋白的基因表達(dá)，導(dǎo)致呼吸傳遞鏈?zhǔn)軗p，并隨之產(chǎn)生更多的ROS；ROS 靶向攻擊線粒體膜通透性轉(zhuǎn)運(yùn)通道（MPTP）復(fù)合物上的相關(guān)蛋白，造成線粒體膜電位丟失［52］。隨后，細(xì)胞色素c（Cyt c）由線粒體膜間隙轉(zhuǎn)至胞質(zhì)中，和凋亡蛋白酶活化因子1（Apaf?1）以及pro?caspase?9 結(jié)合，形成“凋亡小體”，進(jìn)一步激活下游的caspase?3 蛋白，引發(fā)細(xì)胞凋亡［52?53］。B 淋巴細(xì)胞瘤?2（Bcl?2）蛋白多存在于線粒體外膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，而且能與促凋亡蛋白Bcl?2 相關(guān)X 蛋白（Bax）形成異源二聚體，避免Bax 自身形成同源二聚體，從而穩(wěn)定線粒體膜通透性，抑制Cyt c 的釋放［52，54］。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生穩(wěn)態(tài)失調(diào)時(shí)，會(huì)通過(guò)1，4，5 三磷酸肌醇受體（InsP3R）釋放其儲(chǔ)存的Ca2＋，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2＋超載，隨后激活位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的caspase?12，被激活的caspase?12進(jìn)入胞質(zhì)中，然后作用于caspase?9，進(jìn)而激活caspase?3，致使細(xì)胞發(fā)生凋亡［55?57］。研究發(fā)現(xiàn)，Bcl?2 通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的InsP3R 來(lái)減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣離子過(guò)量釋放，從而減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑引發(fā)細(xì)胞凋亡的情況［58］。

研究發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷通過(guò)提高受損肝細(xì)胞Bcl?2 水平，降低促凋亡蛋白Bax 的水平，達(dá)到減輕細(xì)胞發(fā)生凋亡的情況［59］。此外，黃芪甲苷還可以通過(guò)抑制受損肝組織caspase?9、caspase?3 等凋亡因子的基因表達(dá)來(lái)緩解凋亡發(fā)生和發(fā)展的情況［60］。這些研究結(jié)果表明，Bcl?2／Bax 信號(hào)因子調(diào)控NAFLD 患者肝細(xì)胞發(fā)生凋亡的過(guò)程，可能是防治單純性非酒精性脂肪肝向NASH 轉(zhuǎn)變的重要靶點(diǎn)，但相關(guān)深入的研究還不是很多，仍需要進(jìn)一步探索。

7 總結(jié)與展望

NAFLD 的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣，目前尚無(wú)療效顯著的治療藥物，中藥具有多系統(tǒng)、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)，針對(duì)病理機(jī)制復(fù)雜的疾病可發(fā)揮其綜合優(yōu)勢(shì)。從目前的研究來(lái)看，黃芪甲苷主要通過(guò)抑制脂質(zhì)合成相關(guān)基因的異常表達(dá)、提高抗氧化應(yīng)激能力、減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度、緩解IR、減輕炎癥反應(yīng)和抑制細(xì)胞發(fā)生凋亡等方面作用抑制NAFLD 的發(fā)生和發(fā)展，在相關(guān)研究中也可以發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷比AMPK 激活劑5?氨基咪唑?4?甲酰胺核糖核苷（AICAR）、二甲雙胍、鹽酸羅格列酮等藥品或有更好的抗肝損傷效果［12，34，39］。因此，黃芪甲苷具有不錯(cuò)的應(yīng)用前景，有望將其開發(fā)成為具有良好療效的臨床治療NAFLD 的藥物。黃芪甲苷抗實(shí)驗(yàn)性NAFLD 的相關(guān)作用見表1。

表1 黃芪甲苷抗實(shí)驗(yàn)性NAFLD 的作用總結(jié)

然而，目前對(duì)于黃芪甲苷的實(shí)驗(yàn)研究仍存在一些不足之處（1）目前關(guān)于黃芪甲苷的藥理作用研究多局限于動(dòng)物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，臨床實(shí)驗(yàn)未見相關(guān)報(bào)道，因此距其開發(fā)為成熟的臨床藥物仍有很長(zhǎng)的距離；（2）部分實(shí)驗(yàn)研究缺少陽(yáng)性藥物的參照，因此無(wú)法有力說(shuō)明黃芪甲苷比現(xiàn)有臨床藥物更有優(yōu)勢(shì)，今后有關(guān)研究應(yīng)重視增加陽(yáng)性藥物組這個(gè)問題；（3）許多臨床疾病采用藥物聯(lián)合治療的方案，且大多表現(xiàn)出不錯(cuò)的效果，但是黃芪甲苷聯(lián)合現(xiàn)有臨床藥物治療NAFLD 的實(shí)驗(yàn)研究匱乏，今后可從這方面開展相關(guān)研究；（4）關(guān)于黃芪甲苷在體內(nèi)具體的代謝過(guò)程及其代謝產(chǎn)物的研究還存在相關(guān)空白，需要陸續(xù)開展；（5）目前針對(duì)黃芪甲苷的毒理學(xué)研究報(bào)道較少，雖然黃芪在臨床用藥中并未發(fā)現(xiàn)有明顯的毒性作用，但黃芪甲苷作為黃芪的主要活性物質(zhì)，不能保證其具有絕對(duì)的安全性，因此開展對(duì)黃芪甲苷的毒理學(xué)研究非常有必要。

黃芪甲苷雖有從多方面途徑治療NAFLD 的作用，但總結(jié)現(xiàn)有的研究報(bào)道可以了解其可能通過(guò)激活A(yù)MPK 這個(gè)重要靶點(diǎn)來(lái)發(fā)揮相關(guān)作用，但黃芪甲苷在相關(guān)研究報(bào)道中與AMPK 激活劑AICAR 進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷或比AICAR的效果更好，因此是否存在其他更為關(guān)鍵的作用靶點(diǎn)值得深思?；贏MPK 進(jìn)行黃芪甲苷治療NAFLD 的分子機(jī)制研究可以作為今后研究的一個(gè)切入點(diǎn)，期待發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷治療NAFLD 是通過(guò)激活更為重要的靶點(diǎn)，這對(duì)黃芪甲苷的臨床應(yīng)用或是其他新型藥品的開發(fā)都具有重大意義。