血站核酸檢測實驗室質(zhì)量監(jiān)測指標(biāo)分析*

劉春蘭，姜敏娜，宋 雷

江西省九江市中心血站檢驗科，江西九江 332000

核酸檢測(NAT)是指對病原體核酸進行提取、擴增和檢測的一系列技術(shù)的總稱，其基本步驟包括核酸純化、擴增和產(chǎn)物檢測[1]。NAT已成為血液篩查的常規(guī)檢測方法之一[2-4]，與血清學(xué)檢測相比，具有靈敏度高，對標(biāo)本質(zhì)量、人員操作和設(shè)備狀態(tài)要求高，容易產(chǎn)生污染等特點[5-9]?！堆炯夹g(shù)操作規(guī)程(2019版)》中4.11條款要求，實驗室要選擇能夠?qū)崟r反映試驗性能變化或系統(tǒng)變化的參數(shù)進行試驗監(jiān)控[10]。因此，為了更好地監(jiān)控血液NAT過程，評估和確認(rèn)過程的穩(wěn)定性及可靠性，本單位目前采用幾種指標(biāo)對NAT日常運行情況進行監(jiān)控，均于每月初對上個月的試驗進行情況進行回顧性分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 對本單位NAT實驗室2018年1月至2019年12月NAT基本情況進行回顧性分析，數(shù)據(jù)來源于《啟奧血站管理信息系統(tǒng)》和實驗室日常記錄。

1.2儀器與試劑 主要試劑：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)試劑(廈門新創(chuàng)、上海科華)；丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)試劑(廈門新創(chuàng)、北京萬泰)；人類免疫缺陷病毒(HIV)抗原/抗體(1+2型)試劑(廈門新創(chuàng)、珠海麗珠)；梅毒螺旋體抗體(抗-TP)試劑(廈門新創(chuàng)、北京萬泰)；乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、HIV(1+2型)NAT試劑盒(PCR-熒光法，羅氏公司)。配套耗材由試劑廠家提供，均在有效期內(nèi)使用，且嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作。主要儀器：STAR全自動加樣儀(瑞士HAMILTON)；FAME全自動酶免分析儀(瑞士HAMILTON)；Cobas s201全自動NAT系統(tǒng)(羅氏公司，A/B兩套)。所有儀器使用前均進行了校準(zhǔn)和維護。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS21.0軟件進行數(shù)據(jù)處理和分析，計數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較行χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1總體質(zhì)量監(jiān)測指標(biāo)

2.1.1檢測人份數(shù) NAT共計檢測95 428人份，其中2018年檢測量為47 090人份，2019年檢測量為48 338人份。見圖1。

圖1 NAT的標(biāo)本數(shù)

2.1.2不合格率 NAT不合格率為0.10%(95/95 428，其中1例為HIV，其余均為HBV)。2018年NAT不合格率為0.13%(59/47 090)，12月不合格率最高，為0.26%(11/4 248)；2019年NAT不合格率為0.07%(36/48 338)，7月不合格率最高，為0.16%(6/3 841)。NAT不合格率與HBsAg不合格率隨時間的變化趨勢基本一致。見圖2。

圖2 NAT和HBsAg不合格率

2.2檢測中質(zhì)量監(jiān)測指標(biāo)

2.2.1拆分反應(yīng)率 NAT拆分反應(yīng)率為57.06%(93/163)，其中2018年拆分反應(yīng)率為64.77%(57/88)，4月和10月拆分反應(yīng)率較高，分別為87.50%(7/8)和100.00%(3/3)；2019年拆分反應(yīng)率為48.00%(36/75)，1月拆分反應(yīng)率最高，為80.00%(4/5)，4月拆分反應(yīng)率最低，為0(0/3)。見圖3。2019年未拆出混樣孔為39個，其中25個混樣孔CT值大于38。

圖3 NAT拆分反應(yīng)率

2.2.2無效批次率 NAT無效批次率為2.03%(22/1 086)，其中2018年無效批次率為2.23%(12/538)，11月最高，為8.51%(4/47)；2019年無效批次率為1.82%(10/548)，9月最高，為5.56%(3/54)。

2.2.3無效結(jié)果率 NAT無效結(jié)果率為2.26%(2 272/100 446)。其中2018年無效結(jié)果率為2.52%(1 222/48 436)，11月最高，為11.61%(486/4 187)；2019年無效結(jié)果率為2.02%(1 050/52 010)，9月最高，為6.38%(342/5 362)。無效結(jié)果類型混樣孔數(shù)統(tǒng)計中，陽性對照無效引起結(jié)果無效占比最大，其次為設(shè)備故障和擴增曲線異常。擴增曲線異常引起結(jié)果無效97個，其中95個發(fā)生在A套設(shè)備，2個發(fā)生在B套設(shè)備。見圖4、表1。

圖4 NAT無效結(jié)果率

表1 NAT無效結(jié)果類型混樣孔數(shù)統(tǒng)計[%(n/n),n=416]

2.3支持過程的質(zhì)量監(jiān)測指標(biāo)

2.3.1設(shè)備故障率 NAT設(shè)備故障率為12.05%(88/730)，其中9月、10月和12月較高，分別為46.67%(28/60)、22.58%(14/62)和12.90%(8/62)；A套設(shè)備(2012年10月投入使用)故障率明顯高于B套設(shè)備(2017年8月投入使用)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.980，P<0.05)；上半年設(shè)備故障率為7.18%(26/362)，下半年設(shè)備故障率為16.85%(62/368)，下半年設(shè)備故障率明顯高于上半年，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=13.772，P<0.05)。2018年設(shè)備故障率為12.60%(46/365)，A套設(shè)備故障率為6.85%(25/365)，B套設(shè)備故障率為5.75%(21/365)；2019年設(shè)備故障率為11.51%(42/365)，A套設(shè)備故障率為9.59%(35/365)，B套設(shè)備故障率為1.92%(7/365)。B套設(shè)備2018年故障率明顯高于2019年，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.744，P<0.05)。

2.3.2試劑使用率 NAT試劑使用率為131.08%(125 084/95 428)，其中2018年試劑使用率為130.24%(61 330/47 090)，5月、8月和11月較高，分別為137.25%(4 580/3 337)、141.60%(5 436/3 839)和140.60%(5 382/3 828)；2019年試劑使用率為131.89%(63 754/48 338)，1月和8月較高，分別為138.93%(4 721/3 398)和137.22%(4 996/3 641)。見圖5。

圖5 NAT試劑使用率

3 討 論

2018年和2019年NAT月檢測量變化趨勢基本一致。9月、10月和12月檢測量較大(圖1)，設(shè)備故障率也較高(其中9月最高，為46.67%)，可能原因為在工作量加大的情況下，設(shè)備運行風(fēng)險會相應(yīng)增加[2]，這提示實驗室要增加設(shè)備維護頻次。兩年間2月NAT檢測量均較小，但拆分反應(yīng)率均不高(圖3)，與張妍等[12]報道結(jié)果一致。可能是因為標(biāo)本量少或節(jié)假日(中國春節(jié)假期一般在2月)時，操作人員的責(zé)任心下降，實驗室的清潔消毒不到位。因此，實驗室一定要加強節(jié)假日期間的監(jiān)督管理。

本實驗室NAT除檢出1例HIV窗口期標(biāo)本外，其余均為HBV，NAT不合格率可結(jié)合HBsAg檢出率同步分析。NAT不合格率與HBsAg不合格率各月份的變化趨勢基本一致(圖2)。NAT不合格率反映實驗室檢測的穩(wěn)定性，在一定時期內(nèi)應(yīng)處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)[13]。本研究顯示，2018年12月NAT不合格率異常升高，達到了0.26%，而HBsAg檢出率并未升高，提示NAT過程存在異常。分析發(fā)現(xiàn)，本實驗室從2018年12月起外部陽性質(zhì)控品隨機放入標(biāo)本間參與混樣操作，質(zhì)控品在放樣和處理過程中易造成標(biāo)本污染。實驗室采取了以下措施使NAT不合格率恢復(fù)正常：(1)質(zhì)控品作為弱陽性標(biāo)本，最后開蓋放到樣本架上，避免長時間處于開蓋狀態(tài)，造成氣溶膠污染；(2)質(zhì)控品放置時避免經(jīng)過開蓋的標(biāo)本；(3)觸摸完質(zhì)控品的手套立即丟棄，并更換新手套；(4)質(zhì)控品加樣完成后，盡快蓋上蓋子。2019年4月和12月NAT不合格率和拆分反應(yīng)率均較低，而HBsAg不合格率均較高，提示NAT靈敏度可能下降，實驗室需加強檢測過程中各關(guān)鍵點的控制。2019年7月NAT不合格率(0.16%)和HBsAg不合格率(0.35%)均較高，拆分反應(yīng)率也較高(66.67%)，判斷應(yīng)為輸血感染風(fēng)險較大的獻血者增加所導(dǎo)致[14]。

2019年本實驗室NAT拆分反應(yīng)率為48.00%，低于使用相同檢測系統(tǒng)的徐州地區(qū)(63.30%)[15]和渭南地區(qū)(61.11%)[16]。據(jù)報道，某實驗室所用檢測系統(tǒng)的拆分反應(yīng)率應(yīng)為60%左右[12]。分析未拆出混樣孔CT值發(fā)現(xiàn)，共有39個混樣孔未拆出，其中25個混樣孔CT值>38，提示假陽性增加?？赡茉蛉缦拢?1)清潔消毒不到位；(2)實驗室新增兩名檢測人員，基礎(chǔ)理論較薄弱，操作規(guī)范性較差；(3)實驗室通風(fēng)效果不佳，本實驗室是2012年改造的，自然通風(fēng)條件較差，增加了污染風(fēng)險；(4)實驗室周圍房屋拆建，環(huán)境清潔度下降；(5)外部陽性質(zhì)控品采用混樣模式檢測，易造成標(biāo)本污染；(6)標(biāo)本采用直拔式開蓋機開蓋，易造成標(biāo)本間交叉污染。針對以上情況，實驗室采取了以下措施：(1)增加清潔消毒頻次，并延長實驗室通風(fēng)時間；(2)加強操作人員培訓(xùn)，提高操作技能和工作責(zé)任心；(3)請廠家工程師到現(xiàn)場指導(dǎo)，進一步規(guī)范操作；(4)停止使用開蓋機，采用手動開蓋。通過以上措施，2020年1月和2月拆分反應(yīng)率分別上升至50.00%和70.00%。為了保證NAT的質(zhì)量，首先，實驗室建設(shè)時要保證良好的自然通風(fēng)效果；其次，實驗室若采用開蓋機對標(biāo)本進行開蓋，盡量選擇螺旋式開蓋的開蓋機，避免標(biāo)本間交叉污染；另外，NAT對操作人員的綜合素質(zhì)要求較高，盡量選擇理論知識較扎實，工作責(zé)任心較強，進行了NAT操作培訓(xùn)的工作人員。

本實驗室NAT無效批次率為2.03%，低于上海地區(qū)(2.71%)[17]和自貢地區(qū)(3.67%)[18]，無效結(jié)果率為2.26%，低于鄭州地區(qū)(2.62%)[19]，主要由陽性對照無效、設(shè)備故障和擴增曲線異常引起，與蔡華英等[18]報道結(jié)果一致。分析發(fā)現(xiàn)，A套設(shè)備(2012年10月投入使用)故障率明顯高于B套設(shè)備(2017年8月投入使用)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.980，P<0.05)，可能隨著設(shè)備老化，故障率升高。B套設(shè)備2018年故障率明顯高于2019年，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.744，P<0.05)，提示與新設(shè)備運行不穩(wěn)定有關(guān)。下半年設(shè)備故障率明顯高于上半年，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=13.772，P<0.05)，可能原因為中國南方地區(qū)下半年天氣濕冷，設(shè)備易發(fā)生故障。查看擴增曲線異常引起結(jié)果無效的97個混樣孔發(fā)現(xiàn)，其中95個發(fā)生在A套設(shè)備，2個發(fā)生在B套設(shè)備。可能隨著設(shè)備使用年限增加，設(shè)備內(nèi)部管路清潔度下降和各檢測部件老化，設(shè)備穩(wěn)定性下降。因此，實驗室使用年限較長的設(shè)備要增加維護保養(yǎng)頻次，并請廠家設(shè)備工程師做好設(shè)備年度保養(yǎng)[20]，減少工作負(fù)荷[21]，必要時更換核酸提取儀的所有管路系統(tǒng)。

本實驗室NAT設(shè)備故障率較高(12.05%)，主要原因是本實驗室有兩套NAT設(shè)備，其中一套設(shè)備故障后，實驗室會啟用另一套設(shè)備進行檢測，未及時催促維修工程師到現(xiàn)場對設(shè)備進行維修，導(dǎo)致設(shè)備不能投入使用的時間較長。

2018年5月和11月試劑使用率較高，分析發(fā)現(xiàn)主要與結(jié)果無效引起試劑浪費有關(guān)。2018年8月和2019年1、8月試劑使用率也較高，主要與檢測標(biāo)本量不“滿架”造成試劑浪費有關(guān)。因此，為了減少試劑損耗，要加強試驗過程中各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，減少因人為操作不到位而導(dǎo)致的試劑報廢。此外，在保證NAT質(zhì)量的前提下，盡量“滿架”檢測。

綜上所述，NAT質(zhì)量監(jiān)測指標(biāo)能發(fā)現(xiàn)檢測過程中潛在的風(fēng)險因素，便于及時采取糾正、預(yù)防措施，實現(xiàn)實驗室質(zhì)量體系的持續(xù)改進。