厚果崖豆藤化學(xué)成分及體外抗腫瘤活性

陳 晨余 璽劉亞麗張珊珊黃建新

（平頂山學(xué)院，河南 平頂山467000）

厚果崖豆藤M(fèi)illettia pachycarpaBenth，又稱毛蕊崖豆藤、沖天子、苦檀子，為豆科崖豆藤屬植物的藤［1］。其為巨大藤本，高達(dá)15 m，多生于海拔2 000 m以下的山坡常綠闊葉林中，主要分布于尼泊爾、印度、越南及中國的河南、湖北、湖南、浙江等地［2］。其性熱、味苦辛，具有攻毒、止痛、殺蟲的作用，主要用于小兒疳積、痧氣腹痛、疥瘡、癬、癩等［3］。主要化學(xué)成分為黃酮類、蒽醌、三萜類、生物堿類、多糖等［4］。何力等［5］發(fā)現(xiàn)其可有效抑制乳腺癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)對厚果崖豆藤乙醇提取物進(jìn)行分離、純化得14個(gè)化合物，所有化合物均為首次從該植物中分離得到，以期豐富厚果崖豆藤化學(xué)成分的資源庫，為后續(xù)其抗腫瘤活性的研究提供參考。

1 材料

AVANCE HD 600 MHz型核磁共振波譜儀（TMS 內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker 公司）；Triple 5600＋型高分辨質(zhì)譜儀（美國AB Sciex 公司）；Allegra 15R型全自動(dòng)轉(zhuǎn)子離心機(jī)（美國 Beckman 公司）；SephadeX LH?20（瑞士Pharmacia ＆ Upjohn 公司）；YRE?618型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器廠）；Rudolph201型電子天平（美國Analytical 公司）；柱色譜硅膠（100～200、300～400 目，青島海洋化工廠）；GF254型薄層硅膠板（青島海洋化工廠）；TF2549 L型暗箱式紫外分析儀（德國Merck 公司）；PKL2549型超聲波清洗器（日本Shimadzu 公司）。二甲基亞砜（DMSO，美國Fisher Scientific公司）；噻唑藍(lán)（MTT，美國Amresco 公司）。人乳腺癌細(xì)胞株ZR75?1、人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MDA?MB?435、人卵巢癌細(xì)胞株OVCaR?3、人宮頸癌細(xì)胞株SiHa（中科院上海生命科學(xué)研究院）；順鉑（德州德藥制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H37020524）。提取分離所用溶劑均為分析純。

厚果崖豆藤采自河南省平頂山市，經(jīng)平頂山學(xué)院夏西超教授鑒定為厚果崖豆藤M(fèi)illettia pachycarpaBenth 的藤，標(biāo)本收藏于平頂山學(xué)院藥學(xué)院標(biāo)本室。

2 提取與分離

取干燥厚果崖豆藤52.6 kg，加入5 倍量的95%乙醇回流提取2 次，合并提取液，減壓濃縮，得厚果崖豆藤提取物浸膏10.2 kg。將上述浸膏超聲溶解于水中，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取液分別減壓濃縮，得石油醚部位浸膏（Fr.A，193.5 g）、二氯甲烷部位浸膏（Fr.B，143.5 g）、乙酸乙酯部位浸膏（Fr.C，214.8 g）、正丁醇部位浸膏（Fr.D，176.4 g）。Fr.B 經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚?丙酮（90∶10，60∶40、40∶60、10∶90）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得8個(gè)組分Fr.B?1～Fr.B?8。Fr.B?2 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（80∶20、50∶50、20∶80）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得6個(gè)組分Fr.B?2?1～Fr.B?2?6，F(xiàn)r.B?2?3 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（80∶20）洗脫，得化合物1（24 mg）；Fr.B?2?5經(jīng)Sephadex LH?20 反復(fù)純化，甲醇洗脫，得化合物4（18 mg）。Fr.B?4 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（70∶30、50∶50、30∶70）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得7個(gè)組分Fr.B?4?1～Fr.B?4?7，F(xiàn)r.B?4?2 經(jīng)重結(jié)晶，得化合物2（26 mg）；Fr.B?4?6 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（70∶30）洗脫，得化合物12（18 mg）。Fr.B?5 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（60∶40、40∶60、20∶80）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得5個(gè)組分Fr.B?5?1～Fr.B?5?5。Fr.B?5?3 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（50∶50）洗脫，得化合物11（34 mg）。Fr.C 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?丙酮（80∶20、50∶50、20∶80、0∶100）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得11個(gè)組分Fr.C?1～Fr.C?11，F(xiàn)r.C?3 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?丙酮（70∶30、50∶50、30∶70）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得7個(gè)組分Fr.C?3?1～Fr.C?3?7。Fr.C?3?3 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?丙酮（60∶40）洗脫，得化合物7（19 mg）；Fr.C?3?4 經(jīng)Sephadex LH?20 反復(fù)純化，甲醇洗脫，得化合物3（24 mg）；Fr.C?3?6 經(jīng)Sephadex LH?20反復(fù)純化，甲醇洗脫，得化合物9（22 mg）。Fr.C?7 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?丙酮（70∶30、50∶50、30∶70）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得8個(gè)組分Fr.C?7?1～Fr.C?7?8。Fr.C?7?3 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?丙酮（60∶40）洗脫，得化合物6（22 mg）、8（23 mg）。Fr.C?9 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?丙酮（70∶30、50∶50、30∶70）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得9個(gè)組分Fr.C?9?1～Fr.C?9?9。Fr.C?9?3 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（50∶50）洗脫，得化合物14（28 mg）；Fr.C?9?6 經(jīng)Sephadex LH?20反復(fù)純化，得化合物5（27 mg）。Fr.D 經(jīng)硅膠柱分離，以二氯甲烷?甲醇（90∶10、60∶40、40∶60、10∶90）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得12個(gè)組分Fr.D?1～Fr.D?12，F(xiàn)r.D?7 經(jīng)硅膠柱，以乙酸乙酯?甲醇（70∶30、50∶50、30∶70）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測，合并相似組分，得8個(gè)組分Fr.D?7?1～Fr.D?7?8，F(xiàn)r.D?7?2 經(jīng)硅膠柱，以丙酮?甲醇（50∶50）洗脫，得化合物13（17 mg）；Fr.D?7?6 經(jīng)Sephadex LH?20 反復(fù)純化，甲醇洗脫，得化合物10（21 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：365.1［M＋Na］＋。稀碘化鉍鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.12（1H，s，H?2′），6.78（2H，m，H?5′，6′），4.69（1H，d，J＝8.2 Hz，H?1″），4.08（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?6″a），3.68（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?6″b），3.34～3.55（4H，m，H?2″～5″），2.58（4H，m，H?3，4），2.07（3H，s，H?1）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：31.4（C?1），210.6（C?2），45.8（C?3），29.7（C?4），133.8（C?1′），119.2（C?2′），147.1（C?3′），147.0（C?4′），117.4（C?5′），123.9（C?6′），105.1（C?1″），75.3（C?2″），79.2（C?3″），70.9（C?4″），78.1（C?5″），63.1（C?6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］基本一致，故鑒定為myzodendrone。

化合物2：黃色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：505.2［M＋Na］＋。稀碘化鉍鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.30（1H，brs，H?6′），6.95（1H，s，H?2″），6.81（1H，brs，H?6″），6.50（1H，brs，H?5′），6.39（1H，d，J＝8.2 Hz，H?5″），5.79（1H，brs，H?6），5.60（1H，brs，H?8），5.48（1H，brs，H?a），4.81（1H，d，J＝8.2 Hz，H?2），4.20（1H，d，J＝8.2 Hz，H?3），3.82（1H，m，H?γ），3.57（3H，s，3″?OCH3），3.48（1H，brs，H?β），3.35（1H，brs，H?β）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：104.8（C?1），80.3（C?2），73.1（C?3），199.7（C?4），151.3（C?5），93.7（C?6），147.5（C?7），94.8（C?8），155.7（C?9），100.3（C?10），123.5（C?1′），114.9（C?2′），139.6（C?3′），137.4（C?4′），112.5（C?5′），98.6（C?6′），144.2（C?1″），104.8（C?2″），148.5（C?3″），144.6（C?4″），114.2（C?5″），119.1（C?6″），79.0（C?α），50.4（C?β），59.2（C?γ），55.7（3″?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定為isosilychristin。

化合物3：白色油狀物（丙酮）。ESI?MSm／z：301.4［M＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.69（2H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?3，6），7.48（2H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?4，5），4.27（4H，t，J＝8.2 Hz，H?1′），1.69（2H，dt，J＝12.0，8.2 Hz，H?2′），1.39（4H，m，H?3′），1.03（6H，t，J＝8.2 Hz，H?4′）；13C?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：131.9（C?1），131.9（C?2），130.2（C?3），132.4（C?4），132.4（C?5），130.2（C?6），66.1（C?1′），29.4（C?2′），20.6（C?3′），14.3（C?4′），66.3（?COO）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］基本一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物4：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：483.8［M＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.48（1H，d，J＝8.2 Hz，H?7?），7.03（1H，brs，H?2?），6.68（1H，d，J＝8.2 Hz，H?6?），6.61（1H，d，J＝8.2 Hz，H?5?），6.42（2H，brs，H?2，5），6.30（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?6），6.09（1H，d，J＝8.2 Hz，H?8?），4.41（1H，d，J＝8.2 Hz，H?1′），3.97（1H，d，J＝8.2 Hz，H?1″），2.68（2H，m，H?7）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：129.7（C?1），119.3（C?2），145.7（C?3），143.6（C?4），116.3（C?5），120.8（C?6），35.9（C?7），70.2（C?8），98.7（C?1′），69.4（C?2′），76.8（C?3′），67.4（C?4′），75.3（C?5′），69.1（C?6′），105.2（C?1″），72.6（C?2″），77.1（C?3″），70.2（C?4″），75.1（C?5″），59.8（C?6″），126.8（C?1?），116.2（C?2?），145.7（C?3?），150.8（C?4?），118.3（C?5?），121.7（C?6?），146.1（C?7?），113.9（C?8?），166.4（C?9?）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為isolugrandoside。

化合物5：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：400.2［M＋Na］＋。稀碘化鉍鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（600 MHz，DMSO?d6）δ：5.09（1H，s，H?14），3.97（1H，t，J＝12.0 Hz，H?15），3.87（1H，t，J＝12.0 Hz，H?16a），3.81（1H，m，H?2），3.73（1H，t，J＝12.0 Hz，H?16b），3.60（1H，d，J＝8.2 Hz，H?19a），3.18（1H，d，J＝8.2 Hz，H?19b），1.37（3H，s，H?22），1.29（3H，s，H?23），1.09（3H，s，H?18），0.88（3H，s，H?17），0.79（3H，s，H?20）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：49.2（C?1），65.1（C?2），44.2（C?3），39.7（C?4），55.1（C?5），24.5（C?6），36.4（C?7），136.7（C?8），50.1（C?9），38.6（C?10），20.3（C?11），33.4（C?12），35.8（C?13），129.1（C?14），79.4（C?15），63.7（C?16），24.1（C?17），25.8（C?18），64.7（C?19），17.3（C?20），110.4（C?21），26.1（C?22），25.2（C?23）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為isopropylidenkirenol。

化合物6：白色針晶（丙酮）。ESI?MSm／z：450.8［M＋Na］＋。三氯化鐵?鐵氰化鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：6.20（1H，s，H?6），4.28（1H，m，H?3），1.31（2H，m，H?28），1.19（3H，s，H?19），1.03（6H，d，J＝8.2 Hz，H?26，27），0.91（3H，t，J＝8.2 Hz，H?29），0.85（3H，d，J＝8.2 Hz，H?21），0.76（3H，s，H?18）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：38.1（C?1），35.1（C?2），70.2（C?3），43.0（C?4），175.2（C?5），119.8（C?6），203.1（C?7），34.9（C?8），56.1（C?9），41.2（C?10），21.8（C?11），40.9（C?12），44.1（C?13），58.1（C?14），26.1（C?15），30.1（C?16），56.3（C?17），11.8（C?18），19.1（C?19），38.1（C?20），20.9（C?21），36.3（C?22），28.2（C?23），46.9（C?24），31.2（C?25），19.6（C?26），20.0（C?27），27.0（C?28），13.2（C?29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為豆 甾?5?烯?3β?醇?7?酮。

化合物7：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：449.4［M＋Na］＋。三氯化鐵?鐵氰化鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：5.71（1H，s，H?6），5.22（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，Ha?22），4.97（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，Ha?23），3.74（1H，m，H?3），1.18（3H，s，H?19），0.97（3H，d，J＝8.2 Hz，H?21），0.91（3H，t，J＝8.2 Hz，H?29），0.78（3H，d，J＝8.2 Hz，H?26），0.74（3H，d，J＝8.2 Hz，H? 27），0.71（3H，s，H?18）；3C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：37.1（C?1），30.6（C?2），69.8（C?3），41.7（C?4），164.9（C?5），125.7（C?6），201.6（C?7），46.3（C?8），49.2（C?9），39.1（C?10），20.9（C?11），39.4（C?12），44.2（C? 13），49.7（C?14），27.3（C?15），30.5（C?16），55.1（C?17），13.7（C?18），18.0（C?19），39.2（C?20），20.8（C?21），137.6（C?22），130.5（C?23），50.8（C?24），31.7（C?25），22.4（C?26），20.8（C?27），26.1（C?28），13.8（C?29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為3β?羥基豆甾?5，22?二烯?7?酮。

化合物8：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：310.2［M＋Na］＋。三氯化鐵?鐵氰化鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.62（1H，d，J＝8.2 Hz，H?4），7.20（1H，d，J＝8.2 Hz，H?5），6.71（1H，d，J＝8.2 Hz，H?6），6.09（1H，d，J＝8.2 Hz，H?3），5.11（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?2′），3.39（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?3′），3.31（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?3′），1.96（3H，s，H?4″），1.58（3H，s，H?1″?CH3），1.39（3H，s，H?1″?CH3）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：156.7（C?2），112.4（C?3），145.1（C?4），127.2（C?5），106.8（C?6），163.2（C?7），113.4（C?8），150.6（C?9），113.2（C?10），90.2（C?2′），28.1（C?3′），82.4（C?1″），170.1（C?3″），23.4（C?4″），24.9（?CH3），20.9（?CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為libanoridin。

化合物9：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：287.3［M＋Na］＋。三氯化鐵?鐵氰化鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.13（1H，s，H?12），3.71（1H，m，H?1），3.12（1H，d，J＝12.0 Hz，H?9a），2.73（1H，s，H?5），2.68（1H，dt，J＝12.0，8.2 Hz，H?9b），2.20（3H，d，J＝2.2 Hz，H?13），1.79（1H，m，H?2a），1.68（1H，m，H?2b），1.57（2H，m，H?3），1.52（3H，s，H?14），0.97（3H，s，H?15）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：79.1（C?1），29.6（C?2），39.0（C?3），70.9（C?4），61.8（C?5），196.5（C?6），120.4（C?7），165.7（C?8），41.3（C?9），45.2（C?10），140.2（C?11），121.6（C?12），39.6（C?13），25.1（C?14），53.2（C?15）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為curcolonol。

化合物10：黃色油狀物（丙酮）。ESI?MSm／z：469.4［M＋Na］＋。三氯化鐵?鐵氰化鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：2.63（2H，m，H?1），2.15（3H，s，H?7），2.03（6H，s，H?8，9），1.18（3H，s，H?20′），0.91（9H，d，J＝8.2 Hz，H?16′，17′，18′），0.79（3H，d，J＝8.2 Hz，H?19′）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：188.1（C?1），138.2（C?2），139.7（C?3），188.3（C?4），139.5（C?5），145.2（C?6），13.1（C?7），11.9（C?8），13.7（C?9），22.0（C?1′），39.7（C?2′），73.0（C?3′），43.1（C?4′），22.1（C?5′），38.1（C?6′），32.4（C?7′），36.4（C?8′），25.1（C?9′），36.4（C?10′），29.8（C?11′），36.0（C?12′），24.8（C?13′），40.2（C?14′），29.1（C?15′），23.1（C?16′），23.4（C?17′），19.8（C?18′），20.3（C?19′），27.3（C?20′）。以上數(shù)據(jù)與文 獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為α?tocopherol quinone。

化合物11：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：190.8［M＋Na］＋。稀碘化鉍鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.52（1H，d，J＝8.2 Hz，H?5），7.40（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?6），7.03（1H，d，J＝8.2 Hz，H?2），3.69（3H，s，?OCH3）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：120.8（C?1），115.7（C?2），150.3（C?3），146.2（C?4），123.1（C?5），115.8（C?6），166.9（C?7），52.4（?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致，故鑒定為3，4?二羥基苯甲酸甲酯。

化合物12：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：247.2［M＋Na］＋。三氯化鐵?鐵氰化鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：8.03（1H，d，J＝8.2 Hz，H?4′），5.91（1H，d，J＝8.2 Hz，H?2），5.63（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?5′），4.05（1H，t，J＝8.2 Hz，H?3），3.87（1H，m，H?5），3.79（1H，t，J＝8.2 Hz，H?4），3.64（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?6″a），3.53（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?6″b）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：96.4（C?1），91.8（C?2），75.3（C?3），69.7（C?4），84.2（C?5），60.1（C?6），161.4（C?2′），148.9（C?3′），140.1（C?4′），99.8（C?5′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］基本一致，故鑒定為polybotrin。

化合物13：黃色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：487.4［M＋Na］＋。三氯化鐵?鐵氰化鉀反應(yīng)為陽性，Molish 反應(yīng)呈陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：12.71（1H，s，OH?5），11.05（1H，s，OH?7），9.64（1H，s，OH?4′），9.08（1H，s，OH?3′），7.54（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?6′），7.41（1H，d，J＝8.2 Hz，H?2′），6.75（1H，d，J＝12.0 Hz，H?5′），6.38（1H，d，J＝8.2 Hz，H?8），6.17（1H，d，J＝8.2 Hz，H?6），5.42（1H，d，J＝8.2 Hz，H?1″），3.30～3.71（m，糖質(zhì)子信號(hào)）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：157.1（C?2），134.0（C?3），178.3（C?4），162.4（C?5），100.2（C?6），166.1（C?7），94.7（C?8），155.8（C?9），105.9（C?10），123.6（C?1′），117.1（C?2′），144.3（C?3′），149.2（C?4′），115.8（C?5′），122.4（C?6′），103.1（C?1″），72.5（C?2″），74.3（C?3″），69.1（C?4″），75.7（C?5″），59.3（C?6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］基本一致，故鑒定為槲皮素?3?O?β?D?半乳糖苷。

化合物14：黃色油狀（丙酮）。ESI?MSm／z：360.8［M＋Na］＋。三氯化鐵?鐵氰化鉀反應(yīng)為陽性。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：8.67（1H，s，3?OH），6.90（1H，d，J＝8.2 Hz，H?5），6.71（1H，d，J＝2.2 Hz，H?2），6.59（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?6），4.51（1H，d，J＝8.2 Hz，H?9a，H?10a），4.38（1H，d，J＝8.2 Hz，H?9b，H?10b），2.43（1H，m，H?2′，H?2″），2.31（3H，s，H3?7），1.09（3H，d，J＝12.0 Hz，H?3′，H?3″），1.03（3H，d，J＝12.0 Hz H?4′，H?4″）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：139.1（C?1），119.1（C?2），157.3（C?3），117.3（C?4），127.4（C?5），119.8（C?6），20.9（C?7），76.4（C?8），66 .2（C?9），66.4（C?10），178.1（C?1′），35.3（C?2′），18.7（C?3′），18.7（C?4′），178.1（C?1″），35.3（C?2″），18.7（C?3″），18.7（C?4″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］基本一致，故鑒定為8?hydroxy?9，10?diisobutyryloxythymol。

4 體外抗腫瘤活性篩選

采用MTT 法［20］測試所得化合物的體外抗人體腫瘤細(xì)胞（人乳腺癌細(xì)胞株ZR75?1、人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 株 MDA?MB?435、人卵巢癌細(xì)胞株OVCaR?3、人宮頸癌細(xì)胞株SiHa）的活性，以順鉑為陽性對照物。取對數(shù)生長期的ZR75?1、MDA?MB?435、OVCaR?3、SiHa 培養(yǎng)基，稀釋至5×104個(gè)／mL，各設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，置于96 孔板中，于36.8 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，分別加入順鉑、化合物1～14（濃度分別 為100、50、25 μmol／L）。培 養(yǎng)48 h，加入MTT 溶液20 μL 進(jìn)行染色，繼續(xù)培養(yǎng)12 h，吸去培養(yǎng)液。每孔分別加入DMSO 溶液100 μL，振蕩均勻，在520 nm 波長下檢測吸光度。采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算各化合物的IC50值，見表1。結(jié)果顯示化合物2對MDA?MB?435細(xì)胞具有一定的體外抑制作用，化合物8對ZR75?1、OVCaR?3細(xì) 胞，化合物9對ZR75?1、MDA?MB?435、SiHa細(xì)胞，化合物12對MDA?MB?435、SiHa細(xì)胞具有較強(qiáng)的體外抑制作用。

表1 體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)IC50值（， n＝3， μmol／L）Tab.1 IC50values in antitumor tests in vitro（， n ＝3，μmol／L）

表1 體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)IC50值（， n＝3， μmol／L）Tab.1 IC50values in antitumor tests in vitro（， n ＝3，μmol／L）

5 討論

本研究從厚果崖豆藤中分離得14個(gè)化合物，所有化合物均為首次從厚果崖豆藤中分離得，其中化合物1～2、5、8～9為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)。采用ZR75?1、MDA?MB?435、OVCaR?3、SiHa細(xì)胞對厚果崖豆藤體外抗腫瘤活性進(jìn)行篩選，結(jié)果表明化合物2、8～9、12對腫瘤細(xì)胞株具有不同程度的抑制作用，其中化合物9對MDA?MB?435 腫瘤細(xì)胞株的抑制作用優(yōu)于順鉑，表明厚果崖豆藤具有一定的抗腫瘤開發(fā)潛力，以期本研究結(jié)果豐富厚果崖豆藤化學(xué)成分的物質(zhì)基礎(chǔ)。