馬成艷,劉世增,姜成英,吳文俊,趙夢炯,陳煒青,金高明,戚建莉
(1.甘肅省林業(yè)科學(xué)研究院,甘肅 蘭州 730020;2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院,甘肅 蘭州 730070;3.國家林業(yè)局油橄欖工程技術(shù)研究中心,甘肅 蘭州 730020)
油橄欖(OleaeuropeaL.)為木犀科(Oleeacea)木犀欖屬(Olea)亞熱帶常綠小喬木,是地中海氣候的典型植物,也是世界著名的四大木本油料樹種之一。橄欖油具有較高的不飽和脂肪酸和多種維生素,長期食用可增強(qiáng)人體消化系統(tǒng)功能,減少心血管疾病,促進(jìn)骨骼發(fā)育。橄欖油還可用于開發(fā)醫(yī)藥、保健、化妝品等系列產(chǎn)品,具有重要的藥用和保健價值。油橄欖也具有速生、耐旱、耐高溫和根系發(fā)達(dá)等生物學(xué)特性,具有保持水土、涵養(yǎng)水源的生態(tài)功能,是荒山綠化、生態(tài)恢復(fù)的可選樹種[1-2]。
葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)可以從內(nèi)在揭示植物光合生理的表現(xiàn),在一定程度上能夠反映植物對環(huán)境的適應(yīng)情況,被稱為是研究植物光合作用的有效探針[3-4]。有關(guān)植物葉綠素?zé)晒馓匦缘难芯繄蟮垒^多,但研究各植物種的葉綠素?zé)晒鈪?shù)所用光合模型也各有不同,主要有直角雙曲線模型(RH)、非直角雙曲線模型(NRH)、單指數(shù)模型(SEM)、雙指數(shù)模型(DEM)和直角雙曲線修正模型(MRH)等,這些模型都存在一些缺點(diǎn),且不同模型擬合的結(jié)果偏差較大[5-8]。因此,應(yīng)用多種模型對同一研究對象的光響應(yīng)曲線進(jìn)行擬合,對擬合優(yōu)度進(jìn)行比較,采用最佳擬合模型對相關(guān)光合參數(shù)進(jìn)行估算,可提高對這些參數(shù)估計的準(zhǔn)確性,從而更好地認(rèn)識供試植物的光合特性。
甘肅隴南白龍江干熱河谷區(qū),油橄欖種植面積占全國總面積的80%,建有國家級油橄欖種質(zhì)資源圃,引進(jìn)品種130余個。有關(guān)油橄欖生理生態(tài)特性,已有大量研究報道[9-13]。但對從土耳其引進(jìn)的在隴南地區(qū)表現(xiàn)優(yōu)良的Domat等油橄欖在生理生態(tài)特性方面的研究鮮有報道。本研究采用葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)測定7個油橄欖品種的葉綠素?zé)晒鈪?shù),通過RH、NRH、SEM、DEM和MRH擬合分析各油橄欖品種的葉綠素?zé)晒夤忭憫?yīng)曲線(RLCs),以期選擇最適合的葉綠素?zé)晒夤忭憫?yīng)模型,根據(jù)葉綠素?zé)晒庾罴压忭憫?yīng)模型,評價各品種的苗期光合特性,為隴南地區(qū)引進(jìn)種植油橄欖的種質(zhì)高效優(yōu)質(zhì)栽培和良種選擇提供參考依據(jù)。
試驗(yàn)地位于甘肅省隴南市武都區(qū)兩水林場(104°75′E, 33°37′N),屬于北亞熱帶半濕潤氣候,年均氣溫 14.9 ℃,年日照時數(shù)1 911.7 h,年無霜期210~240 d,年降水量474~900 mm,年平均濕度61%~71%,是油橄欖的最佳適生區(qū)。
采用從土耳其引進(jìn)的Domat、Odemis、Yamalak sarisi、Memecik、Ayvalik、Cekiste、Gemlik共7個油橄欖品種的嫁接苗,見表1。
表1 7個土耳其引進(jìn)油橄欖品種的基本情況
引進(jìn)自砧嫁接苗定植,砧木為原品種半同胞種子實(shí)生苗,3 a生;接穗為同一品種優(yōu)樹1 a生枝條,插皮芽接,每砧嫁接4~5芽。2018年春季嫁接,2019年秋季引進(jìn),定植到高60 cm,直徑80 cm的無紡布營養(yǎng)缽,基質(zhì)為泥炭土、椰糠和熟土以1︰1︰1的比例混合,每營養(yǎng)缽1株,苗木的接穗生長1 a后作為試驗(yàn)材料。
于2020年8月上旬,選擇連續(xù)晴朗的3天,每天8:00—11:00進(jìn)行。每個品種選取3株長勢健壯、光照一致的植株。測定前,將油橄欖幼苗葉片先經(jīng)過 20 min 的充分暗適應(yīng),用Li-6400-40便攜式熒光葉室測定系統(tǒng),每株選取3片葉子,每片葉子3個重復(fù),測得初始熒光(Fo),隨后施加飽和脈沖光,測得最大熒光(Fm)。并由Fo,F(xiàn)m計算,暗適應(yīng)葉片 PSII 最大光化學(xué)效率(Fv/Fm),PSII 潛在光化學(xué)效率(Fv/Fo)。之后經(jīng)0.5 h自然光適應(yīng),測定在光合有效輻射強(qiáng)度(PAR)分別為2 000、1 500、1 000、500、200、100、50、20、10和0 μmol/(m2·s)時的葉綠素?zé)晒庀嚓P(guān)參數(shù)。使用開放氣路,流速為300 μmol/s,外接CO2鋼瓶,濃度控制為 400 μmol/mol,最小等待時間設(shè)定為120 s,最大等待時間設(shè)定為200 s,通過外接緩沖瓶穩(wěn)定大氣中 CO2濃度。測定過程中,每個梯度光照持續(xù)時間為 10 s,依次測定。
利用 Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和作圖。用葉子飄光合計算軟件4.1.1中5 種光合模型對RLCS及其參數(shù)進(jìn)行擬合,各模型的數(shù)學(xué)表達(dá)式[14-16]見表2。利用origin 8.0得出信息量準(zhǔn)則(AIC)、均方根誤差(RMSE)。圖中的部分?jǐn)?shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示,顯著性水平設(shè)定為α=0.05。
表2 5種光響應(yīng)曲線(RLCS)模型的數(shù)學(xué)表達(dá)式
R2是衡量所建立模型效果好壞的指標(biāo)之一,其值越大表明模型擬合得越好,卻不能說明所得到的光合參數(shù)是否與實(shí)測值相符[15]。為了更好地對模型擬合效果進(jìn)行比較,本研究同時引入了RMSE和AIC評價指標(biāo)。RMSE表示相對于真實(shí)值的離散程度,用來描述誤差大小;AIC值越小,說明擬合的模型精度高且簡潔[14-16]。因此,葉綠素?zé)晒狻忭憫?yīng)曲線模型擬合中,R2值越接近1,RMSE值越小,AIC值越小,則說明模型的擬合效果越好。結(jié)果表明,5個模型對7個油橄欖品種的RLCs擬合效果優(yōu)劣順序?yàn)椋篗RH>SEM>RH>NRH>DEM。MRH中R2、RMSE和AIC的平均值分別為0.999 4(最大)、10.591 5(最小)和1.419 3(最小),擬合優(yōu)度最好,是7個油橄欖品種的最佳擬合模型(表3)。
表3 5個模型擬合7個油橄欖品種的RLCs回歸參數(shù)
通過比較單個油橄欖品種RLCs擬合優(yōu)度,擬合效果的優(yōu)劣順序如下:Domat為MRH>SEM> RH >DEM>NRH,Odemis為RH>DEM>MRH>SEM>NRH,Yamalak sarisi為RH>SEM>DEM>MRH>NRH,Memecik為MRH>RH>SEM>NRH>DEM,Ayvalik為MRH>DEM>RH>SEM>NRH,Cekiste為MRH>SEM>RH>NRH>DEM,Gemlik為MRH>SEM>RH>NRH>DEM。這與整體擬合效果和擬合精度稍有不同。
結(jié)果表明,7個油橄欖品種MRH模型擬合RLCs總體趨勢:隨PAR在0~2 000 μmol/(m2·s)內(nèi)遞增,各油橄欖品種葉片的ETR逐漸增大,且在低光強(qiáng)部分,ETR隨PAR的增強(qiáng)上升迅速,達(dá)到相對較高光強(qiáng)部分則上升緩慢(圖1)。Domat、Odemis、Yamalak sarisi、Memecik、Ayvalik和Gemlik葉片的ETR隨PAR的增強(qiáng)而增加。Cekiste葉片的ETR隨PAR的增強(qiáng)逐漸增加,達(dá)到飽和光強(qiáng)后,隨PAR的增強(qiáng)趨于穩(wěn)定。
7個油橄欖品種葉片的ETR隨PAR變化的實(shí)測值與MRH模型所得擬合值非常接近。Domat葉片的最大電子傳遞速率實(shí)測值為217.562 7 μmol/(m2·s),MRH模型擬合值為215.737 2 μmol/(m2·s),占實(shí)測值99.12%,且R2=0.999 9(圖1A)。Odemis、Yamalak sarisi、Memecik、Ayvalik、Cekiste、Gemlik葉片ETR擬合值占實(shí)測值的百分比分別為96.49%、99.97%、99.76%、99.98%、99.73%、99.46%。且最大電子傳遞速率(Rmax)大小順序?yàn)椋篗emecik>Odemis>Yamalak sarisi>Gemlik>Domat>Ayvalik>Cekiste。
RLCs的初始斜率(α),稱為初始量子效率,又稱低光強(qiáng)下的光合量子效率,表示植物將光能轉(zhuǎn)化為電子流的能力,是植物在光合作用中光能轉(zhuǎn)化效率的一種度量。其值越大,表明植物葉片在低光強(qiáng)階段對光能的利用效率越高[17]。MRH擬合各油橄欖的RLCs中,初始斜率(α)大小順序?yàn)椋篛demis> Ayvalik> Memecik>Domat>Gemlik>Cekiste>Yamalak sarisi(圖1),則說明Odemis對弱光的利用能力最強(qiáng),對光能的轉(zhuǎn)化效率最高,Ayvalik、Memecik、Domat和Gemlik次之,Yamalak sarisi和Cekiste最弱。
圖1 7個油橄欖品種的快速光響應(yīng)MRH曲線
PARsat表示一定條件下植物的潛在光合作用能力。其值越大,表明植物在強(qiáng)光下的生長發(fā)育不易受到抑制[18]。MRH擬合各油橄欖的RLCs中,飽和光合有效輻射(PARsat)大小順序?yàn)椋篗emecik>Ayvalik>Odemis>Yamalak sarisi>Cekiste>Gemlik>Domat。表明Memecik潛在光合能力最強(qiáng),對光強(qiáng)的適應(yīng)范圍更廣;Ayvalik、Odemis、Yamalak sarisi和Cekiste次之,Gemlik和Domat最弱。
初始熒光Fo是植物PSII所有反應(yīng)中心均處于開放狀態(tài)時的最小熒光產(chǎn)量。最大熒光Fm是PSII反應(yīng)中心完全關(guān)閉時的熒光產(chǎn)量,反映了PSII的電子傳遞情況。Fv/Fm是PSII最大光化學(xué)效率,為反應(yīng)PSII反應(yīng)中心原初光能轉(zhuǎn)化效率[19-20]。結(jié)果表明,Odemis、Memecik和Ayvalik的Fo、Fm、Fv/Fm和Fv/Fo值均高于其它品種,Yamalak sarisi、Cekiste均低于其它品種(表4)。Odemis和Memecik與Yamalak sarisi的Fo值之間存在顯著差異。Odemis、Memecik和Ayvalik的Fm值之間差異顯著;Yamalak sarisi、Ayvalik的Fv/Fm的值與其他品種間都存在顯著差異,Cekiste與Yamalak sarisi、Memecik和Ayvalik的Fv/Fm的值之間存在顯著差異;Ayvalik的Fv/Fo的值與其他品種間都存在顯著差異,Yamalak sarisi與Memecik、Ayvalik和Gemlik的Fv/Fo的值存在顯著差異。
表4 7個油橄欖品種葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)的比較
PhiPS2 為PSII反應(yīng)中心的實(shí)際光化學(xué)效率,表示植物在光合作用過程中PSII系統(tǒng)反應(yīng)中心部分關(guān)閉時的原初光能捕獲效率,表征植物在光照條件下PSII吸收光能用于原初反應(yīng)階段的實(shí)際運(yùn)行效率,可快速地確定光強(qiáng)變化時或其他環(huán)境條件下PSII反應(yīng)中心的作用效率[21-25]。隨著光強(qiáng)在0~2 000 μmol/(m2·s)內(nèi)遞增,7個油橄欖品種葉片PhiPS2的總體趨勢都逐漸減小,范圍在0.18~0.78,各品種間PhiPS2無顯著性差異(P<0.01)(圖2)。且在低光強(qiáng)部分〔0~200 μmol/(m2·s)〕,PhiPS2隨光強(qiáng)的增加而緩慢減小,到達(dá)相對較高光強(qiáng)部分迅速減小。在光強(qiáng)為1 500~2 000 μmol/(m2·s)內(nèi),Memecik葉片PhiPS2整體水平高于其它品種,Cekiste葉片PhiPS2低于其它品種;Ayvalik、Domat、Gemlik、Yamalak sarisi、Odemis間PhiPS2無明顯差異。
圖2 7個油橄欖品種的PSII實(shí)際光化學(xué)效率 (PhiPS2)的光響應(yīng)曲線Fig.2 Response of actual photochemical efficiency of PSII(PhiPS2)to light intensity in seven olive cultivars
植物RLCs中ETR隨光強(qiáng)的變化規(guī)律,可以反映植物葉片對光強(qiáng)變化的適應(yīng)機(jī)理。在光強(qiáng)相同的情況下,植物葉片的ETR越高,碳同化過程中形成的電子傳遞載體(ATP 和 NADPH)就越高[10,14]。隨著光強(qiáng)在0~2 000 μmol/(m2·s)內(nèi)遞增,各油橄欖品種的ETR逐漸增大,各品種間ETR無顯著性差異(P<0.01)(圖3)。在低光強(qiáng)部分[0~200 μmol/(m2·s)],ETR隨光強(qiáng)的增加而緩慢上升,到達(dá)相對較高光強(qiáng)部分則上升迅速。在光強(qiáng)低于1 000 μmol/(m2·s)時,各品種間ETR整體水平無明顯差異。在光強(qiáng)1 500~2 000 μmol/(m2·s)內(nèi),Odemis和Memecik葉片的ETR隨光強(qiáng)增加而增大的速度最快,且高于其它5個品種(α=0.05);Domat、Yamalak sarisi、Ayvalik、Gemlik上升速度較慢,但高于Cekiste;Cekiste在光強(qiáng)1 500~2 000 μmol/(m2·s)范圍內(nèi)ETR無明顯差異,但低于其它6個品種(圖3)。
圖3 7個油橄欖品種的電子傳遞速率光響應(yīng)曲線Fig.3 Response of electron transfer rate to light intensityin seven olive cultivars
光響應(yīng)曲線是植物光合作用隨著光照強(qiáng)度改變的系列反應(yīng)曲線,測定該曲線可獲得植物光合特性的相關(guān)生理參數(shù),有助于判定植物的光合效率,且不同植物有其最佳的光響應(yīng)曲線模型[7]。因?yàn)?,RH、NRH和SEM的擬合方程是無極值的漸近線,不能直接得出植物的光飽和點(diǎn),不能合理地擬合植物在光抑制條件下的光響應(yīng)曲線。SEM和DEM通常只用于藻類、浮游植物和少數(shù)陸生植物,且DEM擬合值遠(yuǎn)高出實(shí)際值的結(jié)果[8,26-27]。在模型擬合的研究中,MRH擬合方程存在極值,能較好地擬合植物存在PSII動力學(xué)下調(diào)或光抑制時的光響應(yīng)曲線,且擬合曲線與實(shí)測值高度符合[28-31]。本研究通過分析各模型的擬合優(yōu)度,得出MRH是7個油橄欖品種的最佳擬合模型(表3)。同時,各油橄欖品種MRH模型擬合曲線與實(shí)測值的符合程度高達(dá)95%以上(圖1)。因此,上述理論在本研究中也得到了驗(yàn)證。
光合電子流對光的響應(yīng)曲線一般包括以下3個階段:①ETR隨PAR的增加而幾乎線性增加;②ETR隨PAR的增加緩慢增加到一個平臺;③ETR隨PAR的增加而下降,出現(xiàn)光PSII的動力學(xué)下調(diào)或光抑制現(xiàn)象階段[16]。本研究中,在PAR為0~2 000 μmol/(m2·s)條件下,Domat、Odemis、Yamalak sarisi、Memecik、Ayvalik和Gemlik葉片的ETR隨PAR的增強(qiáng)而快速增加。在設(shè)定最大光照條件2 000 μmol/(m2·s)下,各品種葉片的ETR均未出現(xiàn)下降趨勢,即均無PSII的動力學(xué)下調(diào)現(xiàn)象。Cekiste葉片ETR隨PAR增強(qiáng)緩慢增強(qiáng)并趨于飽和,這表明除Cekiste,其它6個油橄欖品種都可以承受較高的光輻射。
已有研究表明,植物Fv/Fm在正常情況下為0.80~0.85[19]。本研究中,7個油橄欖品種的Fv/Fm值接近于0.80或大于0.80,而小于0.83,說明7個油橄欖品種苗木生長狀況良好,也側(cè)面說明了其他熒光指標(biāo)的可靠性。在7個油橄欖品種中,Odemis、Memecik和Ayvalik的PSII反應(yīng)中心處于完全開放和完全關(guān)閉時的熒光產(chǎn)量較高,具有較高的PSII活性,但Yamalak sarisi和Cekiste與之相反。
本研究中,隨著光強(qiáng)增強(qiáng)各油橄欖品種的PhiPS2呈下降趨勢,最低達(dá)到了0.18,推測高光強(qiáng)迫使各油橄欖品種葉片PSII反應(yīng)中心受到了光抑制,降低了各油橄欖品種的實(shí)際光能轉(zhuǎn)化效率,使PSII潛在活性受損,光合作用原初反應(yīng)過程受到了抑制。Memecik的PhiPS2整體水平高于各品種,Cekiste低于其它6個品種(圖2)。隨著光強(qiáng)增強(qiáng)各油橄欖葉片的ETR都明顯增大,一定程度的高光強(qiáng)有利于提高各油橄欖品種的PSII反應(yīng)中心開放程度,將更多的光能用于推動各油橄欖葉片的光合電子傳遞,提高了各油橄欖品種的光合效率。Memecik的ETR值明顯高于各品種,Cekiste低于其它6個品種(圖3),說明在相同光照條件下,Memecik對光照的響應(yīng)能力最強(qiáng),具有較大的潛在光合能力,Cekiste則相反。
脅迫導(dǎo)致植物 PSII 開放反應(yīng)中心開放程度減少,引起 PSII 有效光量子產(chǎn)量的下降,從而導(dǎo)致光合電子傳遞效率的明顯降低,電子傳遞過程明顯受到抑制。本研究中,Memecik葉片PhiPS2值整體水平明顯高于其它品種,且隨光強(qiáng)的變化幅度最小,其ETR值明顯也高于其它品種。因此,可說明Memecik具有較好的光合能力;Cekiste葉片PhiPS2值低于其它品種,隨光強(qiáng)的變化幅度最大,且其ETR值顯著低于其它品種,則說明Cekiste光合效率較差。
MRH是7個油橄欖品種RLCs的最佳擬合模型,R2值最接近1,RMSE和AIC值最小,擬合曲線與實(shí)測值高度符合。Memecik具有較好的光合特性,將光能轉(zhuǎn)化為電子流的能力和潛在光合能力較強(qiáng),且具有較廣的光輻射范圍。Cekiste的光合特性較差,將光能轉(zhuǎn)化為電子流的能力和潛在光合能力最弱,對高光強(qiáng)的適應(yīng)能力較差。