Wnt信號(hào)通路與卵巢癌治療新進(jìn)展

裴越?付莉

【摘要】Wnt通路是一條高度保守的傳導(dǎo)通路，Wnt信號(hào)通路異常激活與腫瘤發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。近年來，不少研究證明卵巢癌中存在異常激活的Wnt通路信號(hào)蛋白。該文復(fù)習(xí)了卵巢癌與Wnt通路相關(guān)的新近研究進(jìn)展，對(duì)Wnt信號(hào)通路、其在卵巢癌發(fā)生發(fā)展的作用及Wnt通路中潛在的卵巢癌治療新靶點(diǎn)做一綜述，旨在為卵巢癌的臨床治療提供新思路。

【關(guān)鍵詞】Wnt信號(hào)通路;卵巢癌;免疫治療;靶點(diǎn)治療

Research progress on Wnt signaling pathway and ovarian cancer therapy Pei Yue， Fu Li. Department of Obstetrics and Gynecology， the Second Hospital of Jilin University， Changchun 130041， China

Corresponding author， Fu Li， E-mail： doctorfuli@ sina. com

【Abstract】Wnt signaling pathway is a highly conserved pathway. Abnormal activation of the Wnt signaling pathway is intimately correlated with the incidence and progression of tumors. In recent years， accumulated studies have proven that the proteins related to the abnormally-activated Wnt signaling pathway are expressed in ovarian cancer. In this article， the latest research progress on the ovarian cancer and the Wnt signaling pathway was reviewed， the role of the Wnt signaling pathway in the incidence and progression of ovarian cancer and the potential novel therapeutic targets for ovarian cancer in the in Wnt signaling pathway were summarized， aiming to provide novel ideas for the clinical treatment of ovarian cancer.

【Key words】Wnt signaling pathway;Ovarian cancer;Immunotherapy;Targeted therapy

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其病死率居于婦科惡性腫瘤首位。卵巢癌中80%的病理類型為上皮性卵巢癌（EOC）。輸卵管分泌細(xì)胞是大多數(shù)卵巢癌的起源細(xì)胞。卵巢癌早期癥狀隱匿，發(fā)現(xiàn)時(shí)多為中晚期，預(yù)后較差。Wnt是一類分泌型糖蛋白，通過自分泌或旁分泌發(fā)揮作用。Wnt信號(hào)通路具有調(diào)節(jié)干細(xì)胞生長和器官發(fā)育的作用，其異常激活會(huì)誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。本文通過總結(jié)Wnt通路的新近臨床研究進(jìn)展，分析其在卵巢癌靶向治療中的作用，旨在為卵巢癌的臨床治療提供新思路。

一、Wnt信號(hào)通路

1982年Nusse等首先發(fā)現(xiàn)了Wnt家族，之后人們對(duì)Wnt信號(hào)通路的認(rèn)識(shí)不斷加深，目前Wnt信號(hào)通路已基本被闡明，其中包括經(jīng)典的Wnt/β-連環(huán)蛋白（catenin）信號(hào)通路，非經(jīng)典的Wnt通路，后者又包括Wnt-Ca2+信號(hào)通路、平面細(xì)胞極性（PCP）信號(hào)通路。Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因突變與胃腸癌、白血病、黑色素瘤、乳腺癌及卵巢癌等發(fā)生有密切關(guān)系[1]。

1.經(jīng)典Wnt/β-catenin信號(hào)通路的作用

Wnt1類配體（Wnt2、Wnt3、Wnt3a和Wnt8a）與卷曲蛋白（FZD）受體及共同受體相關(guān)蛋白（LRP）5/6結(jié)合，啟動(dòng)Wnt信號(hào)通路，Dishevelled（DVL）蛋白磷酸化后，將信號(hào)傳導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，抑制多發(fā)性腺瘤病大腸桿菌（APC）、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、軸蛋白（AXIN）、β-catenin復(fù)合體酶活性，進(jìn)而β-catenin蛋白不被磷酸化，防止泛素蛋白酶對(duì)其識(shí)別降解。在Wnt信號(hào)缺失情況下，β-catenin能被磷酸化后的多蛋白復(fù)合體降解。該多蛋白復(fù)合體失活情況下，β-catenin將大量在胞質(zhì)內(nèi)蓄積，達(dá)到一定濃度時(shí)進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與T細(xì)胞因子 （TCF）結(jié)合，激活TCF轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而導(dǎo)致下游靶基因進(jìn)一步轉(zhuǎn)錄[2]。

2.非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路的作用

由Wnt5a型（Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a和Wnt11）發(fā)起。在PCP通路中，Wnt-FZD復(fù)合物與DVL蛋白相關(guān)的形態(tài)發(fā)生激活因子1（DAAM1）結(jié)合，導(dǎo)致調(diào)節(jié)細(xì)胞極性的Rac蛋白和RhoA GTP酶激活。在Wnt-Ca2+信號(hào)通路中，Wnt-FZD-DVL復(fù)合物與G蛋白結(jié)合，導(dǎo)致鈣調(diào)蛋白依賴性激酶Ⅱ（CaMKⅡ）、蛋白激酶C（PKC）和鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶（CaN）的激活，CaN進(jìn)一步激活活化的TCF（NFAT），后者移動(dòng)到細(xì)胞核內(nèi)并調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)[3]。

3. Wnt信號(hào)通路與免疫系統(tǒng)的關(guān)系

近年研究顯示，Wnt信號(hào)通路不僅維護(hù)免疫穩(wěn)態(tài)，也調(diào)節(jié)包括T淋巴細(xì)胞在內(nèi)的免疫細(xì)胞增殖、分化[4]。樹突狀細(xì)胞（DC）中的Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與產(chǎn)生免疫耐受性DC[5]。巨噬細(xì)胞中的Wnt配體可以在組織損傷中發(fā)揮修復(fù)作用。Wnt信號(hào)蛋白也可以調(diào)節(jié)不同環(huán)境下CD8+T淋巴細(xì)胞效應(yīng)功能和記憶性T淋巴細(xì)胞生成[6]。Wnt/β-catenin激活后，β-catenin表達(dá)可抑制T淋巴細(xì)胞的募集[7]。有學(xué)者通過敲除小鼠基因，證實(shí)Wnt信號(hào)通路依賴于淋巴細(xì)胞增強(qiáng)因子-1（LEF-1）促進(jìn)前體B淋巴細(xì)胞有絲分裂，在敲除LEF-1的小鼠中缺乏正常的Wnt信號(hào)，其前體B淋巴細(xì)胞生長和存活率降低[8]。敲除該通路的其他基因也會(huì)導(dǎo)致免疫細(xì)胞異常，如敲除Frizzled-9小鼠的B淋巴細(xì)胞發(fā)育異常[9]。

4. Wnt信號(hào)通路負(fù)調(diào)控因子與免疫系統(tǒng)的關(guān)系

分泌性Frizzled相關(guān)蛋白1 ～ 5（sFRP1 ～ 5）、Wnt抑制因子1（WIF1）、Cerberus、Wise/SOST、DKK家族蛋白是Wnt信號(hào)通路的抑制蛋白。其中，DKK家族蛋白不僅可以作為Wnt信號(hào)通路抑制劑，而且可以作為獨(dú)立于Wnt信號(hào)通路的免疫調(diào)節(jié)配體發(fā)揮作用。已知DKK家族蛋白DKK-1、2和4可抑制經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路，其中DKK-1可能介導(dǎo)免疫監(jiān)視的逃逸，并促進(jìn)髓系抑制性細(xì)胞聚集。DKK-2可導(dǎo)致抗腫瘤免疫失衡。DKK-3在CD8+T淋巴細(xì)胞中表達(dá)，參與CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫耐受[5]。

二、Wnt在信號(hào)通路卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用

蛋白水平上Wnt蛋白在EOC中高表達(dá)，如Wnt7a、Wnt2a、Wnt5a、 Wnt9a[8]。此外， RSPO糖蛋白1（R-spondin 1）是Wnt信號(hào)通路上游調(diào)控因子，與糖蛋白偶聯(lián)受體（LGR4、LGR5或LGR6）結(jié)合形成復(fù)合體，這種復(fù)合體抑制了2種跨膜E3連接酶Rnf43和Znrf對(duì)FZD的阻隔，從而增強(qiáng)Wnt信號(hào)通路作用[9]。Liu等[10]的研究表明R-spondin 1通過調(diào)控Wnt信號(hào)通路間接地參與卵巢癌細(xì)胞生長、存活和遷移，并幫助卵巢癌細(xì)胞抵抗化學(xué)治療。基因調(diào)控上16% ～ 54%的卵巢子宮內(nèi)膜樣癌發(fā)生β-catenin蛋白基因CTNNB1突變，該結(jié)構(gòu)域突變，會(huì)導(dǎo)致β-catenin抵制降解[8]。在其他類型的卵巢癌中，存在Wnt級(jí)聯(lián)蛋白的基因突變，如APC、AXIN2和AXIN3等，這些基因突變后的蛋白復(fù)合體低效或無功能，使β-catenin蛋白過度活躍[11-12]。還有一些非編碼RNA（ncRNA）、微RNA（miR）作為重要的翻譯后基因調(diào)控卵巢癌中Wnt信號(hào)通路基因[8]。miR中的一部分通過抑制Wnt信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移，如miR-15b、miR-16、miR-200c、miR-214、miR-219-5p、miR-654-5p、miR-939、miR-1180和miR-1207。另一部分激活Wnt信號(hào)通路，進(jìn)而激活致癌基因，如miR-21、miR-27a、miR-29和miR-92a-1。EOC中Wnt的負(fù)調(diào)控因子也發(fā)生異常調(diào)節(jié)，如DDK家族（DDK1、DDK2）、sFRP和抑癌基因SOX7在EOC中下調(diào)[13]。Duan等[14]進(jìn)行的研究證實(shí)甲基胞嘧啶雙加氧酶（TET1）過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了SKOV3細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，其機(jī)制為TET1通過去甲基化和上調(diào)該通路的2個(gè)上游拮抗劑SFRP2和DKK1從而抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路。

三、Wnt信號(hào)通路中潛在的卵巢癌治療新靶點(diǎn)

1. DKK1作為EOC的免疫治療靶點(diǎn)

DKK1是Wnt信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子，Betella等[15]體外觀察DKK1在EOC細(xì)胞中的作用，并利用卵巢癌細(xì)胞ID8小鼠模型研究體內(nèi)過表達(dá)抗DKK1的單克隆抗體（DKN-01）和DKK1對(duì)腫瘤負(fù)荷和抗腫瘤免疫細(xì)胞群的作用。研究結(jié)果顯示，體外抑制DKK1對(duì)EOC細(xì)胞的數(shù)量和生長無影響;體內(nèi)抑制DKK1則與腫瘤體積增大、免疫反應(yīng)減少相關(guān)，研究表明DKK1 的過表達(dá)可能減少CD45+白細(xì)胞浸潤到腹膜中，導(dǎo)致自然殺傷細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞從腫瘤微環(huán)境中清除和減少，DKK1通過抑制抗腫瘤免疫屏障進(jìn)而形成輔助腫瘤細(xì)胞生長的微環(huán)境，由此證實(shí)DKK1可以作為EOC治療的新靶點(diǎn)。目前正在進(jìn)行 DKN-01 單藥治療或與紫杉醇聯(lián)合治療晚期婦科惡性腫瘤[復(fù)發(fā)性或難治性上皮性子宮內(nèi)膜癌（EC）、EOC或癌肉瘤（OC）]的2期研究[16]。研究初步表明復(fù)發(fā)性EC和鉑類藥物耐藥或難治性 OC 患者可從中獲益。具有Wnt基因突變（如CTNNB1和APC突變）或 DKK1表達(dá)的婦科腫瘤患者，接受 DKN-01治療，其預(yù)后改善，顯示了DKN-01在Wnt激活突變或DKK1高腫瘤表達(dá)患者中的潛在療效[17]。但DKN-01治療卵巢癌也存在問題，DKN-01功能維持需要一個(gè)完整的免疫系統(tǒng)，尤其需要完整NK細(xì)胞功能。卵巢癌的傳統(tǒng)免疫治療也高度依賴于完整的T淋巴細(xì)胞功能，T淋巴細(xì)胞功能不足會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞抵抗傳統(tǒng)的免疫治療[16]。然而，DKK1高表達(dá)的腫瘤卻不具備完整的抗腫瘤免疫微環(huán)境。

2. Wnt配體/受體抑制劑在卵巢癌治療中的作用

Goldsberry等[18]對(duì)ID8卵巢癌小鼠予CGX1321治療后，小鼠T淋巴細(xì)胞功能、巨噬細(xì)胞功能、DC功能和抗原呈遞反應(yīng)相關(guān)的基因表達(dá)上調(diào)。CGX1321治療降低了ID8卵巢癌小鼠腫瘤負(fù)荷并提高了生存率。該研究同時(shí)在缺乏β-catenin表達(dá)的DC小鼠中發(fā)現(xiàn)腫瘤生長減慢，通過CGX1321治療后腫瘤生長進(jìn)一步減慢。研究提示CGX1321有潛在的卵巢癌治療價(jià)值。

Ipafricept（IPA）是一種重組融合蛋白，其將人FZD8受體胞外部分與可跟Wnt配體結(jié)合的IgG1 Fc片段融合而阻斷Wnt信號(hào)通路。一項(xiàng)研究使用IPA（OMP-54F28）聯(lián)合紫杉醇和卡鉑治療37例復(fù)發(fā)性鉑敏感卵巢癌1b期患者，35例有明顯療效，但是治療過程中觀察到脆性骨折，由于其對(duì)骨的毒性作用，限制其進(jìn)一步應(yīng)用[19]。

Wnt974是O-?；D(zhuǎn)移酶（PORCN）抑制劑，對(duì)Wnt配體運(yùn)輸、分泌、活性有重要作用。Doo等[20]報(bào)道，Wnt974在小鼠模型中抑制卵巢癌細(xì)胞生長，阻止腹水形成，延長生存期，其作用機(jī)制可能與增加腫瘤中CD8+T淋巴細(xì)胞與調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的比值，增強(qiáng)CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的效應(yīng)功能有關(guān)。Wnt974與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用可進(jìn)一步減慢腫瘤生長，延長生存期，并增加T淋巴細(xì)胞數(shù)量。Boone等[21]也通過研究證實(shí)Wnt974通過抑制Wnt/β-catenin通路，抑制原發(fā)性卵巢癌患者腹水細(xì)胞生長，卵巢癌腹水細(xì)胞中PORCN表達(dá)水平越高，其對(duì)Wnt974敏感性越強(qiáng)，因此認(rèn)為PORCN表達(dá)程度可以作為應(yīng)用Wnt974的指標(biāo)之一。

Pyrvinium為抗寄生蟲藥，也是Wnt蛋白的新型抑制劑，在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中均顯示出抑制卵巢癌細(xì)胞生長的作用[22]。這可能是Pyrvinium增加了卵巢癌細(xì)胞中Wnt負(fù)向調(diào)節(jié)蛋白AXIN含量，也降低了β-catenin蛋白含量，同時(shí)抑制Wnt/β-catenin信號(hào)調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄;反之，β-catenin的穩(wěn)定或過表達(dá)也會(huì)逆轉(zhuǎn)Pyrvinium的抑制作用。另一治療絳蟲感染的藥物氯硝柳胺也是一種有效的Wnt/β-catenin抑制劑，其可使卵巢癌細(xì)胞Wnt/β-catenin通路蛋白及靶基因表達(dá)水平下降[23]。

四、結(jié) 語

通過近年國內(nèi)外學(xué)者的研究，我們對(duì)Wnt信號(hào)通路調(diào)控作用的認(rèn)識(shí)有了很大的進(jìn)展，但是對(duì)于該通路機(jī)制的許多方面尚不清楚。雖然幾種Wnt信號(hào)通路抑制劑已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)，但至今仍無特定的Wnt信號(hào)通路藥物被批準(zhǔn)用于臨床，而卵巢癌對(duì)Wnt信號(hào)通路的依賴程度尚待進(jìn)一步研究闡明。

參 考 文 獻(xiàn)

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（收稿日期：2021-01-04）

（本文編輯：林燕薇）