實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎與腸道免疫微環(huán)境相關(guān)性的Meta分析

劉曉君 彭小燕 馬金昀 程曉東

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院臨床免疫研究所，上海200437）

多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)以炎性脫髓鞘為主要病理特點(diǎn)的自身免疫性疾病，臨床表現(xiàn)以肢體癱瘓、感覺(jué)異常、共濟(jì)失調(diào)、視力障礙、精神異常等反復(fù)發(fā)作的神經(jīng)功能障礙為主，具有高復(fù)發(fā)率、高致殘率和難治愈等特點(diǎn)［1-2］。MS的確切病因目前尚未完全闡明，遺傳因素和環(huán)境因素（如EB病毒感染、低維生素D狀態(tài)、吸煙、腸道微生態(tài)系統(tǒng)）都共同參與MS的發(fā)生發(fā)展［3］。MS及其動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）常伴隨腸道微生物群結(jié)構(gòu)的變化，腸黏膜屏障完整性的破壞和腸道免疫系統(tǒng)的激活，繼而通過(guò)菌-腸-腦軸上行途徑觸發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥和神經(jīng)變性。MS患者的腸道免疫微環(huán)境與健康人群相比存在明顯差異，如MS患者腸道通透性增加、炎性Th17細(xì)胞數(shù)目增多等，其均與腸道微生物群的特異性改變密切相關(guān)［4-5］。研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)菌（germ free，GF）小鼠經(jīng)菌群移植接受來(lái)自MS患者的腸道菌群后誘導(dǎo)EAE，與接受來(lái)自健康人群腸道菌群的GF小鼠相比，其神經(jīng)癥狀明顯加重［6-7］。此外，在無(wú)菌小鼠與無(wú)特定病原體（specific pathogen free，SPF）小鼠的EAE動(dòng)物模型中，無(wú)菌EAE小鼠發(fā)病時(shí)間延后，神經(jīng)癥狀評(píng)分降低，并伴隨腸道和脊髓中IFN-γ和IL-17等炎癥細(xì)胞因子分泌的減少，抑制炎性的CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例顯著升高［8］。

較多研究表明腸道菌群的失調(diào)、腸道免疫功能的紊亂與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［9-11］，而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是臨床前基礎(chǔ)研究的關(guān)鍵步驟，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格評(píng)估的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)論可作為開(kāi)展臨床研究的證據(jù)支持。因此本研究旨在通過(guò)Meta分析對(duì)MS動(dòng)物模型EAE與腸道免疫微環(huán)境變化的關(guān)系進(jìn)行系統(tǒng)性分析，以期更深入地認(rèn)識(shí)MS的發(fā)病機(jī)理，為后續(xù)臨床研究的開(kāi)展提供可靠的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 檢索策略 以“實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎”“腸道菌群”“腸道微生物群”“腸道免疫”“腸道黏膜免疫”“腸道T淋巴細(xì)胞”“腸道B淋巴細(xì)胞”“腸道巨噬細(xì)胞”“腸道樹(shù)突狀細(xì)胞”等為中文檢索詞，檢索CNKI的中國(guó)學(xué)術(shù)期刊全文出版總庫(kù)、維普中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方中國(guó)學(xué)術(shù)期刊數(shù)據(jù)庫(kù)等中文數(shù)據(jù)庫(kù)。以“Experimental autoimmune encephalomyelitis”“EAE”“Microbiota”“Microbiome”“Gut or Intestinal immunity”“Gut or Intestinal mucosal immunity”“Gut or Intestinal T cell”“Gut or Intestinal B cell”“Gut or Intestinal Macrophage”“Gut or Intestinal Dendritic cell”等為英文檢索詞，檢索Pubmed、Science Direct和Medline英文數(shù)據(jù)庫(kù)。檢索時(shí)間為建庫(kù)至2020年1月8日，檢索語(yǔ)言無(wú)限制。

1.2 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn) ①研究設(shè)計(jì)類型為對(duì)照研究，不限制其是否實(shí)施隨機(jī)分組；②研究對(duì)象為EAE嚙齒類動(dòng)物疾病模型，對(duì)動(dòng)物種屬和來(lái)源不進(jìn)行限制，對(duì)具體造模方法亦不限制；③結(jié)局指標(biāo)為EAE模型腸道菌群豐度及腸道內(nèi)淋巴細(xì)胞百分比；④原始文獻(xiàn)為公開(kāi)發(fā)表文獻(xiàn)。

1.3 文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn) ①重復(fù)報(bào)道或針對(duì)同一研究對(duì)象的多個(gè)文獻(xiàn)（納入樣本量最大、質(zhì)量最好的）；②數(shù)據(jù)不完整，無(wú)法提取原始數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的文獻(xiàn)；③無(wú)法獲取原文的文獻(xiàn)；④會(huì)議論文、學(xué)位論文；⑤綜述文獻(xiàn)。

1.4 文獻(xiàn)資料提取2名研究者對(duì)最初搜索所得文章的標(biāo)題進(jìn)行相關(guān)性審查，并使用研究納入/排除標(biāo)準(zhǔn)對(duì)文章摘要進(jìn)行評(píng)估，對(duì)初篩后所得文章進(jìn)行全文閱讀，以進(jìn)一步審查是否符合納入標(biāo)準(zhǔn)。2名研究者對(duì)納入的文獻(xiàn)獨(dú)立地進(jìn)行數(shù)據(jù)提取和質(zhì)量評(píng)價(jià)，并交叉核對(duì)，如遇分歧則由第三方裁決。文獻(xiàn)提取內(nèi)容包括：第一作者/發(fā)表時(shí)間、動(dòng)物種屬、動(dòng)物周齡、動(dòng)物性別、研究例數(shù)、隨機(jī)方法、結(jié)局指標(biāo)等。

1.5 文獻(xiàn)偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估2名研究者根據(jù)SYRCLE中心定制的SYRCLE動(dòng)物實(shí)驗(yàn)偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具（SYRCLE's Risk Of Bias Tool For Animal Studies），對(duì)納入的文獻(xiàn)進(jìn)行偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估［12-13］。該工具是專門適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)內(nèi)在真實(shí)性評(píng)估的工具，包括6種偏倚類型的10個(gè)條目：①選擇性偏倚（序列產(chǎn)生、基線特征、分配隱藏）；②實(shí)施偏倚（動(dòng)物安置隨機(jī)化、盲法）；③測(cè)量偏倚（隨機(jī)性結(jié)果評(píng)估、盲法）；④失訪偏倚（不完整數(shù)據(jù)報(bào)告）；⑤報(bào)告偏倚（選擇性結(jié)果報(bào)告）；⑥其他偏倚。評(píng)估結(jié)果以“是”“否”和“不確定”分別代表“低偏倚風(fēng)險(xiǎn)”“高偏倚風(fēng)險(xiǎn)”和“不確定偏倚風(fēng)險(xiǎn)”。2名研究者分別獨(dú)立進(jìn)行偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分，并進(jìn)行交叉驗(yàn)證，當(dāng)意見(jiàn)不一致時(shí)，經(jīng)討論后尋求第三方建議。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Cochrane協(xié)作網(wǎng)推薦的Review Manager 5.3軟件進(jìn)行Meta分析。對(duì)于連續(xù)性資料，腸道內(nèi)淋巴細(xì)胞百分比及腸道菌群豐度采用均數(shù)差（mean difference，MD）及95%CI為療效分析統(tǒng)計(jì)量，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用I2值衡量各研究間異質(zhì)性大小，I2≥50%采用隨機(jī)效應(yīng)模型，并分析其異質(zhì)性來(lái)源，I2＜50%采用固定效應(yīng)模型［14］。對(duì)無(wú)法進(jìn)行數(shù)據(jù)合并的結(jié)局指標(biāo)，采用描述性方法進(jìn)行分析。原始數(shù)據(jù)通過(guò)GetData Graph軟件獲取，連續(xù)性數(shù)據(jù)參照劉海寧等［15］的方法進(jìn)行提取。

2 結(jié)果

2.1 檢索結(jié)果 通過(guò)關(guān)鍵詞檢索，本研究共檢索到1 176篇文獻(xiàn)與“腸道免疫”“腸道菌群”和“實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎”相關(guān)的文章，其中Pubmed 588篇，Science Direct 172篇，Medline 416篇。經(jīng)過(guò)EndNote軟件查重后，排除重復(fù)文獻(xiàn)898篇，對(duì)剩余247篇文獻(xiàn)進(jìn)行標(biāo)題和摘要閱讀，排除非病例對(duì)照研究、非動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、與主題明顯不相符的文獻(xiàn)166篇，剩81篇文獻(xiàn)進(jìn)行全文閱讀，排除與主題無(wú)關(guān)、無(wú)數(shù)據(jù)或數(shù)據(jù)不相關(guān)、無(wú)法獲取原文等文獻(xiàn)，最終納入8篇，全部為英文文獻(xiàn)，其中，與腸道免疫相關(guān)3篇，與腸道菌群相關(guān)5篇，具體文獻(xiàn)檢索流程見(jiàn)圖1。

圖1 文獻(xiàn)檢索流程及結(jié)果Fig.1 Flow chart of literature search and study selection process

2.2 文獻(xiàn)納入情況 本研究共納入發(fā)表年份在2013年至2019年間的8篇文獻(xiàn)，共納入123例研究對(duì)象，其中樣本量最少3例，最多24例。5項(xiàng)研究觀察了模型組與對(duì)照組腸道菌群相對(duì)豐度的差異，3項(xiàng)研究觀察了模型組與對(duì)照組腸道Th17、Treg的百分比。納入文獻(xiàn)的基本特征見(jiàn)表1。

表1 納入文獻(xiàn)的基本特征Tab.1 Details of included studies

2.3 偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的具體結(jié)果見(jiàn)表2。納入的8個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，僅有2個(gè)實(shí)驗(yàn)研究采用隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行了隨機(jī)分組，其他研究均未詳細(xì)描述說(shuō)明。

表2 納入研究的SYRCLE偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果Tab.2 SYRCLE bias risk assessment results of inclusion researches

2.4 Meta分析結(jié)果

2.4.1 模型組與正常組乳酸桿菌屬 共3篇文獻(xiàn)研究了乳酸桿菌屬的變化［16-18］。Meta分析結(jié)果顯示Note：Animal：B.BALB/C mice，C.C57BL/6 mice，N.NOD mice，H.HLA-DR3.DQ8 transgenic mice；Gender：F.Female；NA.Not available；C.Control，M.Model；Outcome assessment：（1）.Th17，（2）.Treg，（3）.Lactobacillus，（4）.Bacteriodetes，（5）.Verrucomicrobia，（6）.Alistipes，（7）.Tenericutes，（8）.Firmicutes.各研究之間存在較高的異質(zhì)性（I2=73%，P＜0.05），故采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析，Meta分析結(jié)果顯示：MD=-3.26，95%CI：-5.06，-1.47，P=0.000 4，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明EAE模型組腸道內(nèi)有益菌乳酸桿菌顯著減少。見(jiàn)圖2、表3。

圖2 Lactobacillus相對(duì)豐度比較的Meta分析Fig.2 Meta analysis of Lactobacillus relative abundance comparison

2.4.2 模型組與正常組擬桿菌門 共2篇文獻(xiàn)研究了擬桿菌門的變化［19-20］。Meta分析結(jié)果顯示各研究之間未見(jiàn)明顯的異質(zhì)性（I2=0%，P＞0.01），故采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析，Meta分析結(jié)果顯示：MD=-4.44，95%CI：-7.31，-1.57，P=0.002，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明EAE模型組腸道擬桿菌門顯著減少。見(jiàn)圖3、表3。

圖3 Bacteriodetes相對(duì)豐度比較的Meta分析Fig.3 Meta analysis of Bacteriodetes relative abundance comparison

2.4.3 模型組與正常組疣微菌 共2篇文獻(xiàn)研究了疣微菌的變化［19-20］。Meta分析結(jié)果顯示各研究之間存在很高的異質(zhì)性（I2=93%，P＜0.01），故采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析，Meta分析結(jié)果顯示：MD=11.72，95%CI：5.95，17.49，P＜0.000 1，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明EAE模型組腸道內(nèi)疣微菌顯著高于正常對(duì)照組。見(jiàn)圖4、表3。

圖4 Verrucomicrobia相對(duì)豐度比較的Meta分析Fig.4 Meta analysis of Verrucomicrobia relative abundance comparison

2.4.4 模型組與正常組Alistipes菌屬 共2篇文獻(xiàn)研究了Alistipes菌屬的變化［17-18］。Meta分析結(jié)果顯示各研究之間存在很高的異質(zhì)性（I2=97%，P＜0.01），故采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析，Meta分析結(jié)果顯示：MD=-1.52，95%CI：-6.35，3.31，P=0.54，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明Alistipes菌屬變化與EAE之間無(wú)顯著相關(guān)性。見(jiàn)圖5、表3。

圖5 Alistipes相對(duì)豐度比較的Meta分析Fig.5 Meta analysis of Alistipes relative abundance comparison

2.4.5 模型組與正常組柔膜菌門 共2篇文獻(xiàn)研究了柔膜菌門的變化［19-20］。Meta分析結(jié)果顯示各研究之間存在很高的異質(zhì)性（I2=98%，P＜0.01）。采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析，I2=98%，Meta分析結(jié)果顯示：MD=-0.67，95%CI：-2.63，1.29，P=0.50，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明柔膜菌門變化與EAE之間無(wú)顯著相關(guān)性。見(jiàn)圖6、表3。

圖6 Tenericutes相對(duì)豐度比較的Meta分析Fig.6 Meta analysis of Tenericutes relative abundance comparison

表3 腸道菌群相對(duì)豐度比較的Meta分析Tab.3 Meta-analysis of relative abundance of intestinal microbiota

2.4.6 模型組與正常組厚壁菌門 共2篇文獻(xiàn)研究了厚壁菌門的變化［19-20］。Meta分析結(jié)果顯示各研究之間存在很高的異質(zhì)性（I2=80%，P＜0.05）。采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析，I2=80%，Meta分析結(jié)果顯示：MD=-1.67，95%CI：-9.22，5.88，P=0.66，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明厚壁菌門變化與EAE之間無(wú)顯著相關(guān)性。見(jiàn)圖7、表3。

圖7 Firmicutes相對(duì)豐度比較的Meta分析Fig.7 Meta analysis of Firmicutes relative abundance comparison

2.4.7 模型組與正常組腸道Th17細(xì)胞 納入的3篇文獻(xiàn)報(bào)道了模型組與正常組腸道內(nèi)Th17細(xì)胞的百分比。Meta分析結(jié)果顯示各研究之間存在很高的異質(zhì)性（I2=100%，P＜0.01），因此這一數(shù)據(jù)不進(jìn)行合并分析，采用描述性分析。DUC等［17］2019年的研究中模型組RORγT+IL-17+T細(xì)胞百分比為（18.73±5.85）%，正常組百分比為（11.85±2.63）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。NOURI等［21］2014年的研究中模型組CD3+IL-17+T細(xì)胞百分比為（30.53±2.26）%，正常組百分比為（5.09±0.85）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.001。SUZANA等［22］2017年的研究中模型組Th17細(xì)胞百分比為（1.75±0.53）%，正常組百分比為（0.26±0.18）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4.8 模型組與正常組腸道Treg納入的3篇文獻(xiàn)報(bào)道了模型組與正常組腸道內(nèi)Treg細(xì)胞的百分比［17，21-22］。Meta分析結(jié)果顯示各研究之間存在很高的異質(zhì)性（I2=95%，P＜0.01），采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析，Meta分析結(jié)果顯示：MD=-1.74，95%CI：-2.85，-0.63，P=0.002，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖8。

圖8 腸道內(nèi)Treg比較的Meta分析Fig.8 Meta analysis of Treg in the intestine

3 討論

本研究系統(tǒng)性地評(píng)價(jià)了已發(fā)表數(shù)據(jù)關(guān)于MS動(dòng)物模型EAE腸道菌群，腸道內(nèi)Th17、Treg淋巴細(xì)胞變化的結(jié)局指標(biāo)。共3篇文獻(xiàn)研究了乳酸桿菌屬的變化［16-18］，由于存在較高異質(zhì)性，對(duì)納入研究進(jìn)行敏感性分析，在排除MANGALAM等［16］2017的研究后異質(zhì)性顯著下降（I2=0%，P＞0.05），或排除LI等［18］的研究后異質(zhì)性顯著下降（I2=0%，P＞0.05）；對(duì)異質(zhì)性較大的文獻(xiàn)進(jìn)行分析，MANGALAM等［16］2017研究所用的對(duì)象為轉(zhuǎn)基因小鼠，而其余兩組為C57BL/6小鼠，實(shí)驗(yàn)對(duì)象的差異可能造成了較大的異質(zhì)性；LI等［18］的研究中，相比其余兩項(xiàng)研究，研究對(duì)象樣本量較大，實(shí)驗(yàn)對(duì)象數(shù)量的差異可能造成了較大的異質(zhì)性。共2篇文獻(xiàn)研究了疣微菌的變化［19-20］，對(duì)納入的2篇文獻(xiàn)進(jìn)行異質(zhì)性分析，兩項(xiàng)研究中研究對(duì)象背景、飼養(yǎng)環(huán)境、周齡、樣本量、造模方式等均相當(dāng)，二者觀察時(shí)間點(diǎn)不同可能是異質(zhì)性較大的來(lái)源。共2篇文獻(xiàn)研究了Alistipes菌屬的變化［17-18］，因存在較高的異質(zhì)性，對(duì)兩篇文獻(xiàn)進(jìn)行異質(zhì)性分析，發(fā)現(xiàn)兩項(xiàng)研究中研究對(duì)象種類及樣本量存在的顯著差異可能是異質(zhì)性較高的主要來(lái)源。納入的3篇文獻(xiàn)［17，21-22］報(bào)道了模型組與正常組腸道內(nèi)Treg的百分比，因研究存在很高的異質(zhì)性，采用敏感性分析，剔除NOURI等［21］2014的研究后異質(zhì)性顯著降低（I2=34%）。對(duì)異質(zhì)性較大的文獻(xiàn)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該研究中動(dòng)物模型為過(guò)繼轉(zhuǎn)移型EAE，研究對(duì)象模型存在的差異可能是異質(zhì)性較高的主要來(lái)源。本研究結(jié)果顯示，EAE鼠腸道內(nèi)存在菌群結(jié)構(gòu)的改變，乳酸桿菌和擬桿菌含量顯著減少，而疣微菌門含量增加，Alistipes菌、厚壁菌、柔膜菌門含量未見(jiàn)顯著變化。模型組腸道內(nèi)Th17細(xì)胞高于正常組，模型組腸道內(nèi)Treg細(xì)胞低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

研究表明，MS患者腸道微生物群、腸道免疫細(xì)胞與健康人相比存在明顯差異。MS患者腸道中甲氧短桿菌、嗜黏蛋白-艾克曼菌、不動(dòng)桿菌等菌群顯著富集，而隸屬擬桿菌門的丁酸弧菌等數(shù)量明顯減少［6-7，23］，口服益生菌（乳桿菌屬、雙歧桿菌屬、鏈球菌屬）可緩解MS患者癥狀，促進(jìn)有益菌乳桿菌屬含量的增加［24］。在MS動(dòng)物模型研究中，腸道菌群被認(rèn)為是發(fā)生脫髓鞘的初始介導(dǎo)因子［25］。Albino oxford（AO）大鼠對(duì)EAE的誘導(dǎo)具有極強(qiáng)的抵抗力，抗生素對(duì)AO大鼠腸道微生物群的擾動(dòng)改變了腸道微生物群的組成，伴隨Peyer氏結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例減少，導(dǎo)致AO大鼠表現(xiàn)出EAE癥狀，CNS中觀察到更多的炎性浸潤(rùn)和更高的IL-17產(chǎn)生，而將AO腸道菌群移植到易患EAE的豚鼠身上改善了疾病的嚴(yán)重程度［26］。表明腸道菌群、腸道免疫的變化與MS/EAE的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

MS目前被廣泛認(rèn)為是由遺傳因素和環(huán)境因素相互作用共同導(dǎo)致的自身免疫性疾病。輔助性T細(xì)胞（T helper cell，Th）17型是MS關(guān)鍵的致病細(xì)胞，是第一批透過(guò)血腦屏障浸潤(rùn)C(jī)NS的外周淋巴細(xì)胞［27］。盡管Th17被認(rèn)為是MS的核心致病細(xì)胞，但其在外周激活的部位仍不明確。研究表明，腸道微環(huán)境是允許自身反應(yīng)性T細(xì)胞遷移到大腦的主要部位，是控制CNS髓鞘特異性T細(xì)胞的重要部位之一［28］。EAE是研究MS的經(jīng)典動(dòng)物模型，因此，確定MS動(dòng)物模型EAE小鼠腸道內(nèi)淋巴細(xì)胞情況對(duì)探索MS的病因和病理機(jī)制具有重要意義。在EAE小鼠模型中，髓鞘特異性T細(xì)胞的激活及分化為致病性的Th17細(xì)胞主要發(fā)生在腸道內(nèi)［29-30］。在主動(dòng)免疫和過(guò)繼免疫的兩種EAE模型中，研究者觀察到在中樞神經(jīng)癥狀發(fā)生之前，腦源性Th17優(yōu)先浸潤(rùn)結(jié)腸固有層，通過(guò)阻斷過(guò)繼免疫模型中α4β7整合素途徑可以特異性地阻斷Th17的腸內(nèi)歸巢，從而緩解EAE疾病的嚴(yán)重程度［31］。DITTEL等［32］發(fā)現(xiàn)腎上腺皮質(zhì)激素可通過(guò)減少腸道固有層中細(xì)胞因子IL-6的分泌，減少促炎性Th17的分化，增加Foxp3+Treg數(shù)量，從而減輕EAE小鼠臨床癥狀評(píng)分，阻止疾病的進(jìn)程。腸道內(nèi)Th17的過(guò)度激活、Treg的缺失及抑制性功能的缺陷均可能參與EAE的發(fā)病，雖然其確切的作用機(jī)制尚未完全明確。

Th17細(xì)胞組成性地表達(dá)于回腸、結(jié)腸固有層［33］，其發(fā)育依賴于腸道內(nèi)微生物群，同時(shí)，也是控制病原微生物所必需的，有助于維持腸道正常免疫功能，可動(dòng)員和招募先天免疫細(xì)胞到病原體感染部位清除致病菌，而過(guò)度誘導(dǎo)的Th17則會(huì)導(dǎo)致腸道免疫功能紊亂，擴(kuò)大腸道內(nèi)免疫反應(yīng)，從而引發(fā)自身免疫性疾病。腸道菌群有利于腸道黏膜免疫系統(tǒng)的發(fā)育和免疫調(diào)控，可通過(guò)直接或間接方式誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)T細(xì)胞的增殖分化來(lái)維持腸道黏膜免疫的平衡，協(xié)調(diào)機(jī)體的免疫耐受［34-35］。腸道菌群的改變可通過(guò)發(fā)育致病性T細(xì)胞而參與MS的發(fā)生和發(fā)展［36］。Treg及其分泌的抑制性細(xì)胞因子IL-10和TGF-β在維持腸道免疫耐受方面發(fā)揮至關(guān)重要的作用，可以阻止異常的自身免疫反應(yīng)發(fā)生［37-38］。Th17與Treg相互拮抗、制約，是維持正常的機(jī)體整體免疫功能和腸道免疫屏障功能中關(guān)鍵的因素，二者的失衡在MS/EAE發(fā)病機(jī)制中起著重要作用［39］，表明腸道內(nèi)Th17、Treg淋巴細(xì)胞與EAE之間存在相關(guān)性，并參與了EAE疾病的進(jìn)程。

本研究納入的8篇文獻(xiàn)研究對(duì)象樣本量相對(duì)較少，納入的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在隨機(jī)序列產(chǎn)生方法、盲法的使用等方法報(bào)告不充分，不能確定潛在偏倚風(fēng)險(xiǎn)。此外，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)重要的基線特征未闡明，隨機(jī)分配在目前尚未成為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐模式，各研究觀察環(huán)境、嚙齒類動(dòng)物來(lái)源、腸道部位、腸道淋巴細(xì)胞、造模方式、疾病觀察時(shí)間點(diǎn)等不同，均可能是造成結(jié)果偏倚的因素，因此本研究在進(jìn)行資料合并時(shí)，存在結(jié)局指標(biāo)異質(zhì)性較大的問(wèn)題。腸道免疫受多種因素的影響（飲食、藥物、菌群等），且其變化在疾病的過(guò)程中呈動(dòng)態(tài)發(fā)展，此外腸道不同部位免疫應(yīng)答亦不相同。因此，未來(lái)仍需更多大樣本以及高質(zhì)量的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)來(lái)證明腸道菌群及腸道免疫系統(tǒng)在MS/EAE中扮演的確切角色，以期提供可靠的有價(jià)值的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

綜上所述，本文系統(tǒng)地總結(jié)了MS動(dòng)物模型EAE與腸道免疫微環(huán)境（包括腸道菌群，腸道內(nèi)Th17、Treg淋巴細(xì)胞）之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)二者密切相關(guān)。EAE模型鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)存在明顯的改變，并伴有腸道免疫穩(wěn)態(tài)（腸道Th17、Treg細(xì)胞）的變化。靶向腸道菌群和腸道免疫的治療可能影響到MS/EAE的發(fā)生與發(fā)展，為多發(fā)性硬化的治療提供新的思路與策略。