多發(fā)性骨髓瘤患者EB病毒檢測及其臨床意義

晏建國，羅 萍，胡 飛，歐陽賢鳳，李金鳳，朱文鳳，郭 瑛

（九江市第一人民醫(yī)院血液內(nèi)科，江西 九江 332000）

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一種以漿細胞克隆性增殖為特征的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，占血液系統(tǒng)惡性腫瘤第2 位，其病因及機制尚不清楚[1]。EB 病毒（Epstein-Barr Virus，EBV）屬于人皰疹病毒γ 亞科，是一種嗜人類淋巴細胞的雙鏈線性DNA 病毒，也是第一個被證實與人類腫瘤相關(guān)的病毒，全世界約有90%以上的成年人曾感染過EBV，但絕大多數(shù)僅表現(xiàn)為自限性潛伏性感染[2，3]。我國感染EBV 的患者年齡比西方國家年輕[4]。因此，在我國研究EBV 感染與腫瘤的關(guān)系顯得尤為重要。研究表明EBV 和其他皰疹病毒一樣，Burkitt 淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤和彌漫性大B 細胞淋巴瘤等不同類型的B細胞源性淋巴惡性腫瘤密切相關(guān)[5]。B 淋巴細胞惡性腫瘤可由EBV 感染的B 細胞克隆引起，有證據(jù)表明持續(xù)的EBV 感染可導(dǎo)致疾病進展[6]。但EBV 感染與MM 之間的關(guān)系仍有爭議[7]，需要進一步的研究。本研究通過檢測MM 患者外周血中EBV-DNA 拷貝數(shù)，探討EBV 感染與MM 的潛在關(guān)系及其對MM 患者臨床特征、分期、預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012 年5 月～2020 年2 月在九江市第一人民醫(yī)院初診的MM 患者110 例被納入MM 組，其中男性患者53 例，女性患者57 例，年齡38～85 歲，所有患者診斷均符合《血液病診斷及療效標準》多發(fā)性骨髓瘤診斷標準[8]。依照異常增殖的免疫球蛋白類型分為IgG 型45 例（40.04%），IgA 型42 例（37.50%），IgD 型6 例（5.77%），κ 輕鏈型7 例（6.73%），入輕鏈型7 例（6.73%），不分泌型3 例（2.88%）。按照國際分期體系（ISS）臨床分期，I 期18例（16.36%），Ⅱ期22 例（20.00%），Ⅲ期70 例（63.64%）。按照梅奧骨髓瘤分層（mSMART）為基礎(chǔ)國際危險度分層，低危32 例（29.09%），中危43 例（39.09%），高危35 例（31.82%）。另選取同一時間段在九江市第一人民醫(yī)院就診的110 例沒有任何類型的血液系統(tǒng)疾病和其他癌癥且骨髓象大致正?；颊咦鳛檎φ战M，其中男性患者55 例，女性患者55 例。

1.2 方法 通過實時熒光定量PCR 檢測所有受試者外周血EBV-DNA 拷貝數(shù)。按EBV-DNA 拷貝數(shù)分為EBV-DNA 陽性（≥500 IU/ml）和EBV-DNA 陰性（＜500 IU/ml）。取2～4 mlEDTA 抗凝外周血進行檢驗，加入淋巴細胞分離液進行分離，將白細胞層吸出，使用0.9%的氯化鈉溶液洗滌白細胞層，再加入50 μl DNA 提取液，充分混勻后在100 ℃的恒溫環(huán)境內(nèi)反應(yīng)10 min，再經(jīng)過5 min 離心處理后，取上清液用于PCR 檢測。通過實時熒光定量PCR 試劑盒（中山大學(xué)達安基因股份有限公司生產(chǎn)）檢測，基因拷使用IU/ml 表示，按EBV-DNA 拷貝數(shù)分為EBV-DNA 陽性（≥500 IU/ml）和EBV-DNA 陰性（＜500 IU/ml）。

1.3 觀察指標 觀察所有受試者EBV-DNA 表達情況，分析外周血EBV-DNA 在不同分型、不同分期、不同危險度分層MM 患者中的表達情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 19.0 進行統(tǒng)計學(xué)分析，正態(tài)分布計量資料以（）表示，兩組之間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析。計數(shù)資料以（%）表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MM 組與對照組EBV-DNA 陽性表達率比較MM 組的EBV 感染率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=83.887，P＜0.05），見表1。

表1 MM 患者與對照組外周血EBV-DNA 的陽性表達率[n（%）]

2.2 患者外周血EBV-DNA 的陽性表達比較 不分泌型多發(fā)性骨髓瘤EBV-DNA 陽性表達率高于其他類型多發(fā)性骨髓瘤，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；ISS 分期Ⅰ期EBV-DNA 陽性表達率高于正常對照組（χ2=6.098，P＜0.05），低于Ⅱ期（χ2=3.922，P＜0.05）和Ⅲ期（χ2=19.799，P＜0.00），Ⅱ期EBV-DNA 陽性表達率低于Ⅲ期（χ2=4.591，P＜0.05）；mSMART 危險度分層低位組EBV-DNA 陽性表達率高于正常對照組（χ2=23.104，P＜0.00），但低于中危組（χ2=5.121，P＜0.05）和高危組（χ2=15.228，P＜0.00），中危組EBVDNA 陽性表達率低于高危組（χ2=4.003，P＜0.05），見表2。

表2 MM 患者外周血EBV-DNA 的陽性表達比較（n，%）

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤是一種病因不明的血液系統(tǒng)腫瘤，常有低水平的多克隆免疫球蛋白，并表現(xiàn)出中至重度的體液免疫缺陷[9]。此外，治療期間使用免疫抑制藥物是導(dǎo)致免疫低下和誘發(fā)感染的另一個重要因素[10]。因此，確定與MM 進展相關(guān)的各種感染因素，對于確定疾病預(yù)后和選擇個體化治療方案至關(guān)重要。

研究表明[11]，多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生與EBV 感染存在一定關(guān)系，且EBV-DNA 的陽性率在50.0%～83.3%[12]，本研究檢測的MM 患者EBV 的感染率為59.09%。其可能機制為：①EBV 誘導(dǎo)免疫功能低下者發(fā)生MM[13]；②EBV 感染B 淋巴細胞引起永生化，促進其分泌IL-6，并可能在癌基因的參與下引起細胞惡性變[14]；③EBV 可能通過上調(diào)Bel-2 及其他抑制凋亡的蛋白，激活NF-KB 信號傳導(dǎo)通路導(dǎo)致IL-10 表達增多，使細胞間的增殖與凋亡失衡，引起腫瘤的發(fā)生[3，15]；④EBV 干擾細胞DNA 修復(fù)機制，并可能導(dǎo)致感染細胞的遺傳變化[16，17]。

本研究結(jié)果顯示，EBV-DNA 陽性表達率在不同分型多發(fā)性骨髓瘤患者中存在差異，尤其是不分泌型多發(fā)性骨髓瘤EBV-DNA 陽性表達率明顯高于其他類型多發(fā)性骨髓瘤，可能是因為不分泌型多發(fā)性骨髓瘤惡性程度較高，其發(fā)生可能與EBV 感染更加密切相關(guān)，但由于樣本量少，缺乏統(tǒng)計價值。在不同分期比較中，Ⅰ期EBV-DNA 陽性表達率低于Ⅱ期和Ⅲ期（P＜0.05），Ⅱ期EBV-DNA 陽性表達率低于Ⅲ期（P＜0.05），提示臨床分期越晚的患者EBV 陽性表達率越高，提示病情較嚴重。在不同危險度分層比較中，低位組EBV-DNA 陽性表達率低于中位組和高位組（P＜0.05），中位組EBV-DNA 陽性表達率低于高位組（P＜0.05），提示危險程度越高的患者EBV 陽性表達率越高，提示預(yù)后較差。因此表明，EBV 在不同分型、不同分期、不同危險度分層多發(fā)性骨髓瘤患者中存在一定差異，這與Xia B 等[18]研究結(jié)果相似。

綜上所述，EBV 感染與多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生密切相關(guān)，EBV 感染與多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生密切相關(guān)，外周血EBV-DNA 表達在多發(fā)性骨髓瘤患者臨床分型、分期、危險度分層的存在差異，通過檢測外周血EBV-DNA 對多發(fā)性骨髓瘤診斷、預(yù)后判斷具有一定應(yīng)用價值，且檢測手段方便、快捷。