防控煙草病毒病制劑的研發(fā)與應用

劉桔 陳澤鵬 林壁潤 楊明明 沈會芳

摘 要：采用浸泡消毒法、噴霧消毒法和熏蒸消毒法進行防控TMV、CMV的測試，采用抗原破壞性檢測法來評價8種制劑的防控效果;采用枯斑測定法，進一步開發(fā)出對TMV、CMV的防控效果好的制劑。結果發(fā)現(xiàn)消毒劑GDCLO2（500 mg/L）對TMV、CMV的抗原破壞效果均為100%;復合酚（消毒靈）（2%）消毒液對CMV的抗原破壞效果為100%，對TMV的抗原破壞也有較強的效果;永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、聚維酮碘溶液（400 mg/L）、2%戊二醛消毒液和三氯異氰尿酸鈉粉（800 mg/L）對CMV有良好的抗原破壞效果。消毒劑GDCLO2可以完全殺滅TMV、CMV，其防控效果優(yōu)于煙草苗棚常用的次氯酸鈉溶液、復合型過氧乙酸消毒液、高錳酸鉀和福爾馬林。在國內(nèi)外首次建立應用消毒劑GDCLO2培育無毒煙苗的操作規(guī)程，并在廣東省所有煙區(qū)推廣應用3年，累計推廣應用面積達到34400 hm2，應用效果明顯，全省煙區(qū)沒有病毒病發(fā)生流行。本項目研發(fā)出來的GDCLO2消毒制劑，能夠較好防控TMV、CMV。使用消毒劑GDCLO2培育無毒煙苗的操作規(guī)程已經(jīng)在廣東省所有煙區(qū)推廣應用。

關鍵詞：TMV CMV GDCLO2 防控制劑

中圖分類號：S491? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A

Development and Application of Preparation for Tobacco Virus Disease Control

LIU Ju1， CHEN Zepeng1， LIN Birun2， YANG Mingming3，

SHEN Huifang2，DENG Haibin1， YANG Qiyun2，

PU Xiaoming2， RUAN Xiaolei3*

（1Guangdong Tobacco Shaoguan Co.， Ltd.， Shaoguan，Guangdong 512000， China;

2 Plant Protection Research Institute ， Guangdong Academy of Agricultural Sciences /Guangdong Provincial Key Laboratory of New Technology for Plant Protection， Guangzhou，Guangdong 510640， China; 3 College of Plant Protection， South China Agricultural University / Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial Signals and Crop Disease Control， Guangzhou， Guangdong 510642， China.）

Abstract： Eight preparations were used to control TMV and CMV by soaking， spray and fumigation disinfection method，and the control effects were evaluated by antigen detection method. The lesion test was used to further develop more effective drugs to control TMV and CMV. Results showed that GDCLO2 （500 mg/ L） had 100% antigen destructive effect on TMV and CMV; 2% compound phenol had 100% antigen destructive effect on CMV， and also had stronger effect on TMV. Yongjiekang disinfectant II （100 mg/ L）， polyvidone iodine solution （400 mg/ L）， 2% glutaraldehyde disinfectant and trichloroisocyanurate powder （800 mg/ L） had good antigen destructive effect on CMV. GDCLO2 could completely kill TMV and CMV， and its control effect was better than that of sodium hypochlorite， composite peroxyacetic acid， potassium permanganate and formalin. The technical process of using GDCLO2 to cultivate non-toxic tobacco seedlings was first established in the world， and has been popularized and applied in all tobacco areas in Guangdong Province for three years， with a cumulative application area of 34400 hm2 and obvious application effect， and no viral disease occurred during the promotion period.

Key words： TMV; CMV; GDCLO2; control preparation

煙草病毒病是我國煙草生產(chǎn)上的重要病害，每年造成重大經(jīng)濟損失 [1]。侵染煙草的病毒主要有煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus， TMV）、黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）和馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）[2] 等，其中TMV和CMV是煙草苗期最常見病毒。煙草無毒苗生產(chǎn)過程中，煙苗病毒的主要來源是帶毒漂盤、剪葉工具及育苗人員的雙手等，病毒可通過修剪、間苗等操作進行傳播[3-6]。在苗期減少毒源、切斷病毒傳播途徑是煙草病毒病綜合防控措施中最重要的一環(huán)[5]。具體做法是：在育苗前期對育苗池和育苗盤，整個育苗過程中對剪葉機、操作人員自身乃至育苗棚內(nèi)、外空間進行高效消毒[4]。采用綠色高效的制劑在育苗過程中的各個相關環(huán)節(jié)進行有效消殺是減少苗期病毒感染的重要保障。

生產(chǎn)中煙草育苗棚常用0.1%高錳酸鉀、10%漂白粉或者2%福爾馬林等制劑殺滅TMV和CMV[2]。劉勇研究表明質(zhì)量分數(shù)30%有效氯漂白粉15～30 mg/L或高錳酸鉀20～30 mg/L進行消毒，對TMV的抑制率高于80%[7]，可見傳統(tǒng)制劑對病毒的殺滅活性不理想。劉勇等也評價了常用剪葉機制劑，表明30%有效氯漂白粉10倍液、98%磷酸三鈉·12H2O 的10倍液、7%有效氯次氯酸鈉150倍液、美國制劑125倍液和75%酒精，在3 min內(nèi)抑制率可達100%，但除0.6%菌毒凈較安全外，供試制劑在標簽（常用）濃度下接觸煙草葉片，產(chǎn)生較嚴重藥害，產(chǎn)生的癥狀主要有褪綠斑點、壞死斑點或畸形[8]，與制劑種類有關，可見傳統(tǒng)制劑在使用中存在一些問題，學者一直致力新型制劑的篩選和評價工作。尹利方等報道二氧化氯、育寶、毒消三種制劑消毒帶毒剪刀后，防效依次為93.87%、67.03%、27.32%，3種制劑存在顯著的防效差異，其中用16%二氧化氯200～600倍液浸泡污染了TMV的剪刀，均能有效控制TMV的傳播;其中16%綠先鋒牌二氧化氯800倍液浸泡消毒10 s即可有效防止TMV的傳播，相對防效可達98%以上[9]。曹毅等用兆冠50 倍處理20 min、錦鈺50 倍處理5 min和金百萬20 倍處理20 min 可完全鈍化病葉汁液中的病毒，常用濃度下金百萬基本不產(chǎn)生藥害;錦鈺和兆冠易產(chǎn)生藥害，癥狀主要表現(xiàn)為退綠斑點、壞死和葉片畸形[10]。吳德喜等用16%二氧化氯200～600倍液浸泡污染了TMV的剪刀，均能有效控制TMV的傳播;其中16%綠先鋒牌二氧化氯800倍液浸泡消毒10 s即可有效防止TMV的傳播，相對防效可達98%以上[11]。另外，烤煙育苗生產(chǎn)中實際情況復雜多變，操作過程中缺乏規(guī)范的應用技術，防控效果并不理想。目前檢測病毒是否被制劑滅活的主要方法有：細胞侵染活性檢測、抗原破壞性檢測 [7]等。本研究采用8種制劑進行測試和開發(fā)，并將之與煙草苗棚常用制劑的消殺效果進行了比較，研發(fā)出對TMV、CMV防控效果最好的制劑，更好地服務煙草產(chǎn)業(yè)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試制劑

八種供試制劑：永潔康牌消毒粉Ⅰ、永潔康牌消毒粉Ⅱ（購于連云港永榮生物科技有限公司）;聚維酮碘溶液（聚福安）、復合酚（消毒靈）（購于廣東省前沿動物保健有限公司）;戊二醛消毒液、鄰苯二甲醛消毒液（購于衡水康益醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司）;三氯異氰尿酸鈉粉（煙霧彈）（購于鳳舞集團奧福斯貿(mào)易有限公司）;消毒劑GDCLO2（廣東省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所研發(fā)）。

四種常用制劑：次氯酸鈉溶液（科密歐牌，有效氯含量大于等于6.5%）、復合型過氧乙酸消毒液（三橋牌，有效含量為150～180 g/L）、0.1%的高錳酸鉀、2%的福爾馬林均購自廣東省精科生物有限公司。所有中和劑均購自汕頭化學試劑廠。制劑相應的中和劑見表1。

1.1.2 供試毒源及抗血清

供試病毒：TMV（普通株系）、CMV（普通株系）分別保存在普通煙草（Nicotiana tabacum）上，由華南農(nóng)業(yè)大學植物病毒研究室提供。取1g 癥狀明顯的葉片，加去離子水和 600 目金剛砂充分研磨并稀釋，制成1g/50mL的病毒液。

TMV、CMV特異性抗血清和辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG由華南農(nóng)業(yè)大學植物病毒研究室提供。

1.1.3 枯斑寄主

心葉煙（Nicotiana glutinosa）、豇豆（Vigna sinensis）由華南農(nóng)業(yè)大學植物病毒研究室提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 八種制劑對TMV和CMV防控效果測定

采用抗原破壞性檢測來評價消毒效果。選取永潔康牌消毒粉Ⅰ（100 mg/L）、永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、聚維酮碘溶液（聚福安）（400 mg/L）、復合酚（消毒靈）（2%）、戊二醛消毒液（2%）、鄰苯二甲醛消毒液（直接使用）、三氯異氰尿酸鈉粉（強氯精）（800 mg/L）和消毒劑GDCLO2（500 mg/L）進行器具浸泡消毒實驗（所有使用濃度均為產(chǎn)品推薦使用濃度）。

選取永潔康牌消毒粉Ⅰ（100 mg/L）、永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、復合酚（消毒靈）（1%）、消毒劑GDCLO2（500 mg/L）做噴霧消毒實驗測試。

選取三氯異氰尿酸鈉粉（強氯精，100 mg/m3）做空間熏蒸消毒實驗測試。

1.2.1.1 器具浸泡消毒實驗

對供試的帶毒育苗盤、器具采用浸泡法消毒，檢測供試制劑對器具表面的消毒效果。漂浮育苗盤、器具的帶毒處理：分別取漂浮育苗盤、剪刀、鑷子浸沒于病毒液中30 min。取出放到溫箱烘干，得到帶毒育苗盤和器具。

參照趙祖國[12]和戴青等 [13]的操作方法進行。將帶毒育苗盤和器具分別放入不同消毒液里浸泡30 min，取出放入1 L 中和劑里中和10～20 min。取出器具，用滅菌水沖洗幾遍。用棉簽擦拭器具表面。然后，將之放入裝有1 mL 包被緩沖液的離心管里，蓋好蓋子。震蕩20 min。取200 μL震蕩液，做酶聯(lián)酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測。每種制劑測試6個樣品，每個樣品重復3次，取平均值。以制劑與中和劑反應的中和產(chǎn)物作為陰性對照;以中和產(chǎn)物加毒源作為陽性對照;清水作為空白對照。

1.2.1.2 室內(nèi)空間噴霧消毒實驗

對密閉空間采用噴霧法消毒，檢測供試制劑對帶毒空氣的消毒效果。參照孔利群等[14]的操作方法進行。在密閉空間里（房間面積：13 m2;體積：47 m3），用噴霧器噴灑毒液（噴液量：150～250 mL）?？臻g四個角放置打開蓋子的空培養(yǎng)皿。靜置30 min。用噴霧器噴灑相應濃度的消毒液。靜置30 min。用噴霧器噴灑相應濃度的中和劑，用量同上。中和10 min。取出培養(yǎng)皿，用滅菌雙蒸水沖洗幾遍。用棉簽擦拭器具表面。然后，將之放入裝有1mL 包被緩沖液的離心管里，蓋好蓋子。陰性對照、陽性對照、清水對照同1.2.1.1。

1.2.1.3 室內(nèi)熏蒸消毒實驗

對密閉空間采用熏蒸法消毒，檢測供試制劑對帶毒空氣的消毒效果。參照毛又玲等[15]的操作方法進行。在密閉空間里（房間面積：13 m2;體積：47 m3），用噴霧器噴灑毒液（噴液量：150～250 mL）?？臻g四個角放置打開蓋子的空培養(yǎng)皿。靜置30 min。按1 g/m3用量將熏蒸劑分放于3個小碗中，點火進行煙熏，完畢后密閉門窗10 h。噴灑中和劑作用10 min，終止反應。將培養(yǎng)皿用蘸有抗原包被液的棉簽充分擦拭，放入抗原包被液中震蕩15 min，用ELISA檢測TMV和CMV抗原破壞程度。陽性對照：不接觸熏蒸劑的帶毒培養(yǎng)皿。陰性對照：以PBS代替制劑進行試驗。陰性對照、陽性對照、清水對照同1.2.1.1。

1.2.1.4 間接ELISA檢測

ELISA結果判斷方法：用BIO-RAD酶標儀（美國）檢測在450 nm波長下各樣品的吸光度值（OD值）。以實驗組OD （S）值與陰性對照OD （N）值的比值判斷TMV和CMV抗原破壞性檢測結果。當S/N≥2.1時，結果判為陽性，小于2.1判為陰性。

1.2.2 GDCLO2與苗棚常用制劑防控效果對比

取煙草苗棚常用4種制劑：次氯酸鈉溶液（科密歐牌，有效氯含量大于等于6.5%）、復合型過氧乙酸消毒液（三橋牌，有效含量為150～180 g/L）、0.1%的高錳酸鉀、2%的福爾馬林和GDCLO2（500 mg/L），采用細胞侵染活性檢測（枯斑測定）評價其對TMV、CMV、PVY的防控效果。其中消毒劑GDCLO2設三個濃度梯度：400 mg/L、500 mg/L、600 mg/L。次氯酸鈉設三個濃度梯度：0.5%、1.0%、2%。過氧乙酸設三個濃度梯度：0.5%、1.0%、2%。

分別取TMV、CMV、PVY的病毒液，用滅菌紗布過濾后取上清做接種液。 將一定濃度的制劑稀釋液與 TMV/CMV/PVY病毒液等量混合，室溫分別處理 30 min 后分別摩擦接種枯斑寄主心葉煙、豇豆、莧色藜。接種前噴灑適量金剛砂于葉片表面。 接種葉左半葉接種去離子水處理的 TMV/CMV/PVY 病毒液（對照），接種葉右半葉接種經(jīng)制劑處理的 TMV/CMV/PVY 病毒液。 每半片葉接種 200 μL。接種后清水噴霧沖洗葉面，重復 3 次。接種 5～7 d 后統(tǒng)計枯斑數(shù)（取6 個半葉的平均值），計算抑制率。

抑制率（%）=[1-（處理平均枯斑數(shù)/對照平均枯斑數(shù)）]×100。

1.2.3 采用RT-PCR方法對處理后煙苗進行病毒檢測

2018年、2019年、2020年在韶關、梅州、清遠煙區(qū)使用消毒劑GDCLO2，用于無毒苗生產(chǎn)過程中苗棚、育苗盆、各種器具的消毒。要求各產(chǎn)區(qū)所有煙棚在煙苗移栽前10 d前，在苗棚內(nèi)隨機取樣10株，寄送項目組進行病毒檢測，病毒檢測采用RT-PCR方法進行。

感染病毒的煙草植物組織總RNA的抽提：根據(jù)Takara公司植物組織 RNA 抽提試劑盒提取。

引物的設計與合成 ：根據(jù)已報道的TMV Longlin-2（GENBANK：HE818434.1）、CMV strain CTL segment RNA1（GENBANK：EF213023.1）的基因序列，采用引物設計軟件Vector NT1 explorer設計普通RT-PCR擴增引物，具體序列如表2，由寶生物工程大連有限公司合成。

一步法RT-PCR反應：以抽提的待測植物組織樣品的總RNA為模板，采用上述設計引物進行一步法RT-PCR反應，反應體系如下：RNase free ddH2O 27.5 μL;2 × One Step Mix 25μL;One Step Enzyme Mix 2.5 μL;Forward Primer （10 μM） 2 μL;Reverse Primer （10 μM） 2 μL;模板RNA 1 μL;共50 μL。反應程序如下：逆轉(zhuǎn)錄50 ℃，30 min;預變性94 ℃，5 min;變性94 ℃，30 sec;延伸55 ℃，30 sec;退火72 ℃，30 sec;終止72 ℃，10 min;4 ℃。RT-PCR 反應結束后，每個樣品取 5 L 擴增產(chǎn)物進行 1 %瓊脂糖凝膠上電泳。在UVP 凝膠成像系統(tǒng)進行觀察記錄。

2 結果與分析

2.1 防控煙草病毒病高效制劑的研發(fā)

采用浸泡消毒法（8種制劑）、噴霧消毒法（4種制劑）和熏蒸消毒法（1種制劑）初步測試了供試8種制劑對TMV和CMV的殺滅效果。結果見表3。按照推薦濃度，8種制劑對實驗室污染剪刀上的TMV和CMV處理30 min均有消毒效果。其中消毒劑GDCLO2（500 mg/L）對TMV、CMV的防控效果最優(yōu)，兩種方法均為100%;復合酚（消毒靈）（2%）兩種方對CMV的抗原破壞率均為100%，噴霧法對TMV的抗原破壞率為80%;永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、聚維酮碘溶液（400 mg/L）、2%戊二醛消毒液和三氯異氰尿酸鈉粉（800 mg/L）對CMV的有較好的防控效果。永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、鄰苯二甲醛消毒液對TMV的防控效果較差。

2.2 GDCLO2與常用制劑防控效果對比

表4展示了4種煙草苗棚常用制劑和GDCLO2分別處理TMV、CMV，接種枯斑寄主7天后對葉片上的枯斑進行統(tǒng)計的結果。結果顯示400～600 mg/mL的消毒劑GDCLO2可完全滅活TMV、CMV病毒。其對TMV、CMV病毒病的防控效果要優(yōu)于供試的其他四種常用制劑。

試驗結果表明：消毒劑GDCLO2在濃度為400～600 mg/mL范圍內(nèi)，可將兩種病毒百分之百殺滅。而2%福爾馬林和1.5%過氧乙酸只能完全滅活TMV，對CMV不能完全殺滅。2%次氯酸鈉只能完全滅活CMV，對TMV不能完全殺滅。

2.3 消毒劑GDCLO2大面積推廣應用效果

2018年開始，全省100%的煙草種植區(qū)推廣應用消毒劑GDCLO2，累計推廣面積達到34400 hm2。技術操作規(guī)程是采用消毒劑GDCLO? 400～600 mg/mL濃度溶液，對煙苗培育大棚和周圍環(huán)境進行噴霧，對煙苗培育盆進行浸泡，在煙苗剪葉當天用藥液噴霧煙苗，完成整個流程后，在煙苗移栽前10 d，隨機抽樣采樣，送樣到實驗室，進行病毒檢測。

2018年、2019年和2020年所有育苗棚煙苗樣本病毒檢測結果見表5和圖1。結果表明，2018年首次將消毒劑GDCLO2在煙草育苗過程中進行推廣應用，在煙苗移栽前10 d，采樣進行病毒檢測，2018年梅州、韶關、清遠煙區(qū)TMV陽性檢出率分別為5.68%、1.15%和1.45%;梅州CMV陽性檢出率為2.84%，其它煙區(qū)的陽性檢出率為0。

2019年、2020年在三個煙區(qū)開展消毒劑GDCLO2使用技術培訓，要求育苗人員嚴格按技術規(guī)程進行消毒。2019年煙苗TMV與CMV的檢出率比2018年的檢出率大幅度降低，梅州煙區(qū)在送檢樣本數(shù)從2018年的176包至2019年的704包，大幅度增加的前提下，其病毒檢出率明顯降低，TMV陽性樣本率從2018年的5.68%，下降到2019年的0.99%;CMV從2018年的2.84%下降至2019年的0。到2020年，三個煙區(qū)所有育苗棚樣本均無病毒檢出，可見消毒劑GDCLO2對TMV、CMV病毒病的防控效果在生產(chǎn)上得到驗證。

3 討論

3.1 消毒劑GDCLO2是一種新型的防控煙草病毒病制劑

本研究首次將消毒劑GDCLO2應用于煙草病毒的防控工作，證明其有良好的TMV、CMV殺滅作用。GDCLO2制劑是本項目研發(fā)的制劑。其具有較強的穩(wěn)定性，污染小，使用方便;價格低廉。該制劑有效成分為二氧化氯，冷淑珍等[16-18]研究發(fā)現(xiàn)二氧化氯粉劑熏蒸劑（力保安）對雞沙門氏菌熏蒸處理有顯著的殺菌效果，殺菌率可達99.995%。無論應用于獸類病毒還是植物病毒方面，都展現(xiàn)了顯著的殺滅作用。因此，GDCLO2制劑是一種新型煙草病毒病防控制劑。

3.2 消毒劑GDCLO2是一種高效、廣譜的煙草病毒病防控制劑

煙草苗期病毒病是煙草生產(chǎn)上的一大難題。使用高效、環(huán)保的防控制劑是解決這個難題的主要方法。在防控過程中，制劑的防控效果受到制劑種類、使用濃度及劑量、環(huán)境條件、施用方式等因素的影響[19]。有研究認為不同種類的制劑對不同病毒的殺滅效果也各有差別，對部分病毒的差異十分顯著[20]。尤其是TMV在環(huán)境中穩(wěn)定性強，難以完全殺滅[2]。

選取適合的制劑，合理的施用方式，對殺滅煙草苗時期常見的TMV和CMV至關重要。本研究研發(fā)的消毒劑GDCLO2與其他植物病毒的常用制劑相比，防控效果顯著，殺毒范圍廣泛，一次使用，可以殺滅兩種病毒;使用方便，既可以浸泡，也可以噴霧。

3.3 建立培育無毒煙苗的操作規(guī)程，并大面積推廣應用

在國內(nèi)外首次建立應用消毒劑GDCLO2培育無毒煙苗的操作規(guī)程，并在廣東省所有煙區(qū)推廣應用3年，累計推廣應用面積達到34400 hm2，TMV陽性樣本率從2018年的5.68%，下降到2019年的0.99%;CMV從2018年的2.84%下降至2019年的0，到2020年，三個煙區(qū)所有育苗棚樣本均無病毒檢出。田間調(diào)查結果表明，2018-2020年全省煙區(qū)沒有病毒病發(fā)生流行。

4 結論

本文研發(fā)的消毒劑GDCLO2針對TMV、CMV是一種新型防控制劑。500 mg/L的消毒劑GDCLO2在30分鐘內(nèi)即可全部殺滅兩種病毒，這種制劑可以直接噴霧在煙苗葉子上有效地防控TMV、CMV病毒病，還可以廣泛推廣應用于煙草苗棚、苗池、苗盤、器具的消毒工作中。在國內(nèi)外首次建立應用消毒劑GDCLO2培育無毒煙苗的操作規(guī)程，并在廣東省所有煙區(qū)推廣應用3年，累計推廣應用面積達到34400 hm2，應用效果明顯，全省煙區(qū)沒有病毒病發(fā)生流行。

參考文獻

[1]? ? ? 王鳳龍.煙草病毒病綜合防治技術[J].煙草科技，2002（4）：43–45.

[2]? ? ?朱賢朝，王彥亭，王智發(fā). 中國煙草病害[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：193–203.

[3]? ? ? 李凡，王鈺麗，吳德喜，等.烤煙漂浮育苗中普通花葉病的主要傳播途徑[J]. 煙草科技，

2006（10）：53–55.

[4]? ? ?劉勇，陳學軍，李梅云，等.煙草漂浮育苗舊苗盤殘留物TMV帶毒檢測[J].湖南農(nóng)業(yè)大學學報：自然科學版，2006，32（5）：502–504.

[5]? ? ? 曾嶸，滕永忠，張慶剛，等.烤煙漂浮育苗中TMV的發(fā)生及預防研究[J].云南農(nóng)業(yè)大學學報，2005，20（1）：136-139.

[6]? ? ? 劉勇，段玉琪.煙草漂浮育苗剪葉傳播煙草花葉病毒的特點[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學學報，2007， 22（1）：45-60.

[7]? ? ? 劉勇. 漂浮育苗池水中煙草花葉病毒制劑的篩選[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學學報，2008，42（1）：40-

44.

[8]? ? ?劉勇，楊宇虹，陳學軍，等.煙草漂浮育苗中剪葉工具制劑評價[J]. 中國煙草學報，2007，13（1）：41-43.

[9]? ? ? 尹利方，胡昳，李志兵，等.三種制劑在煙草漂浮育苗中控制TMV傳播的藥效試驗[J]. 云

南農(nóng)業(yè)，2015（8）：42-44.

[10]? ?曹毅，郭玉雙，陸寧，等.3種制劑對煙草漂浮育苗中TMV鈍化效果[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2012，51（19）：4280-4283.

[11]? ?吳德喜，楊 程，李凡，等.二氧化氯對煙草漂浮育苗剪葉刀具的消毒作用研究[J].云南農(nóng)業(yè)大學學報，2006，21（2）：188-191.

[12]? ? 趙祖國. 污水中病毒濃集、消毒規(guī)律及滅活機理研究[D].北京：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院，2008.

[13]? ?戴青，孫正，鄧小虹，等.戊二醛對牙科手機滅菌效果的實驗室評價[J]. 北京口腔醫(yī)學，

2004，12（4）：188-190.

[14]? ?孔利群，秦曉婷，李燕婷.空氣制劑對流感病毒消毒效果檢測[J]. 上海預防醫(yī)學雜志，

2001，13（2）：67-68.

[15]? ?毛又玲，陳學芹.四種室內(nèi)空氣消毒方法的效果觀察[J].護士進修雜志，1997，12（6）：8.

[16]? ? 胡金華，孫清蓮，王成龍. 國家三類新獸藥-GDCLO2[J].新藥動態(tài)，2015，7：17-21.

[17]? ? 徐繼英，陳化琦，王瑜，等.新型制劑消特威對雞新城疫病毒殺滅效果研究[J].中國獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2016，3：61-63.

[18]? ?冷淑珍，許詳，黃元，等.GDCLO2熏蒸劑對雞傷寒沙門氏菌的殺菌效果試驗[J]. 廣東畜牧獸醫(yī)科技，2016， 41（4）：18-19.

[19]? ?崔錦鵬.? 兩種新型制劑豬場應用消毒效果研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學. 2006.

[20]? ?張文福，蔣莉，袁慶霞，等.常用制劑對流感病毒的殺滅效果研究[J]. 中國消毒學雜志，

2005，22（1）：1-4.