牧場消毒后病原菌篩查及建議

楊文剛 周玉東 盛 濤 張九歌

(1.新疆兵團(tuán)第七師胡楊河市畜牧獸醫(yī)站，新疆 奎屯 833200；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830000)

面對當(dāng)前嚴(yán)峻的動物疫病防控形勢,消毒能有效殺滅病原體,切斷動物疫病傳播途徑。但在實(shí)際的養(yǎng)殖生產(chǎn)中,養(yǎng)殖場一味地開展消毒工作，往往忽略消毒后病原菌存在狀況，極易造成疫病的傳播。筆者選取新疆奎屯墾區(qū)2個規(guī)模奶牛養(yǎng)殖場，通過采集牧場消毒通道、犢牛舍、產(chǎn)房、擠奶廳、養(yǎng)殖圈舍等消毒后環(huán)境樣品，以實(shí)驗(yàn)室PCR檢測為手段，篩查消毒后牧場飼養(yǎng)環(huán)境中存在的感染病原菌，為牧場降低疫病傳播風(fēng)險，指導(dǎo)有效開展消毒工作提供參考。

1.檢測情況

1.1 檢測樣品：2020年12月17日到21日期間，按牧場消毒程序消毒后，采集檢測2個集約化牧場環(huán)境樣共41例樣品。

1.2 儀器、試劑：熒光定量PCR儀（Gentier 96E）、牛奶致病菌DNA提取試劑盒（深圳易瑞，批號：20090801，規(guī)格50T）、16聯(lián)牛乳腺炎病原菌核酸檢測試劑盒（深圳易瑞，批號：20072001，規(guī)格50份/盒）、1.5ml離心管。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣本DNA提取：采用牛奶致病菌提取試劑盒提取DNA，依照說明書操作進(jìn)行提取。

1.3.2 熒光PCR檢測：采用16聯(lián)牛乳腺炎病原菌核酸檢測試劑盒，依照說明書操作進(jìn)行檢測。

2.檢測結(jié)果

檢測結(jié)果：整體檢測過程陰/陽對照結(jié)果符合試劑盒要求，根據(jù)PCR實(shí)驗(yàn)文件Text結(jié)果文檔導(dǎo)出Excel格式結(jié)果，使用軟件分析數(shù)據(jù)后結(jié)果見表一、表二。

表1 集約化1牧場24例樣本統(tǒng)計

5 - - - - - - ±犢牛舍6-++-±--++7 - + - + - - ±8-++-± - -±9±++-- - -++10+±+----11+± ++ -±±12 + + - + - - ±13 + - + + - - ±14-± -- - -±產(chǎn)房15 - - - - - - -16 - - - - - - -17 - - - - - - -18---±---19 + - + + - - ±消毒間20 + + - + - + ±21 - + - + - + +22 - + - + - - +23---±--+24-+ -+ -±+陽性：++，弱陽性：+，疑似陽性：±，陰性：-（符號對應(yīng)的Ct值詳見說明書）奶牛舍

檢測結(jié)果表明，集約化1牧場24例樣本中共檢出酵母菌9例，大腸桿菌9例，葡萄球菌屬6例，腸球菌屬6例，β-內(nèi)酰胺酶抗性基因4例，化膿隱秘桿菌2例。

表2 集約化2牧場17例樣本結(jié)果統(tǒng)計

15 - - - - - - - - -16-± - +-±+--17+ + - + - +±--陽性：++，弱陽性：+，疑似陽性：±，陰性：-（符號對應(yīng)的Ct值詳見說明書）奶廳

檢測結(jié)果表明，集約化2牧場17例樣本中共檢出酵母菌12例，腸球菌屬10例，大腸桿菌9例，葡萄球菌屬8例，化膿隱秘桿菌6例，β-內(nèi)酰胺酶抗性基因4例，金黃色葡萄球菌1例，牛支原體1例。

3.結(jié)果分析

3.1 根據(jù)檢測結(jié)果可知，兩個牧場感染類環(huán)境型病原菌主要集中在犢牛舍、產(chǎn)房和奶牛舍，其中集約化1牧場犢牛舍和奶牛舍感染大腸桿菌、腸球菌屬較為嚴(yán)重，產(chǎn)房感染葡萄球菌屬較重。集約化2牧場犢牛舍和產(chǎn)房感染葡萄球菌、大腸桿菌、腸球菌屬、化膿隱秘桿菌較為嚴(yán)重，奶牛舍感染腸球菌屬、大腸桿菌屬、化膿隱秘桿菌較重，奶廳也有葡萄球菌、大腸桿菌屬、化膿隱秘桿菌污染。

3.2 葡萄球菌屬革蘭氏陽性球菌，可通過多種途徑侵入機(jī)體，引起化膿性感染。大腸桿菌是短桿菌，革蘭陰性，對幼畜（禽）常引起嚴(yán)重腹瀉和敗血癥。化膿隱秘桿菌是一種兼性厭氧菌，引起牛的流產(chǎn)和乳腺炎等疾病。腸球菌屬革蘭氏陽性，無鞭毛、無芽孢，兼性厭氧，家畜最常見是本屬菌所致的尿道感染。兩個牧場的多個飼養(yǎng)環(huán)境均有葡萄球菌、大腸桿菌屬、化膿隱秘桿菌、腸球菌屬感染，與前期對這兩個牧場抽檢奶牛乳房炎致病菌樣品檢測結(jié)果基本相符，與當(dāng)前兩個牧場高發(fā)犢牛腹瀉、奶牛乳房炎有直接關(guān)聯(lián)性。

4.結(jié)論

通過牧場各環(huán)境樣品檢測顯示，按牧場消毒程序消毒后的兩個牧場均存在多種病原菌，且以感染類環(huán)境型病原菌：葡萄球菌屬、大腸桿菌、化膿隱秘桿菌等為主，顯示牧場原消毒程序消毒效果不理想，這也是犢牛舍、產(chǎn)房、奶牛舍發(fā)生犢牛腹瀉、奶牛乳房炎的主要原因之一。

5.建議

5.1 加強(qiáng)牧場管理

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果可知目前牧場感染的主要菌群種類，針對以環(huán)境型病原菌為主的飼養(yǎng)環(huán)境，這兩個牧場同屬一個公司管理，在牧場關(guān)鍵消毒點(diǎn)的把控需要加強(qiáng)-，避免犢牛腹瀉、奶牛乳房炎持續(xù)發(fā)病的情況發(fā)生。建議牧場建立一套牧場消毒技術(shù)規(guī)范和效果評價體系，對消毒環(huán)境進(jìn)行科學(xué)的評價，指導(dǎo)牧場各飼養(yǎng)環(huán)境有效開展消毒工作，為牧場健康高效養(yǎng)殖發(fā)展提供保障。

5.2 加強(qiáng)牧場消毒工作，規(guī)范消毒程序。

針對牧場飼養(yǎng)環(huán)境存在的致病病原菌，牧場需通過消毒液藥敏實(shí)驗(yàn)，篩選對病原菌較為敏感的消毒劑，如選擇酚類、醛類、鹵素類等，尤其對新疆冬季天氣寒冷，液體類消毒液受氣溫影響較大，選用堿類、固體粉質(zhì)類兩種以上消毒藥品交替使用，可有效加強(qiáng)環(huán)境消毒，提高消毒效果，不僅可以防止消毒藥品濫用，降低病原體耐受性，而且可有效防控疫病傳播，降低獸藥的使用及因疫病死淘的經(jīng)濟(jì)損失。