頸動(dòng)脈超聲聯(lián)合血清微小RNA檢測(cè)對(duì)短期繼發(fā)腦梗死的診斷價(jià)值*

王適達(dá)，王海虹，張立娜

河北省保定市第二中心醫(yī)院：1.功能科；2.神經(jīng)內(nèi)科；3.老年病科，河北保定 072750

短期繼發(fā)腦梗死指缺血性腦卒中，屬于腦血管疾病，致病原因有腦部缺氧、血液循環(huán)障礙、腦部缺血等，按照臨床表現(xiàn)可分為腔隙性梗死、部分前循環(huán)梗死、全前循環(huán)梗死、后循環(huán)梗死[1-3]。有資料證明,動(dòng)脈栓塞、血栓形成、載體動(dòng)脈病變堵塞穿支動(dòng)脈、心肌病等也會(huì)導(dǎo)致此病的發(fā)生[4]。目前可以通過超聲、CT、磁共振(MRI)等對(duì)該病進(jìn)行檢查。血液檢查具有快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。有研究顯示，通過微小RNA檢測(cè)可以很快地幫助醫(yī)生判斷短期繼發(fā)腦梗死患者病情嚴(yán)重程度，及時(shí)對(duì)患者給予正確的治療，避免不良事件的發(fā)生。除此之外，頸動(dòng)脈超聲也可以很好地幫助醫(yī)生診斷此病，但目前臨床工作中關(guān)于miR-124、miR-155、miR-23與頸動(dòng)脈超聲聯(lián)合檢測(cè)的相關(guān)文章較少，本文旨在研究頸動(dòng)脈超聲與血清miR-124、miR-155、miR-23聯(lián)合檢測(cè)對(duì)短期繼發(fā)腦梗死的診斷價(jià)值及影像學(xué)特征，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年6月至2020年6月在本院治療的58例短期繼發(fā)腦梗死患者納入短期繼發(fā)腦梗死組，其中男28例，女30例；年齡60～74歲，平均(63.65±6.65)歲。選取同期在本院體檢的58例健康體檢者納入對(duì)照組，其中男29例，女29例；年齡61～75歲，平均(64.6±6.65)歲。兩組年齡、性別等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究中的研究對(duì)象及家屬均知情并簽署知情同意書，經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有短期繼發(fā)腦梗死患者均經(jīng)檢查后確診，符合《中國(guó)腦梗死中西醫(yī)結(jié)合診治指南(2017)》[5]中短期繼發(fā)腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：哺乳期、妊娠期女性，精神病患者，腦部創(chuàng)傷患者，合并其他腫瘤患者。

1.2方法

1.2.1頸動(dòng)脈超聲 采用TOSHIBA公司Aplio300型彩色多普勒聲像儀進(jìn)行頸動(dòng)脈彩超檢查，并進(jìn)行腦部超聲檢查，使用10 MHz線陣式探頭，對(duì)短期繼發(fā)腦梗死患者頸內(nèi)外動(dòng)脈、雙側(cè)頸總動(dòng)脈、顱腦部進(jìn)行檢查。觀察并判斷狹窄的位置，在狹窄處測(cè)定血管狹窄程度。狹窄程度判斷：≤50%為輕度狹窄，>50%～75%為中度狹窄，>75%～99%為重度狹窄。超聲檢查：雙側(cè)側(cè)腦室擴(kuò)張，內(nèi)充滿強(qiáng)回聲，腦組織內(nèi)出現(xiàn)強(qiáng)回聲區(qū)，腦組織受壓變薄，中線移位，側(cè)腦室受壓變形為腦實(shí)質(zhì)出血；側(cè)腦室下方尾狀核頭部一個(gè)或多個(gè)強(qiáng)回聲團(tuán)，冠狀位前角出現(xiàn)為腦室出血；硬腦膜帶狀強(qiáng)回聲與顱骨之間顯示帶狀或不規(guī)則形無(wú)回聲，慢性呈低或強(qiáng)回聲為血腫。

1.2.2MRI檢查 采用西門子1.5T MRI掃描儀進(jìn)行檢查，自旋回波，然后對(duì)顱腦部進(jìn)行掃描。所得圖像均由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的心腦血管疾病醫(yī)生進(jìn)行閱片。MRI檢查表現(xiàn)為血液長(zhǎng)T1、長(zhǎng)T2信號(hào)，彌散像呈高信號(hào)，血腫處T1、T2均呈明顯高信號(hào)，T2周邊見線樣低信號(hào)環(huán)的為腦實(shí)質(zhì)出血；MRI檢查表現(xiàn)為局部不規(guī)則低密度區(qū)，腦血管造影處可見不規(guī)則且扭曲的血管團(tuán)為腦室出血；MRI檢查表現(xiàn)為T1加權(quán)像上呈低信號(hào)，周圍可形成相對(duì)比較明顯的水腫帶為血腫。

1.2.3miR-124、miR-155、miR-23檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)血清miR-124、miR-155、miR-23水平，使用紫外分光光度儀檢測(cè)所提取的RNA純度，總RNA純度鑒定運(yùn)用聚丙烯酰胺凝膠電泳。利用PCR試劑盒合成cDNA。反轉(zhuǎn)錄：14 μL模板RNA、2 μL Enzyme mix，4 μL 5×RT緩沖液補(bǔ)至20 μL，之后將所合成的cDNA放置于溫度為-20 ℃冰箱內(nèi)進(jìn)行保存。反應(yīng)體系：8 μL cDNA模板、10 μL SYBRP Green mix、2 μL PCR Primer mix。反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min；95 ℃ 10 s；60 ℃ 1 min；40個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算miR-124、miR-155、miR-23水平。miR-124引物序列：上游為5′-GAGGATCTTCATGAGGTAGTCAGT-3′，下游為5′-CTGGCACCACACCTTCTACAATGAGC-3′；miR-155引物序列：上游為5′TAGAAGGCACAGTCGAGG-3′，下游為5′-CAGGAAACAGCTATGAC-3′；miR-23引物序列：上游為5′-GCCTGAGACTCTGCCTTCTG-3′，下游為5′-CAGCTGCATTGGATTTACCA-3′。

2 結(jié) 果

2.1頸動(dòng)脈超聲、MRI對(duì)短期繼發(fā)腦梗死患者頸動(dòng)脈狹窄程度的檢出情況 以臨床診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，與頸動(dòng)脈MRI檢查相比，頸動(dòng)脈超聲檢查的檢出率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 頸動(dòng)脈超聲、MRI對(duì)短期繼發(fā)腦梗死患者頸動(dòng)脈狹窄程度的檢出情況[n(%)]

2.2短期繼發(fā)腦梗死患者頸動(dòng)脈超聲、MRI檢查的影像學(xué)特征 與MRI檢查相比，超聲檢查出硬膜下出血、腦實(shí)質(zhì)出血、腦室出血、血腫的檢出率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 短期繼發(fā)腦梗死患者頸動(dòng)脈超聲、MRI檢查的影像特征情況比較[n(%)]

2.3短期繼發(fā)腦梗死組與對(duì)照組miR-124、miR-155、miR-23水平比較 與對(duì)照組相比，短期繼發(fā)腦梗死組miR-124、miR-155、miR-23水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組miR-124、miR-155、miR-23水平比較

2.4頸動(dòng)脈超聲、MRI分別聯(lián)合miR-124、miR-155、miR-23檢測(cè)對(duì)短期繼發(fā)腦梗死的診斷價(jià)值 與MRI聯(lián)合miR-124、miR-155、miR-23檢測(cè)相比，頸動(dòng)脈超聲聯(lián)合miR-124、miR-155、miR-23檢測(cè)診斷短期繼發(fā)腦梗死的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 頸動(dòng)脈超聲、MRI分別聯(lián)合miR-124、miR-155、miR-23檢測(cè)對(duì)短期繼發(fā)腦梗死的診斷價(jià)值比較(%)

如圖1所示，超聲檢查發(fā)現(xiàn)短期繼發(fā)腦梗死患者左側(cè)大腦中動(dòng)脈及中動(dòng)脈上干閉塞，左側(cè)大腦前動(dòng)脈通過軟膜支向大腦中動(dòng)脈區(qū)域代償供血。圖2提示MRI檢查發(fā)現(xiàn)患者腦實(shí)質(zhì)出血，基底核密度稍減低，右側(cè)顳葉腦溝變淺，增強(qiáng)后患者出血位置表現(xiàn)為不同程度的強(qiáng)化。

注：A為左側(cè)大腦中動(dòng)脈及中動(dòng)脈上干閉塞；B為左側(cè)大腦前動(dòng)脈通過軟膜支向大腦中動(dòng)脈區(qū)域代償供血。

2.5miR-124、miR-155、miR-23、頸動(dòng)脈超聲對(duì)短期繼發(fā)腦梗死的診斷價(jià)值 ROC曲線分析提示，4項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

注：A為腦實(shí)質(zhì)出血；B為左側(cè)顳葉腦溝變淺。

表5 miR-124、miR-155、miR-23、頸動(dòng)脈超聲對(duì)短期繼發(fā)腦梗死的診斷價(jià)值

3 討 論

短期繼發(fā)腦梗死是腦血管疾病中最常見的類型，占腦血管疾病的70%，發(fā)病人群主要集中在肥胖者、高血壓患者、糖尿病患者、中老年人群，其中老年人患病率較高[6]。短期繼發(fā)腦梗死可以從病因、梗死部位進(jìn)行疾病分類[7]。其中中期短期繼發(fā)腦梗死患者多出現(xiàn)四肢癱、意識(shí)障礙、昏迷、應(yīng)激性潰瘍等癥狀[8-9]。

醫(yī)學(xué)影像學(xué)可以擴(kuò)大疾病在人體的檢查范圍，目前影像學(xué)診斷還在不斷發(fā)展。MRI是由射頻系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)圖像重建系統(tǒng)、磁鐵系統(tǒng)組成的，分析的方式有灰度像素點(diǎn)、全局圖像、灰度定位，能有效區(qū)分患者腫瘤組織、炎癥信號(hào)等[10-11]。曹曉軒等[12]研究發(fā)現(xiàn)，通過MRI檢查可以幫助醫(yī)生快速掌握短期繼發(fā)腦梗死的病理特征，但是MRI檢查可能會(huì)對(duì)部分患者造成一定的不適感。頸動(dòng)脈超聲檢查是檢測(cè)此類疾病最為常見的方法，屬于非創(chuàng)傷性檢查技術(shù)，可以很好地評(píng)估大動(dòng)脈血管病變的程度及血液流動(dòng)的情況，幫助醫(yī)生評(píng)估病情及判斷預(yù)后情況[13]。馮錦麗等[14]研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)脈的狹窄程度與該病的發(fā)生有明顯的相關(guān)性，尤其是頸動(dòng)脈狹窄超出50%的患者其患病率明顯增高，證實(shí)了頸動(dòng)脈超聲可以用來(lái)判斷是否存在異常病變。以上結(jié)果說(shuō)明，通過頸動(dòng)脈超聲檢查可以很好地檢測(cè)并由此觀察短期繼發(fā)腦梗死的影像表現(xiàn)，可以很好地幫助醫(yī)生進(jìn)行診斷，也可以更快地給出針對(duì)性的治療方案。

miR-124、miR-155、miR-23水平的變化可反映短期繼發(fā)腦梗死的嚴(yán)重程度，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)miR-124、miR-155、miR-23參與腦梗死的發(fā)病過程，顯示出炎癥的損傷程度。miR-124是一種使巨噬細(xì)胞活化和小膠質(zhì)細(xì)胞靜止的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，可以達(dá)到促進(jìn)康復(fù)的作用[15]。miR-124檢測(cè)為陽(yáng)性的患者，病死率要高于陰性的患者(在正常值的范圍內(nèi)可促進(jìn)康復(fù)，在疾病狀態(tài)下該指標(biāo)不處于正常值范圍，而是處于上升狀態(tài)，故病死率較高)[16]。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，miR-124可能參與了疾病的進(jìn)展及整個(gè)病理生理的過程，可影響炎性反應(yīng)及對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控等，對(duì)預(yù)后同樣具有重要的影響[17-18]。而miR-155可調(diào)控急性炎癥，可以起到一定的免疫抑制作用。王興萍等[19]研究發(fā)現(xiàn)，miR-155的表達(dá)量可以反映出機(jī)體炎性反應(yīng)，其中效應(yīng)性T細(xì)胞以及特異性抗體的產(chǎn)生，可以在特異性免疫及固有免疫中起到關(guān)鍵的作用，并參與短期繼發(fā)腦梗死的炎性反應(yīng)[20]。頸動(dòng)脈超聲聯(lián)合血清miR-124、miR-155、miR-23檢測(cè)短期繼發(fā)腦梗死的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度較高，說(shuō)明4項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能較高[21]。本研究中短期繼發(fā)腦梗死患者以重度狹窄患者為主，患者分布較為集中，因此需要加大樣本量進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)頸動(dòng)脈超聲聯(lián)合血清miR-124、miR-155、miR-23檢測(cè)對(duì)短期繼發(fā)腦梗死具有較高的診斷價(jià)值。